写出三种分离纯化酶蛋白的方法，并简述其原理.
题目
写出三种分离纯化酶蛋白的方法，并简述其原理.
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第1题：
常用的蛋白质分离纯化方法有哪几种？各自的原理是什么？
正确答案: 1、沉淀：向蛋白质水溶液中加入浓的无机盐溶液，可使蛋白质的溶解度降低，而从溶液中析出。
2、电泳：蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中是带电的，在电场中能向电场的正极或负极移动。根据支撑物不同，有薄膜电泳、凝胶电泳等。
3、透析：利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。
4、层析：A.离子交换层析，利用蛋白质的两性游离性质，在某一特定pH时，各蛋白质的电荷量及性质不同，故可以通过离子交换层析得以分离。如阴离子交换层析，含负电量小的蛋白质首先被洗脱下来。B.分子筛，又称凝胶过滤。小分子蛋白质进入孔内，滞留时间长，大分子蛋白质不能进入孔内而径直流出。
5、超速离心：既可以用来分离纯化蛋白质，也可以用作测定蛋白质的分子量。不同蛋白质因其密度与形态各不相同而分开。 -
第2题：
简述蛋白质类药物的分离纯化方法？
正确答案: ①沉淀法
②按分子大小分离的方法
③按分子所带电荷进行分离的方法
④亲和层析法 -
第3题：
写出5种常用阀门名称并简述其工作原理？
正确答案: （1）闸阀：工作原理：闸阀的闸报沿阀座中心线的垂直方向移动，使闸阀板密封面贴合，并依靠顶楔、弹簧或闸阀的楔形来增强密封条，从而阻止介质通过。
（2）截止阀：截止阀的阀瓣沿阀座中心垂直移动，依靠阀杆螺纹的施压，使阀瓣密封面紧贴密贴合，从而截止介质流通。
（3）单向阀：依靠流体本身的压力变化，使关闭件在阀体内摆动或移动，来自动启闭管路，限制介质逆向流动。
（4）蝶阀：蝶阀阀瓣为一圆盘，可围绕阀座内的轴旋转来达到启闭目的。
（5）球阀：球阀的阀瓣为一通心球体，用球体绕阀体中心做旋转，以达到启闭的目的。 -
第4题：
写出至少三种分离纯化酶蛋白的方法，并作简要叙述。
正确答案:沉淀分离：沉淀分离是通过改变某些条件或添加某种物质，使酶的溶解度降低，而从溶液中析出，与其它溶质分离的技术过程。通常包括盐析沉淀，等电点沉淀，有机溶剂沉淀，复合沉淀，选择性变性沉淀。
离心分离：离心分离是借助于离心机旋转所产生的离心力，使不同大小，不同密度的物质分离的过程。通过调节离心速度或者其他条件的大小，可以讲密度或者分子量不同的物质沉降分离。
过滤：根据过滤介质截留的物质颗粒大小不同，来达到过滤的目的；通常包括粗滤，微滤，超滤，反渗透。
膜分离：借由一定孔径的高分子薄膜将不同大小，不同形状和不同特性的物质颗粒和分推动力的不同，膜分离可以分为：
①加压膜分离：包括微滤，超滤，反渗透。
②电场膜分离：包括电渗析和离子交换膜渗析。
③扩散膜分离：主要是透析
层析分离：利用混合物中各组分的物理化学性质的差别，使各组分以不同程度分布在两个相中，其中一个相为固定的（称为固定相）另一个相则流过此固定相（称为流动相），并使各组分以不同速度移动，从而达到分离的目的。主要的层析方法有：吸附层析；分配层析；离子交换层析；凝胶层析；亲和层析；层析聚焦
电泳分离：是带电粒子在电场中向着与其本身所带电荷相反的电极移动的过程。 -
第5题：
酶的分离纯化方法中，根据目的酶与杂质分子大小差别有（），（）和（）三种。
正确答案:凝胶过滤法；超滤法；超离心法 -
第6题：
简述酶纯化的方法及原理。
正确答案: （1）盐析法，中性盐对蛋白质有显著影响，一般在低盐浓度下随着盐浓度升高，蛋白质的溶解度增加，此称盐溶，当盐浓度继续升高时，蛋白质溶解度不同程度地下降并先后析出，这就是盐析；
（2）等电点沉淀法，蛋白质在静电状态时颗粒之间的静电作用最小，各种蛋白质等电点有差别，可利用调节溶液pH值达到某一蛋白质等电点，使之沉淀，但此方法很少到独用，一般与盐析法结合；
（3）有机溶剂沉淀法，由于有机溶剂能降低溶液的介电常数、破坏蛋白质表面的水化层，故可用不同蛋白质在不同浓度的有机溶剂中溶解度差异而分离沉淀酶蛋白；
（4）聚合物絮凝剂沉淀，聚合物絮凝剂，如葡萄糖和聚乙二醇，与酶分子争夺水分子，具有破坏作用使酶沉淀；（5）用金属离子络合物沉淀，酶和其他蛋白质都会形成金属盐，其溶解度较低，用金属离子沉淀的缺点是酶与金属离子作用后，可逆变较差。5试论转基因食品的安全性。答：许多转基因食品生物本身能产生大量的毒性物质和抗营养因子，以抵抗病原菌和害虫的入侵，传统食品中这种物质含量低或者在加工中可以除去，因此并不影响人体健康。但是，转基因食品，特别是抗虫转基因食品的作物的产品，则有可能增加这种物质的含量或改变这种物质的结构，使其在加工过程中很难破坏，造成对更多的科学家的试验表明转基因食品是安全的。赞同这个观点的科学家主要有以下几个理由。首先，任何一种转基因食品在上市之前都进行了大量的科学试验，国家和政府有相关的法律法规进行约束，而科学家们也都抱有很严谨的治学态度。另外，传统的作物在种植的时候农民会使用农药来保证质量，而有些抗病虫的转基因食品无需喷洒农药。还有，一种食品会不会造成中毒主要是看它在人体内有没有受体和能不能被代谢掉，转化的基因是经过筛选的、作用明确的，所以转基因成分不会在人体内积累，也就不会有害。我认为转基因食品，即使目前没有研究证实对肌体的危害有多大，但我们还是应该持谨慎的态度，生活中，尽量能避免就避免，不能避免的尽量少食用。 -
第7题：
简述酶沉淀分离的主要方法及其原理。
正确答案: 沉淀分离的方法主要有盐析沉淀法、等电点沉淀法、有机溶剂沉淀法、复合沉淀法、选择性变性沉淀法等。
（1）、盐析沉淀法：盐析沉淀法简称盐析法，是利用不同蛋白质在不同的盐浓度条件下溶解度不同的特性，通过在酶液中添加一定浓度的中性盐。使酶或杂质从溶液中析出沉淀，从而使酶与杂质分离的过程。蛋白质在水中的溶解度收到溶液中盐浓度的影响。在盐浓度达到到一定浓度后，蛋白质的溶解度随盐浓度的升高而降低，结果使蛋白质沉淀析出，这种现象称为盐析。在某一浓度的盐浓度中，不同蛋白质的溶解度各不相同，由此可达到彼此分离的目的。盐之所以会改变蛋白质的溶解度，是由于盐在溶液中离解为正离子和负离子。由于反离子作用，使蛋白质分子表面的电荷改变，同时由于离子的存在改变了溶液中水的活度，使分子表面的水化膜改变。
（2）、等电点沉淀法：利用两性电解质在等电点时溶解度最低，以及不同的两性电解质有不同的等电点这一特性，通过调节溶液的pH，使酶或杂质沉淀析出，从而使酶与杂质分离的方法称为等电点沉淀法。在溶液的pH等于溶液中某两性电解质的等电点时，该两性电解质分子的净电荷为零，分子间的静电斥力消除，使分子能聚集在一起而沉淀下来。
（3）、有机溶剂沉淀法：利用酶与其他杂质在有机溶剂中的溶解度不同，通过添加一定量的某种有机溶剂，使酶或杂质沉淀析出，从而使酶与杂质分离的方法称为有机溶剂沉淀法。有机溶剂之所以能使酶沉淀析出。主要是由于有机溶剂的存在会使溶剂的介电常数降低。溶液的介电常数降低，就使溶质分子间的静电引力增大，互相吸引而易于凝集，同时，对于具有水膜的分子来说，有机溶剂与谁互相作用，使溶质分子表面的水膜破坏，也使其溶解度降低而沉淀析出。
（4）、复合沉淀法：在酶液中加入某些物质，使它与酶形成复合物而沉淀下来，从而使酶与杂质分离的方法称为复合沉淀法。复合沉淀法可以与酶分子形成复合物，复合物的溶解度降低，从而使沉淀析出，（5）、选择性变性沉淀法：选择一定的条件使酶液中存在的某些杂蛋白等杂质变性沉淀，而不影响所需的酶，这种分离方法称为选择性变性沉淀。选择性变性沉淀法是选择某个适宜的条件某些杂质而沉淀析出，而又对酶没有明显影响，所以可以达到分离的目的。 -
第8题：
问答题写出三种分离纯化酶蛋白的方法，并简述其原理.正确答案： 方法透析与超虑离心分离凝胶过滤盐析等电点沉淀共沉淀吸附层析电泳亲和层析热变性酸碱变性表面变性等离子交换层析原理：根据待分离物质带电性质不同的分离纯化方法。凝胶层析原理：利用某些凝胶对于不同分子大小的组分阻滞作用的不同。大分子物质不能进入凝胶孔内，在凝胶颗粒之间的空隙向下移动，并最先被洗脱出来；小分子物质可自由出入凝胶孔，流程长而后流出层析柱。等电点沉淀法原理：蛋白质在等电点时溶解度最低；不同的蛋白质具有不同的等电点使用方法：单独使用较少（用于从粗酶液中除去某些等电点相距较大的杂蛋白），多与其它方法联使用（如盐析法、有机溶剂法），因蛋白质在等电点时仍有一定的溶解度.亲和层析原理：利用生物大分子间特异的亲和力来纯化生物大分子.体通过适当的化学反应共价的连接到载体上，待纯化的物质可被配体吸附，杂质则不被吸附，从层析柱流出，变换洗脱条件，即可将分离的物质洗脱下来，实现分离提纯解析： 暂无解析 -
第9题：
问答题简述生物活性物质分离纯化的主要原理。正确答案： 生物大分子分离纯化的主要原理是：
1）根据分子形状和大小不同进行分离，如差速离心与超离心、膜分离、凝胶过滤等；
2）根据分子电离性质（带电性）差异进行分离，如离子交换法、电泳法、等电聚焦法；
3）根据分子极性大小及溶解度不同进行分离，如溶剂提取法、逆流分配法、分配层析法、盐析法、等电点沉淀及有机溶剂分级沉淀等；
4）根据物质吸附性质的不同进行分离，如选择性吸附与吸附层析等；
5）根据配体特异性进行分离，如亲和层析法等。解析： 暂无解析 -
第10题：
问答题比较蛋白质的分离纯化技术中凝胶过滤和超过滤方法的原理。正确答案： 凝胶过滤和超过滤都是蛋白质分离纯化过程中常用的技术，但是其原理和操作都不相同。凝胶过滤是根据蛋白质分子的大小将样品中的各种蛋白质分子分开，具体操作是将样品通过装有一定规格凝胶的凝胶过滤柱，小分子的蛋白质进入凝胶孔内，大分子的蛋白质留在外面，然后用洗脱液洗脱，蛋白质依分子大小被洗脱，然后是小分子的蛋白质。超过滤是利用蛋白质分子不能穿过半透膜的特性除去蛋白质混合物中的小分子物质，具体操作是将样品装入透析袋，然后利用高压或离心力，迫使蛋白质样品中的非蛋白的小.分子溶质通过半透膜，蛋白质留在透析袋内。解析： 暂无解析 -
第11题：
问答题简述酶分离纯化方法及工艺程序的选择策略。正确答案： （1）先选用非特异的、低分辨的技术，去除主要的杂质并使酶溶液浓缩；如沉淀、超滤和吸附等。
（2）随后采用高效分离的手段；如离子交换层析、亲和层析。
（3）将最昂贵、最费时的分离单元放在最后阶段。如凝胶过滤层析。解析： 暂无解析 -
第12题：
填空题酶的分离纯化方法中，根据目的酶与杂质分子大小差别有（）法，（）法和（）法三种。正确答案： 凝胶过滤,超滤,超离心解析： 暂无解析 -
第13题：
色谱方法共分几类？常用的蛋白质分离方法有哪些？并简述其原理
正确答案: 吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、凝胶色谱 -
第14题：
谷糙分离有哪三种常用的方法？简述其中一种分离方法的原理？
正确答案:1。筛选法：利用稻谷和糙米粒度的差异及其自动分级特性进行分离，常用的设备是谷糙分离平转筛2.比重分离法：利用稻谷和糙米比重不同及其分组性进行分离，常用的设备是；重力谷糙分离机3.弹性分离法：利用稻谷和糙米弹性差异及其自动分级特性，面进行谷糙分离，常用的设备是：撞击谷糙分离机。 -
第15题：
写出三种分离纯化酶蛋白的方法，并简述其原理.
正确答案:方法透析与超虑离心分离凝胶过滤盐析等电点沉淀共沉淀吸附层析电泳亲和层析热变性酸碱变性表面变性等离子交换层析原理：根据待分离物质带电性质不同的分离纯化方法。凝胶层析原理：利用某些凝胶对于不同分子大小的组分阻滞作用的不同。大分子物质不能进入凝胶孔内，在凝胶颗粒之间的空隙向下移动，并最先被洗脱出来；小分子物质可自由出入凝胶孔，流程长而后流出层析柱。等电点沉淀法原理：蛋白质在等电点时溶解度最低；不同的蛋白质具有不同的等电点使用方法：单独使用较少（用于从粗酶液中除去某些等电点相距较大的杂蛋白），多与其它方法联使用（如盐析法、有机溶剂法），因蛋白质在等电点时仍有一定的溶解度.亲和层析原理：利用生物大分子间特异的亲和力来纯化生物大分子.体通过适当的化学反应共价的连接到载体上，待纯化的物质可被配体吸附，杂质则不被吸附，从层析柱流出，变换洗脱条件，即可将分离的物质洗脱下来，实现分离提纯 -
第16题：
酶的分离纯化方法中，根据目的酶与杂质分子大小差别有（）法，（）法和（）法三种。
正确答案:凝胶过滤；超滤；超离心 -
第17题：
简述酶分离纯化方法及工艺程序的选择策略。
正确答案:（1）先选用非特异的、低分辨的技术，去除主要的杂质并使酶溶液浓缩；如沉淀、超滤和吸附等。
（2）随后采用高效分离的手段；如离子交换层析、亲和层析。
（3）将最昂贵、最费时的分离单元放在最后阶段。如凝胶过滤层析。 -
第18题：
简述酶分离纯化的过程？
正确答案: （1）材料的预处理：防止蛋白酶的水解作用，分离细胞器，除去核酸。
（2）细胞的破碎：机械匀浆法，超声波法，冻融法，渗透压法，酶水解法。
（3）酶的抽提。
（4）酶的分离纯化：沉淀分离法，层析法，电泳法，离心法。 -
第19题：
问答题试回答蛋白质串联亲和纯化分离原理、方法及步骤。正确答案： 串联亲和纯化（TAP），用于研究蛋白质在生理条件下的相互作用，通过嵌入一段蛋白质标记，在目的蛋白的一端或中部导入蛋白质标记，这样便在没有破坏目的蛋白调控序列的基础上，使得被标记的目标蛋白其表达量与其在细胞中自然表达水平相当，避免了由于过量表达的导致非自然条件下的蛋白质相互作用。经过特异性的两步亲和纯化，在生理条件下与目标蛋白发生真实作用的蛋白便可被一起洗脱下来，这样得到的蛋白质复合体接着可以用质谱技术或Edman降解法进行鉴定。
方法及步骤：
（1）蛋白质标记：由蛋白A的IgG结合区（ProtA）和钙调蛋白结合区（CBP）构成，中间被一个TEV蛋白酶的酶切位点隔开；
（2）构建表达标记蛋白的细胞或组织：将编码蛋白质标记的基因片段导入目标蛋白质编码基因的特定部位；
（3）细胞抽提物的准备；
（4）串联亲和纯化；
（5）蛋白质复合体的鉴定。解析： 暂无解析 -
第20题：
问答题写出至少三种分离纯化酶蛋白的方法，并作简要叙述。正确答案： 沉淀分离：沉淀分离是通过改变某些条件或添加某种物质，使酶的溶解度降低，而从溶液中析出，与其它溶质分离的技术过程。通常包括盐析沉淀，等电点沉淀，有机溶剂沉淀，复合沉淀，选择性变性沉淀。
离心分离：离心分离是借助于离心机旋转所产生的离心力，使不同大小，不同密度的物质分离的过程。通过调节离心速度或者其他条件的大小，可以讲密度或者分子量不同的物质沉降分离。
过滤：根据过滤介质截留的物质颗粒大小不同，来达到过滤的目的；通常包括粗滤，微滤，超滤，反渗透。
膜分离：借由一定孔径的高分子薄膜将不同大小，不同形状和不同特性的物质颗粒和分推动力的不同，膜分离可以分为：
①加压膜分离：包括微滤，超滤，反渗透。
②电场膜分离：包括电渗析和离子交换膜渗析。
③扩散膜分离：主要是透析
层析分离：利用混合物中各组分的物理化学性质的差别，使各组分以不同程度分布在两个相中，其中一个相为固定的（称为固定相）另一个相则流过此固定相（称为流动相），并使各组分以不同速度移动，从而达到分离的目的。主要的层析方法有：吸附层析；分配层析；离子交换层析；凝胶层析；亲和层析；层析聚焦
电泳分离：是带电粒子在电场中向着与其本身所带电荷相反的电极移动的过程。解析： 暂无解析 -
第21题：
问答题简述蛋白质类药物的分离纯化方法？正确答案： ①沉淀法
②按分子大小分离的方法
③按分子所带电荷进行分离的方法
④亲和层析法解析： 暂无解析 -
第22题：
问答题常用的蛋白质分离纯化方法有哪几种？各自的原理是什么？正确答案： 1、沉淀：向蛋白质水溶液中加入浓的无机盐溶液，可使蛋白质的溶解度降低，而从溶液中析出。
2、电泳：蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中是带电的，在电场中能向电场的正极或负极移动。根据支撑物不同，有薄膜电泳、凝胶电泳等。
3、透析：利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。
4、层析：A.离子交换层析，利用蛋白质的两性游离性质，在某一特定pH时，各蛋白质的电荷量及性质不同，故可以通过离子交换层析得以分离。如阴离子交换层析，含负电量小的蛋白质首先被洗脱下来。B.分子筛，又称凝胶过滤。小分子蛋白质进入孔内，滞留时间长，大分子蛋白质不能进入孔内而径直流出。
5、超速离心：既可以用来分离纯化蛋白质，也可以用作测定蛋白质的分子量。不同蛋白质因其密度与形态各不相同而分开。解析： 暂无解析 -
第23题：
问答题色谱方法共分几类？常用的蛋白质分离方法有哪些？并简述其原理正确答案： 吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、凝胶色谱解析： 暂无解析 -
第24题：
问答题简述生物活性物质分离纯化方法的主要原理。正确答案： 一是得用混合物中几个组分分配率的差别，把它们分配到可用机械方法分离的两个或几个物相中，如盐析，有机溶剂提取，层析和结晶等；二是将混合物置于单一物相中，通过物理力场的作用使各组分分配于来同区域而达到分离目的，如电泳，超速离心，超滤等。解析： 暂无解析