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第1题：
简述PCR的基本原理及其应用。
PCR的基本反应步骤包括：①变性。将反应系统加热至95℃，使模板DNA完全变性成单链，同时引物自身和引物之间存在的局部双链也得以消除：②退火。将温度下降至适宜温度(一般较Tm值低5℃)，使引物与DNA模板退火结合；③延伸。将温度升至72℃，DNA聚合酶以dNTP为底物催化DNA的合成反应。上述三个步骤称为一个循环，新合成的DNA分子继续作为下一轮合成的模板，经多次循环(25～30次)后即可达到扩增DNA片段的目的。 PCR反应体系的基本成分包括：模板DNA、特异性引物、耐热性DNA聚合酶、dNTP、含Mg 2+ 的缓冲液。 -
第2题：
简述PCR原理、过程、应用
RQ-PCR技术是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。它在常规PCR基础上添加了荧光染料或荧光探针，荧光染料能特异性掺入DNA双链，发出荧光信号，而不掺入双链中的染料分子不发出荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物增加完全同步。实时定量PCR常用的检测模式有SYRB Green Ⅰ染料和TaqMan探针检测模式： (1)TaqMan荧光探针：PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PcR扩增时，Taq酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。 (2)SYBR荧光染料：在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。 -
第3题：
PCR 的基本原理是什么？用 PCR 扩增某一基因，必须预先得到什么样的信息？ PCR反应体系的组成成分是什么？
PCR是根据DNA半保留复制的原理，在体外进行DNA的变性、复性和引物延伸。用PCR扩增某一基因至少要预先知道足够合成一对引物的靶DNA序列。 -
第4题：
简述PCR的基本原理
是指在利用Taq聚合酶进行目的基因的PCR扩增的同时引入碱基错配，导致目的基因随机突变的一种DNA体外进化技术。 -
第5题：
简述 PCR技术的操作步骤。
标准的PCR过程分为三步： D.NA变性：（90℃-96℃）双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA 退火：（25℃-65℃）系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。 延伸：（70℃-75℃）在Taq酶（在72℃左右，活性最佳）的作用下，以dNTP为原料，从引物的3′端→5′端延伸，合成与模板互补的DNA链。