试回答蛋白质串联亲和纯化分离原理、方法及步骤。
题目
试回答蛋白质串联亲和纯化分离原理、方法及步骤。
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第1题：
简述生物活性物质分离纯化方法的主要原理。
正确答案:一是得用混合物中几个组分分配率的差别，把它们分配到可用机械方法分离的两个或几个物相中，如盐析，有机溶剂提取，层析和结晶等；二是将混合物置于单一物相中，通过物理力场的作用使各组分分配于来同区域而达到分离目的，如电泳，超速离心，超滤等。 -
第2题：
请以DEAE-C为例说明离子交换纤维素分离纯化蛋白质时的洗脱方法有哪些？并说出各种方法的洗脱原理。
正确答案:无论是升高环境的pH还是降低pH或是增加离子强度都能将被吸附物质洗脱下来。
（1）、升高环境的pH，使DEAE-C在此pH下不解离，从而不能吸附蛋白质而被洗脱下来。
（2）、降低环境的pH，使蛋白质在此pH下失去电荷，从而丧失与DEAE-C结合力而被洗脱下来。
（3）、用高浓度的同性离子根据质量作用定律将目的物离子取代下来。 -
第3题：
以生物组织为原料提取纯化多肽和蛋白质，在选择分离纯化方法时应注意哪些问题？
正确答案:（1）根据蛋白质等电点的不同来纯化蛋白质；
（2）根据蛋白质分子形状和大小的不同来纯化蛋白质；
（3）根据蛋白质溶解度的不同来纯化蛋白质；
（4）根据蛋白质电离性质的不同来纯化蛋白质；
（5）根据蛋白质功能专一性的不同来纯化蛋白质；
（6）根据蛋白质疏水基团与相应的载体基团结合来纯化蛋白质；
（7）根据蛋白质在溶剂系统中分配的不同来纯化蛋白质；
（8）根据蛋白质选择性吸附性质来纯化蛋白质；
（9）根据蛋白质的某些特殊性质进行纯化。 -
第4题：
分子筛层析（凝胶层析）分离纯化蛋白质的原理是什么？
正确答案: 1.分子量大的物质不能进入凝胶粒子内部，随洗脱液从凝胶粒子之间的空隙挤落下来，所以大分子物质迁移速度快；
2.小分子物质要通过凝胶网孔进入凝胶粒子内部，所以小分子物质迁移速度慢。 -
第5题：
串联亲和纯化耦联质谱技术
正确答案:用于研究蛋白质在生理条件下的相互作用的一种方法。通过嵌入一段蛋白质标记，在目的蛋白的一端或中部导入蛋白质标记，这样便在没有破坏目的蛋白调控序列的基础上，使得被标记的目标蛋白其表达量与其在细胞中自然表达水平相当，避免了由于过量表达的导致非自然条件下的蛋白质相互作用。经过特异性的两步亲和纯化，在生理条件下与目标蛋白发生真实作用的蛋白便可被一起洗脱下来，然后用质谱技术或Edman降解法对得到的蛋白质复合体进行鉴定。 -
第6题：
蛋白质分离纯化的一般步骤是什么？
正确答案:（一）材料制备
1、选材
2、破碎
3、混合物的分离
（二）粗分级
盐析、有机溶剂分级沉淀、超速离心法、等电点沉淀法、透 析——按照分子大小进行分离.分离取决于透析袋截留的分子量、超滤——除小分子杂质，分离、浓缩蛋白质。
（三）细分级
凝胶层析、离子交换层析、亲和层析、电泳法。 -
第7题：
问答题分子筛层析（凝胶层析）分离纯化蛋白质的原理是什么？正确答案： 1.分子量大的物质不能进入凝胶粒子内部，随洗脱液从凝胶粒子之间的空隙挤落下来，所以大分子物质迁移速度快；
2.小分子物质要通过凝胶网孔进入凝胶粒子内部，所以小分子物质迁移速度慢。解析： 暂无解析 -
第8题：
名词解释题串联亲和纯化耦联质谱技术正确答案： 用于研究蛋白质在生理条件下的相互作用的一种方法。通过嵌入一段蛋白质标记，在目的蛋白的一端或中部导入蛋白质标记，这样便在没有破坏目的蛋白调控序列的基础上，使得被标记的目标蛋白其表达量与其在细胞中自然表达水平相当，避免了由于过量表达的导致非自然条件下的蛋白质相互作用。经过特异性的两步亲和纯化，在生理条件下与目标蛋白发生真实作用的蛋白便可被一起洗脱下来，然后用质谱技术或Edman降解法对得到的蛋白质复合体进行鉴定。解析： 暂无解析 -
第9题：
问答题蛋白质分离纯化的一般步骤是什么？正确答案： （一）材料制备
1、选材
2、破碎
3、混合物的分离
（二）粗分级
盐析、有机溶剂分级沉淀、超速离心法、等电点沉淀法、透 析——按照分子大小进行分离.分离取决于透析袋截留的分子量、超滤——除小分子杂质，分离、浓缩蛋白质。
（三）细分级
凝胶层析、离子交换层析、亲和层析、电泳法。解析： 暂无解析 -
第10题：
问答题常用的蛋白质分离纯化方法有哪几种？各自的原理是什么？正确答案： 1、沉淀：向蛋白质水溶液中加入浓的无机盐溶液，可使蛋白质的溶解度降低，而从溶液中析出。
2、电泳：蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中是带电的，在电场中能向电场的正极或负极移动。根据支撑物不同，有薄膜电泳、凝胶电泳等。
3、透析：利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。
4、层析：A.离子交换层析，利用蛋白质的两性游离性质，在某一特定pH时，各蛋白质的电荷量及性质不同，故可以通过离子交换层析得以分离。如阴离子交换层析，含负电量小的蛋白质首先被洗脱下来。B.分子筛，又称凝胶过滤。小分子蛋白质进入孔内，滞留时间长，大分子蛋白质不能进入孔内而径直流出。
5、超速离心：既可以用来分离纯化蛋白质，也可以用作测定蛋白质的分子量。不同蛋白质因其密度与形态各不相同而分开。解析： 暂无解析 -
第11题：
名词解释题Tandemaffinitypurification串联亲和纯化技术正确答案： 一种能子在生理条件下研究蛋白质相互作用、揭示蛋白质复合体相互作用网络的技术。解析： 暂无解析 -
第12题：
问答题简述生物活性物质分离纯化方法的主要原理。正确答案： 一是得用混合物中几个组分分配率的差别，把它们分配到可用机械方法分离的两个或几个物相中，如盐析，有机溶剂提取，层析和结晶等；二是将混合物置于单一物相中，通过物理力场的作用使各组分分配于来同区域而达到分离目的，如电泳，超速离心，超滤等。解析： 暂无解析 -
第13题：
基于质谱的蛋白质相互作用研究方法主要有（）。
- A、串联亲和纯化耦联质谱技术
- B、噬菌体显示技术
- C、亲和层析耦联质谱技术
- D、生物传感器耦联质谱技术
- E、免疫共沉淀耦联质谱技术
正确答案:A,C,D,E -
第14题：
比较蛋白质的分离纯化技术中凝胶过滤和超过滤方法的原理。
正确答案:凝胶过滤和超过滤都是蛋白质分离纯化过程中常用的技术，但是其原理和操作都不相同。凝胶过滤是根据蛋白质分子的大小将样品中的各种蛋白质分子分开，具体操作是将样品通过装有一定规格凝胶的凝胶过滤柱，小分子的蛋白质进入凝胶孔内，大分子的蛋白质留在外面，然后用洗脱液洗脱，蛋白质依分子大小被洗脱，然后是小分子的蛋白质。超过滤是利用蛋白质分子不能穿过半透膜的特性除去蛋白质混合物中的小分子物质，具体操作是将样品装入透析袋，然后利用高压或离心力，迫使蛋白质样品中的非蛋白的小.分子溶质通过半透膜，蛋白质留在透析袋内。 -
第15题：
常用的蛋白质分离纯化方法有哪几种？各自的原理是什么？
正确答案: 1、沉淀：向蛋白质水溶液中加入浓的无机盐溶液，可使蛋白质的溶解度降低，而从溶液中析出。
2、电泳：蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中是带电的，在电场中能向电场的正极或负极移动。根据支撑物不同，有薄膜电泳、凝胶电泳等。
3、透析：利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。
4、层析：A.离子交换层析，利用蛋白质的两性游离性质，在某一特定pH时，各蛋白质的电荷量及性质不同，故可以通过离子交换层析得以分离。如阴离子交换层析，含负电量小的蛋白质首先被洗脱下来。B.分子筛，又称凝胶过滤。小分子蛋白质进入孔内，滞留时间长，大分子蛋白质不能进入孔内而径直流出。
5、超速离心：既可以用来分离纯化蛋白质，也可以用作测定蛋白质的分子量。不同蛋白质因其密度与形态各不相同而分开。 -
第16题：
分离纯化蛋白质的方法有：（）法，（）法，（）法，（）法及（）法等。
正确答案:分级沉淀；透析；层析；凝胶过滤；电泳 -
第17题：
常见蛋白质分离纯化的方法有哪些？
正确答案:按照分子大小：透析、超过滤、密度梯度离心、凝胶过滤
按照溶解度差别：等电点沉淀法、盐析、有机溶剂沉淀
按照电荷不同分：电泳、离子交换
蛋白质选择吸附分：结晶磷酸钙
配体特异性分：亲和层析 -
第18题：
填空题分离纯化蛋白质的方法有：（）法，（）法，（）法，（）法及（）法等。正确答案： 分级沉淀,透析,层析,凝胶过滤,电泳解析： 暂无解析 -
第19题：
问答题试回答蛋白质串联亲和纯化分离原理、方法及步骤。正确答案： 串联亲和纯化（TAP），用于研究蛋白质在生理条件下的相互作用，通过嵌入一段蛋白质标记，在目的蛋白的一端或中部导入蛋白质标记，这样便在没有破坏目的蛋白调控序列的基础上，使得被标记的目标蛋白其表达量与其在细胞中自然表达水平相当，避免了由于过量表达的导致非自然条件下的蛋白质相互作用。经过特异性的两步亲和纯化，在生理条件下与目标蛋白发生真实作用的蛋白便可被一起洗脱下来，这样得到的蛋白质复合体接着可以用质谱技术或Edman降解法进行鉴定。
方法及步骤：
（1）蛋白质标记：由蛋白A的IgG结合区（ProtA）和钙调蛋白结合区（CBP）构成，中间被一个TEV蛋白酶的酶切位点隔开；
（2）构建表达标记蛋白的细胞或组织：将编码蛋白质标记的基因片段导入目标蛋白质编码基因的特定部位；
（3）细胞抽提物的准备；
（4）串联亲和纯化；
（5）蛋白质复合体的鉴定。解析： 暂无解析 -
第20题：
填空题常用的蛋白质分离纯化方法有（）、（）、（）、（）、（）、（）、（）、（）等。正确答案： 离心,透析,沉淀,层析,电泳,蛋白印迹,蛋白质芯片,质谱法解析： 暂无解析 -
第21题：
问答题比较蛋白质的分离纯化技术中凝胶过滤和超过滤方法的原理。正确答案： 凝胶过滤和超过滤都是蛋白质分离纯化过程中常用的技术，但是其原理和操作都不相同。凝胶过滤是根据蛋白质分子的大小将样品中的各种蛋白质分子分开，具体操作是将样品通过装有一定规格凝胶的凝胶过滤柱，小分子的蛋白质进入凝胶孔内，大分子的蛋白质留在外面，然后用洗脱液洗脱，蛋白质依分子大小被洗脱，然后是小分子的蛋白质。超过滤是利用蛋白质分子不能穿过半透膜的特性除去蛋白质混合物中的小分子物质，具体操作是将样品装入透析袋，然后利用高压或离心力，迫使蛋白质样品中的非蛋白的小.分子溶质通过半透膜，蛋白质留在透析袋内。解析： 暂无解析 -
第22题：
问答题微量碱法分离纯化质粒DNA的原理及其主要步骤。正确答案： 原理及其主要步骤：
①质粒DNA与染色体线性DNA在拓扑学上的差异：质粒DNA（cccDNA）是共价闭合双链超盘旋构型的小分子DNA，而细胞染色体DNA在细胞裂解分离过程中断裂成线性DNA（LDNA），虽然在化学本质上没有本质区别，但在高级结构拓扑学上存在差异。
②差异碱变性：在pH12.0-12.5高pH条件下，线性的DNA容易变性解链，而质粒DNA不易变性或很少变性。
③酸复性：在pH4.8条件下，cccDNA很快复性，而线性的染色体DNA不可逆的变性并与蛋白质、RNA形成沉淀物，通过离心可以把LDNA与cccDNA分开。cccDNA在上清液中。
④酒精沉淀cccDNA：以2.5倍的95%酒精沉淀质粒DNA，（浓度为66%沉淀最好）。保存在TE（pH8.0）缓冲液中，放置在-20℃下保存备用。解析： 暂无解析 -
第23题：
多选题基于质谱的蛋白质相互作用研究方法主要有（）。A串联亲和纯化耦联质谱技术
B噬菌体显示技术
C亲和层析耦联质谱技术
D生物传感器耦联质谱技术
E免疫共沉淀耦联质谱技术
正确答案： E,C解析： 暂无解析