试述PCR的原理。
题目
试述PCR的原理。
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第1题：
说明PCR的基本原理、PCR体系的基本组成及其作用。
正确答案:该技术是在模板DNA、引物和四种脱氧核糖核苷酸存在下，依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应。DNA聚合酶以单链DNA为模板，借助一小段双链DNA来启动合成，通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链DNA模板中的一段互补序列结合，形成部分双链。在适宜的温度和环境下，DNA聚合酶将脱氧单核苷酸加到引物3´-OH末端，并以此为起始点，沿模板5´→3´方向延伸，合成一条新的DNA互补链。
PCR反应的基本成分包括：模板DNA（待扩增DNA）、引物、4种脱氧核苷酸（dNTPs）、DNA聚合酶和适宜的缓冲液。类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的高温变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的低温退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；③引物的适温延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链重复循环变性-退火-延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。 -
第2题：
试述在PCR实验操作中，引起假阳性的可能原因？
正确答案:1.加入试剂或样品引起的交叉污染；
2.加样器通道形成的气溶胶，造成加样器通道污染；
3.打开标本瓶盖引起样品飞溅；
4.操作时手套引起的交叉污染；
5.不明原因引起公用试剂（如石蜡）的污染；
6.实验室污染。 -
第3题：
什么是PCR技术？PCR的基本原理是什么？
正确答案:PCR即聚合酶链式反应，是一种在体外快速扩增特定目的基因或DNA序列的技术，故又称基因的体外扩增技术。它可以在试管中建立反应，经过数小时之后，就能将极微量的目的基因或DNA片断扩增数十万乃至千百万倍，无需经过繁琐费时的基因克隆程序，便可获得足够数到两精确的DNA拷贝。
PCR的基本工作原理：以拟扩增的DNA分子为模板，以一对分别与模板5’末端和3’末端相互补的寡核苷酸片段为引物，在DNA聚合酶的作用下，按照半保留复制的机制沿着模板链延伸直至完成新的DNA合成，重复这一过程，即可使目的DNA片段得到扩增。 -
第4题：
PCR的原理是什么？
正确答案:D.NA合成是以一股DNA单链为模版，在引物存在下，DNA聚合酶沿模版以5’→3’方向延伸的过程。
PCR是利用DNA合成的原理，合成两个与靶DNA两侧序列互补的引物，早体外进行靶DNA的重复合成。PCR扩增包括DNA变性、引物与靶DNA退火、引物延伸三个步骤。 -
第5题：
PCR的基本原理是什么？用PCR扩增某一基因，必须预先得到什么样的信息？
正确答案: （1）DNA半保留复制的原理，在体外进行DNA的变性、复性和引物延伸。
（2）至少要预先知道足够合成一对引物的靶DNA序列。 -
第6题：
简述PCR的原理及其应用。
正确答案:PCR技术是模拟体内条件下，应用DNA聚合酶反应特异性扩增某一DNA片段的技术。它根据待扩增区域两端已知序列合成两个与模板DNA互补的核苷酸引物，这一单链引物的序列决定了待扩增片段的特异性和片段长度，当有模板DNA存在时，引物便可在一定的复性温度下特异地与热变性形成单链的DNA模板互补形成“退火”。当有DNA聚合酶和dNTP存在时，便可在一定条件下，按5（→3（方向从引物端合成DNA链，从而可以产生倍增的DNA片段，当经过30～35个周期后便可产生100万倍以上的所需DNA片段。由于PCR扩增技术的快速、简便、准确、可靠，因此，该技术已广泛应用于遗传病的基因诊断，病原体的检测，肿瘤的DNA诊断，法医学亲权鉴定，性别鉴定以及在DNA水平上研究生物进化等。 -
第7题：
简述PCR原理。
正确答案:PCR是在体外扩增DNA序列的方法，原理并不复杂，首先将双链DNA分子在邻近沸点的温度下加热分离成两条单链DNA分子，DNA聚合酶以单链DNA为模板并利用反应混合物当中的四种脱氧核苷三磷酸合成新生的DNA互补链。包括：DNA解链（变性）、引物与模板DNA结合（退火）、DNA合成（延伸）三步，可以被不断重复。 -
第8题：
问答题简述PCR技术原理。正确答案： PCR（polymerasechainreaction）技术称聚合酶链反应技术，又称无细胞克隆技术，是一种对特定的DNA片段在体外进行快速扩增的新方法。其主要过程由变性、退火和延伸三个步骤反复的循环组成。首先，在高温下（95℃，5min），待扩增的DNA双链受热变性，成为两条单链DNA模板；而后在较低温度条件下（37～55℃，30s），两条人工合成的寡核苷酸引物与互补的单链DNA模板结合，形成部分双链；再在高温条件下（72℃，2—5min），通过DNA聚合酶（Taq酶）作用，以引物3′端为合成起点，单核苷酸为原料，沿模板以5′—3′方向延伸，合成DNA新链。这样，每一双链的DNA模板，经过一次解链、退火和延伸三个步骤的热循环后就形成两条双链DNA分子。解析： 暂无解析 -
第9题：
问答题简述PCR基本原理。正确答案： PCR技术是模拟生物体内DNA的半保留复制，在体外合成DNA链的方法，在模板、DNA、引物、dNTP、Taq酶存在的条件下经过：
“高温变性→低温退火→中温延伸”三步循环，获得大量扩增片段。解析： 暂无解析 -
第10题：
问答题说明PCR反应的基本原理并列举几种特殊的PCR方法。正确答案： PCR是一种模拟天然DNA复制过程，在有DNA模板、DNA聚合酶（常用TaqDNA聚合酶）、引物和4种dNTP的情况下，通过高温变性一低温退火一中温延伸这样反复循环的过程，在体外扩增特异性DNA片段的分子生物学技术。
特殊的PCR方法有：锚式PCR，可以用来快速分离cDNA末端（RACE）；反向PCR，可扩增引物外侧的DNA片段，对已知DNA片段两侧的未知序列进行扩增和研究；多重PCR，，在同一反应中采用多对引物同时扩增几个不同的DNA片段，如果基因某一区段缺失，则相应的电泳图谱上此区段PCR扩增产物长度减少或消失，从而发现基因异常；反转录PCR，先将mRNA反转录成cDNA，然后再以cDNA为模板，用PCR方法加以扩增。其他还有PCR，荧光PCR等。解析： 暂无解析 -
第11题：
问答题简述PCR循环测序的基本原理。正确答案： PCR技术能够快速、特异性地扩增靶DNA，应用PCR技术测定DNA序列分为两个步骤：先利用PCR扩增靶序列片段，制备测序模板，然后再利用PCR直接测定序列。PCR测序采用了热循环高效合成DNA的特性并结合双脱氧核苷酸终止法，使引物链终止的延伸产物数量在热循环过程中得到增加，因此称为循环测序。
每个测序循环包括：
①PCR扩增制备的模板DNA变性成单链形式；
②标记引物与其中的一条链上的互补序列退火；
③退火后的引物在耐热DNA聚合酶催化下发生链延伸终止反应。
本次循环产生的模板链与延伸终止链形成的双链的产物，在下一轮测序循环中，再次被变性，释放出模板链，作为又一轮引发反应的模板，同时积累下一轮循环产生的链终止产物。
上述循环步骤重复20~40次，使链终止产物以线性方式获得扩增。解析： 暂无解析 -
第12题：
问答题简述PCR技术的基本原理。正确答案： P.CR技术的基本原理：类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：1）模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；
2）模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；3）引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。（Plateau）。到达平台期所需循环次数取决于样品中模板的拷贝。解析： 暂无解析 -
第13题：
试述PCR基本技术过程中引物设计的原则。
正确答案: （1）引物的长度一般15～30bp；
（2）引物扩增跨度：以500bp为宜，特定重要条件下可扩增长至10kb的片段；
（3）引物碱基：G+C含量以40%～60%为宜，A、T、G、C最好随机分布，避免5个以上的嘌吟或嘧啶核苷酸的成串排列；
（4）避免引物内部出现二级结构：避免两条引物间互补，特别是3′端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异性的扩增条物；
（5）引物3′端的碱基必须与模板严格配对，而且尽量不要为A，最好选择T，因为3′端末位为T时错配几率大大降低；
（6）产物有或能加上合适的酶切位点；
（7）被扩增的靶序列最好有适宜的酶切点，这对酶切分析或分子克隆很有好处。 -
第14题：
试述在PCR实验操作中如何进行质量保证？
正确答案:P.CR的质量控制，主要是保证其特异性与灵敏度，防止假阳性或假阴性结果的发生。为此必须注意：
1.勤换手套。
2.离心管在每次开盖前要离心片刻，开盖要小心，避免样品溅出离心管。
3.吸试剂用的移液器与吸样品模板用的移液器严格分开。
4.每次试验均同时有阳性对照、阴性对照及弱阳性对照。
5.实验室的所有潜在污染源应定期处理。
6.一旦对结果有怀疑，必须重复检测。 -
第15题：
什么是PCR，请试述PCR技术的原理，以及PCR的反应过程？
正确答案:P.CR就是聚合酶链反应（PolymeraseChainReaction）。
原理：双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。
反应过程：首先。双链DNA分子在临近沸点的温度下加热分离成两条单链DNA分子；然后，加入到反映混合物中的引物和模板DNA的特定末端相结合；戒指，DNA聚合酶以单链DNA为模板，利用反应混合物中的三种核苷三磷酸，在引物的3’-OH端合成新生的DNA互补链。 -
第16题：
PCR技术的原理？
正确答案: 应用PCR技术对被检测DNA进行扩增，首先要弄清被检测DNA的两侧碱基顺序，根据其碱基顺序，应用DNA合成仪合成引物。引物是一对小段（几个至几十个碱基组成）寡核苷酸，其碱基排列顺序与所需扩增的被检DNA中的一段互补，在DNA合成中起引导作用。引物决定所需扩增的DNA片段，不同的引物扩增出的DNA片段不同。在扩增时，根据检验的需要，确定要扩增的被检DNA片段，选择引物。引物按碱基互补原则，与待扩增的DNA片段结合，在DNA聚合酶的催化下，以待扩增的DNA为模板，合成与其相同的DNA新链，使被检DNA片段数量增加。PCR技术的关键是需要一对特异性的引物、耐热的DNA聚合酶和四种单核苷酸。 -
第17题：
何谓PCR？试述PCR技术的基本原理和影响因素。
正确答案: P.CR是一种体外酶促扩增特异DNA片段的技术，其原理类似DNA的体内扩增。它包括：PCR包括三个基本过程：①变性（denaturation），即在较高温度（93℃～98℃）使双链模板DNA变性解链成单链DNA，以提供复制的模板；
②退火（annealing），即在较低温度（37℃～65℃）使加入的引物与待扩增DNA区域特异性地结合，以提供DNA复制起始的3′―OH；
③延伸（extension），即在适当的温度（70℃～75℃）下，DNA聚合酶从特异性结合到DNA模板上的引物3′-OH端开始，根据碱基互补配对原则，按照待扩增区域的核苷酸序列，进行DNA链的延伸，即合成新的DNA分子。这三个过程组成一个循环周期；每个周期合成的产物又可作为下一个周期的模板，如此循环往复，经过n轮循环后，靶DNA的拷贝数理论上呈2n增长。
影响PCR反应的因素主要有：引物、TaqDNA聚合酶、dNTP、模板和Mg2+离子，此外，pH、温度、循环次数也会影响PCR反应。 -
第18题：
简述定量PCR的测定原理和方法。
正确答案:荧光标记技术是分子生物学最常用的标记技术，荧光染料或荧光标记物与扩增产物结合后，被激发的荧光强度和扩增产物成正比。而根据扩增原理，扩增是呈指数增长，因此在反应体系和反应条件完全一样下，样本含量应与扩增产物的对数成正比，故在一定的条件下荧光强度和样本含量成正比。 -
第19题：
问答题PCR技术的原理？正确答案： 应用PCR技术对被检测DNA进行扩增，首先要弄清被检测DNA的两侧碱基顺序，根据其碱基顺序，应用DNA合成仪合成引物。引物是一对小段（几个至几十个碱基组成）寡核苷酸，其碱基排列顺序与所需扩增的被检DNA中的一段互补，在DNA合成中起引导作用。引物决定所需扩增的DNA片段，不同的引物扩增出的DNA片段不同。在扩增时，根据检验的需要，确定要扩增的被检DNA片段，选择引物。引物按碱基互补原则，与待扩增的DNA片段结合，在DNA聚合酶的催化下，以待扩增的DNA为模板，合成与其相同的DNA新链，使被检DNA片段数量增加。PCR技术的关键是需要一对特异性的引物、耐热的DNA聚合酶和四种单核苷酸。解析： 暂无解析 -
第20题：
问答题试述RFLP和PCR-SSCP的具体实验过程。正确答案： RFLP操作过程：
（1）提取样本的Total DNA
（2）酶切
（3）电泳---胶处理
（4）转膜
（5）杂交
（6）放射自显影
（7）结果分析SSCP基本过程：
①PCR扩增靶DNA；
②将特异的PCR扩增产物变性，而后快速复性，使之成为具有一定空间结构的单链DNA分子；
③将适量的单链DNA进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳；
④最后通过放射性自显影、银染或溴化乙锭显色分析结果.若发现单链DNA带迁移率与正常对照的相比发生改变，就可以判定该链构象发生改变，进而推断该DNA段中有碱基突变解析： 暂无解析 -
第21题：
问答题PCR 的基本原理是什么？用 PCR扩增某一基因，必须预先得到什么样的信息？正确答案： （1）DNA半保留复制的原理，在体外进行 DNA的变性、复性和引物延伸。
（2）至少要预先知道足够合成一对引物的靶 DNA序列。解析： 暂无解析 -
第22题：
问答题何谓PCR？试述PCR技术的基本原理和影响因素。正确答案： P.CR是一种体外酶促扩增特异DNA片段的技术，其原理类似DNA的体内扩增。它包括：PCR包括三个基本过程：①变性（denaturation），即在较高温度（93℃～98℃）使双链模板DNA变性解链成单链DNA，以提供复制的模板；
②退火（annealing），即在较低温度（37℃～65℃）使加入的引物与待扩增DNA区域特异性地结合，以提供DNA复制起始的3′―OH；
③延伸（extension），即在适当的温度（70℃～75℃）下，DNA聚合酶从特异性结合到DNA模板上的引物3′-OH端开始，根据碱基互补配对原则，按照待扩增区域的核苷酸序列，进行DNA链的延伸，即合成新的DNA分子。这三个过程组成一个循环周期；每个周期合成的产物又可作为下一个周期的模板，如此循环往复，经过n轮循环后，靶DNA的拷贝数理论上呈2n增长。
影响PCR反应的因素主要有：引物、TaqDNA聚合酶、dNTP、模板和Mg2+离子，此外，pH、温度、循环次数也会影响PCR反应。解析： 暂无解析 -
第23题：
问答题试述PCR基本技术过程中引物设计的原则。正确答案： （1）引物的长度一般15～30bp；
（2）引物扩增跨度：以500bp为宜，特定重要条件下可扩增长至10kb的片段；
（3）引物碱基：G+C含量以40%～60%为宜，A、T、G、C最好随机分布，避免5个以上的嘌吟或嘧啶核苷酸的成串排列；
（4）避免引物内部出现二级结构：避免两条引物间互补，特别是3′端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异性的扩增条物；
（5）引物3′端的碱基必须与模板严格配对，而且尽量不要为A，最好选择T，因为3′端末位为T时错配几率大大降低；
（6）产物有或能加上合适的酶切位点；
（7）被扩增的靶序列最好有适宜的酶切点，这对酶切分析或分子克隆很有好处。解析： 暂无解析