设计PCR引物时 A.不需要考虑GC的含量 B.不需要考虑引物的长度 C.只需要考虑碱基互补 D.需要考虑模板的方向性
题目
设计PCR引物时
A.不需要考虑GC的含量
B.不需要考虑引物的长度
C.只需要考虑碱基互补
D.需要考虑模板的方向性
B.不需要考虑引物的长度
C.只需要考虑碱基互补
D.需要考虑模板的方向性
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第1题：
PCR-SSP序列特异性引物PCR
正确答案: 是根据等位基因的序列，设计具有序列特异性的引物，对样本进行DNA分型。该方法是以引物决定分型特异性。有以下优点：特异性强、重复性好、结果易于判定。 -
第2题：
以下关于PCR的说法错误的是（）
- A、PCR反应必须要有模板、引物、dNTP和DNA聚合酶
- B、应用PCR技术可以进行定点突变
- C、PCR的引物必须完全和模板互补配对
- D、PCR反应中，仅介于两引物间的DNA片段得到大量扩增
正确答案:C -
第3题：
什么叫PCR的引物？什么叫特异性引物？什么叫简并性引物？
正确答案: 引物：所谓引物，实际上就是两段与待扩增靶DNA序列互补的寡核苷酸片段，两引物间距离决定扩增片段的长度，两引物的5’端决定扩增产物的5’末端位置。（引物要大大过量）
特异性引物：引物是与靶DNA的3’端和5’端特异性结合的寡核苷酸片段，是决定PCR特异性的关键。只有当每条引物都能特异性地与模板DNA中的靶序列复性形成稳定的结构，才能保证其特异性。
简并性引物：简并引物是指代表编码单个氨基酸所有不同碱基可能性的不同序列的混合物。为了增加特异性，可以参考密码子使用表，根据不同生物的碱基使用偏好，减少简并性。 -
第4题：
试述PCR基本技术过程中引物设计的原则。
正确答案: （1）引物的长度一般15～30bp；
（2）引物扩增跨度：以500bp为宜，特定重要条件下可扩增长至10kb的片段；
（3）引物碱基：G+C含量以40%～60%为宜，A、T、G、C最好随机分布，避免5个以上的嘌吟或嘧啶核苷酸的成串排列；
（4）避免引物内部出现二级结构：避免两条引物间互补，特别是3′端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异性的扩增条物；
（5）引物3′端的碱基必须与模板严格配对，而且尽量不要为A，最好选择T，因为3′端末位为T时错配几率大大降低；
（6）产物有或能加上合适的酶切位点；
（7）被扩增的靶序列最好有适宜的酶切点，这对酶切分析或分子克隆很有好处。 -
第5题：
PCR引物设计的基本要求是什么？
正确答案: 1、引物长度一般为15～30个核苷酸。过短影响PCR的特异性，过长会提高相应退火温度，使延伸温度超过TaqDNA聚合酶最适温度74℃，影响产物的生成。
2、引物的碱基尽可能随机，避免出现嘌呤、嘧啶碱基堆积现象。3’端不应有连续3个G和C。否则会使引物和模板错误配对。G+C含量一般占45％-55％。3’端和5’端引物具有相似的Tm值，Tm值计算公式：Tm＝4（G+C.+2（A+T）
3、引物自身不应存在互补序列以避免折叠成发夹结构。引物的连续互补序列，一般不超过3bp。
4、两个引物之间不应存在互补序列，尤其应避免3’端的互补重叠。
5、引物与非特异扩增区的序列的同源性不超过70％，引物3’末端连续8个碱基在待扩增区以外不能有完全互补序列，否则易导致非特异性扩增。
6、引物3’端碱基是引发延伸的起点，因此一定要与模板DNA配对。引物3’端最佳碱基选择是G和C，形成的碱基配对比较稳定。
7、引物与模板结合时，引物的5’端最多可以游离十几个碱基而不影响PCR反应的进行。
8、引物的5’端可以修饰，如附加限制酶位点，引入突变位点，用生物素、荧光物质、地高辛标记其它短序列包括起始密码子、终止密码子等。 -
第6题：
简述PCR的原理和引物设计原则。
正确答案:1.PCR又称聚合酶链反应，是一种在体特异性外扩增目的核酸的的酶促合成反应。其基本原理是：在模板、引物、4种dNTP和耐热DNA聚合酶存在的条件下，利用DNA半保留复制和其在不同温度下变性复性的特性，人为控制温度——高温变性，低温复性，室温延伸，循环多次后，特异性扩增位于两段已知序列之间的DNA区段。
2.引物设计原则是1. 长度为15~30个核苷酸2. 碱基随机分布，G+C的含量为45~55%
3.避免发夹结构的形成，引物的存在连续互补序列不超过3bp
4.引物之间不应存在互补序列，避免3 ′端互补重叠
5.引物的碱基序列与非扩增区域无同源性
6.引物3 ′端碱基一定与模板配对，最佳碱基选G和C ；
7.引物5 ′端可以修饰，如加酶切位点，突变位点，起始密码子，终止密码子等。 -
第7题：
PCR引物设计的原则主要有哪些？
正确答案: （1）引物长度：10～30Nt；
（2）碱基分布：A、T、G、C随机分布；
（3）G+C含量：40%～60%Tm=4（G+C）+2（A+T）；
（4）引物之间：避免3′端互补；
（5）引物自身：不应形成二级结构；
（6）引物3′末端碱基：最好选T、C、G，不选A；
（7）引物5′末端碱基：可不与模板DNA互补。 -
第8题：
问答题简述PCR引物设计的基本原则及其注意要点正确答案： 原则：首先引物与模板的序列要紧密互补，其次引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构，再次引物不能再模板的非等位点引发DNA聚合反应（即错配）。
注意要点：
1、引物的长度一般为15-30bp，常用的是18-27bp，但不应大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适合于TaqDNA聚合酶进行反应。
2、引物序列在模板内应当没有相似性较高，尤其是3’端相似性较高的序列，否则容易导致错配。引物3’端出现3个以上的连续碱基，如GGG或CCC，也会使错误引发几率增加。
3、引物3’端的末位碱基对Taq酶的DNA合成效率有较大的影响。不同的末位碱基在错配位置导致不同的扩增效率，末位碱基为A的错配效率明显高于其他3个碱基，因此应当避免在引物的3’端使用碱基。另外，引物二聚体或发夹结构也可能导致PCR反应失败。5’端序列对PCR影响不太大，因此常用来引进修饰位点或标记物。
4、引物序列的GC含量一般为40-60%，过高或过低都不利于引发反应。上下游引物的GC含量不能相差太大。
5、引物所对应模板位置序列的Tm值在72℃左右可使复性条件最佳。Tm值的计算有很多种方法，如按公式Tm=4（G+C）+2（A+T），在Oligo软件中使用的是最邻近法（thenearestneighbormethod）。
6、G值是指DNA双链形成所需的自由能，该值反映了双链结构内部碱基对的相对稳定性。应当选用3’端G值较低（绝对值不超过9），而在5’端和中间G值相对较高的引物。引物的3’端的G值过高，容易在错配位点形成双链结构并引发DNA聚合反应。
7、引物二聚体及发夹结构的能值过高（超过4.5kcal/mol）易导致产生引物二聚体带，并且降低引物有效浓度而使PCR反应不能正常进行。
8、对引物的修饰一般是在5’端增加酶切位点，应根据下一步实验中要插入PCR产物的载体的相应序列而确定。解析： 暂无解析 -
第9题：
问答题什么叫PCR的引物？什么叫特异性引物？什么叫简并性引物？正确答案： 引物：所谓引物，实际上就是两段与待扩增靶DNA序列互补的寡核苷酸片段，两引物间距离决定扩增片段的长度，两引物的5’端决定扩增产物的5’末端位置。（引物要大大过量）
特异性引物：引物是与靶DNA的3’端和5’端特异性结合的寡核苷酸片段，是决定PCR特异性的关键。只有当每条引物都能特异性地与模板DNA中的靶序列复性形成稳定的结构，才能保证其特异性。
简并性引物：简并引物是指代表编码单个氨基酸所有不同碱基可能性的不同序列的混合物。为了增加特异性，可以参考密码子使用表，根据不同生物的碱基使用偏好，减少简并性。解析： 暂无解析 -
第10题：
单选题多重PCR需要的引物对为（）。A一对引物
B半对引物
C两对引物
D两对半引物
E多对引物
正确答案： A解析： 暂无解析 -
第11题：
填空题简并引物 PCR 主要是根据蛋白质的氨基酸序列设计（）引物来合成相应的基因。正确答案： 一组混合解析： 暂无解析 -
第12题：
问答题PCR引物设计的原则主要有哪些？正确答案： （1）引物长度：10～30Nt；
（2）碱基分布：A、T、G、C随机分布；
（3）G+C含量：40%～60%Tm=4（G+C）+2（A+T）；
（4）引物之间：避免3′端互补；
（5）引物自身：不应形成二级结构；
（6）引物3′末端碱基：最好选T、C、G，不选A；
（7）引物5′末端碱基：可不与模板DNA互补。解析： 暂无解析 -
第13题：
巢式PCR与普通PCR相比（）
- A、普通PCR比巢式PCR敏感
- B、所用酶不同
- C、所用底物不同
- D、模板不同
- E、前者用两对引物，后者用一对引物
正确答案:E -
第14题：
建立SSR标记必须克隆足够数量的SSR并进行测序，设计相应的PCR引物。请说出其一般程序。
正确答案: ①建立基因组DNA的质粒文库；
②根据欲得到的SSR类型设计并合成寡聚核苷酸探针；
③对阳性克隆DNA插人序列测序；
④根据SSR两侧序列设计并合成引物；
⑤以待研究的植物DNA为模板，用合成的引物进行PCR扩增反应；
⑥高浓度琼脂糖凝胶、非变性或变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其多态性。 -
第15题：
对于镰状细胞贫血病的突变机理可以采用的基因诊断方法不可以是（）。
- A、设计等位基因特异性引物进行PCR
- B、测序
- C、PCR与限制性核酸内切酶技术结合
- D、核酸分子杂交
- E、在突变位点两侧设计引物再电泳分析PCR产物长度变化
正确答案:E -
第16题：
PCR引物设计时，G+C的含量应在（）。
- A、10~20%
- B、15~25%
- C、30~50%
- D、40~50%
- E、40~60%
正确答案:E -
第17题：
PCR引物设计时，按经验，引物自身存在的连续互补序列一般不超过（）。
- A、3bp
- B、5bp
- C、7bp
- D、9bp
- E、10bp
正确答案:A -
第18题：
PCR引物
正确答案: 在PCR反应中，与待扩增的DNA两侧碱基互补的寡核苷酸片段，其本质是单链DNA。 -
第19题：
关于重组PCR定点突变和大引物突变法的叙述正确的是（）
- A、只能在DNA片段的特定部位产生突变
- B、不需要测序确定突变结果
- C、重组PCR定点突变法需要4种扩增，3轮PCR反应
- D、大引物法需要3种扩增引物，3轮PCR反应
- E、重组PCR定点突变法操作较大引物法简单
正确答案:C -
第20题：
名词解释题PCR-SSP序列特异性引物PCR正确答案： 是根据等位基因的序列，设计具有序列特异性的引物，对样本进行DNA分型。该方法是以引物决定分型特异性。有以下优点：特异性强、重复性好、结果易于判定。解析： 暂无解析 -
第21题：
单选题关于重组PCR定点突变和大引物突变法的叙述正确的是（）A只能在DNA片段的特定部位产生突变
B不需要测序确定突变结果
C重组PCR定点突变法需要4种扩增，3轮PCR反应
D大引物法需要3种扩增引物，3轮PCR反应
E重组PCR定点突变法操作较大引物法简单
正确答案： E解析： 暂无解析 -
第22题：
问答题试述PCR基本技术过程中引物设计的原则。正确答案： （1）引物的长度一般15～30bp；
（2）引物扩增跨度：以500bp为宜，特定重要条件下可扩增长至10kb的片段；
（3）引物碱基：G+C含量以40%～60%为宜，A、T、G、C最好随机分布，避免5个以上的嘌吟或嘧啶核苷酸的成串排列；
（4）避免引物内部出现二级结构：避免两条引物间互补，特别是3′端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异性的扩增条物；
（5）引物3′端的碱基必须与模板严格配对，而且尽量不要为A，最好选择T，因为3′端末位为T时错配几率大大降低；
（6）产物有或能加上合适的酶切位点；
（7）被扩增的靶序列最好有适宜的酶切点，这对酶切分析或分子克隆很有好处。解析： 暂无解析 -
第23题：
单选题巢式PCR与普通PCR相比（）A普通PCR比巢式PCR敏感
B所用酶不同
C所用底物不同
D模板不同
E前者用两对引物，后者用一对引物
正确答案： A解析： 巢式PCR是一种变异的聚合酶链反应（PCR），使用两对（而非一对）PCR引物扩增完整的片段。