试述生物样品预处理的必要性。
题目
试述生物样品预处理的必要性。
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第1题：
试述生物样品分析的常用测定方法有哪些。
正确答案: （1）光谱法
采用具有选择性的显色剂和反应条件，才可以不经分离提取，直接用比色法测定生物样品中的药物含量。比色法灵敏度不高，通常只能测定出1μg/mL浓度以上的样品。但该法快速、简便，对仪器设备要求不高。
荧光法具有较高的灵敏度，专属性也较强，但药物必须具有一定的化学结构才能产生荧光。药物中具有天然荧光者不多，通常需采用适当处理，常用化学引导荧光法，如紫外辐射氧化、水解或强酸脱水等，或用适当的荧光试剂与药物起偶合或缩合反应，产生荧光发生团。
（2）色谱法
经典的薄层色谱定量法，操作比较繁琐，准确性较差。不适用于体液中药物成分浓度的测定。高效薄层色谱法灵敏度较高，常用于生物样品中成分的测定，与气相色谱法、高效液相色谱法相比，也有其独特的优点，
高效液相色谱法在生物样品内药物分析中的应用已大大超过了其他分析方法。具有适用范围广，可在室温下进行；样品预处理简单；分离效率高，流动相选择范围广；可不经萃取和衍生化处理直接测定极性大的水溶性药物；检测方法多是非破坏性的，流出组分可回收；专一性较高等优点。
气相色谱法只要选择适当的色谱条件，母体药物、代谢物及其可能同时服用的其他结构相类似的药物都能得到很好分离，常作为建立其他生物样品内药物分析方法的参比方法。
高效毛细管电泳法有高压电泳的高速、高分辨率及高效液相色谱法的高效率等优点，其选择性与高效液相色谱有很大的互补性。广泛应用于生物大分子，体内药物及代谢物，手性药物，中、西药物及其制剂等的分析。
（3）联用技术
联用技术已广泛应用于复杂组分的分离与分析，成为分析技术中最重要的检测手段，尤其适合于对热不稳定的、挥发性差的或极性大的成分分析，高分辨的液相色谱与高灵敏度的质谱联用分析，特别适用于复杂生物样品中药物及其代谢物的研究。
（4）免疫分析法
免疫分析中按标记物的不同，可分为放射免疫分析、酶免疫分析、化学发光免疫分析、荧光免疫分析等。根据抗原-抗体的反应达平衡后是否需将结合物（B）与游离标记物（F）分离，免疫分析可分为均相免疫分析和非均相免疫分析两大类。 各种免疫分析的基本原理是一样的，即竞争抑制原理。人工抗原的制备和特异抗体的制备也相同，只是标记抗原（标记药物）的标记物不同，由此产生的测定方法也不同。 -
第2题：
生物样品预处理时，提取次数至多几次（）
- A、 1
- B、 2
- C、 3
- D、 4
- E、 5
正确答案:B -
第3题：
试述预处理生物样品时待测物的损失与玷污。
正确答案: 在样品预处理过程中待测物的损失，是由容器的吸附、蛋白共沉淀、药物不稳定而产生化学降解或与重金属离子配合、衍生化反应不完全、浓缩过程中挥发等因素所致。样品的玷污问题，是由于生物样品内药物测定具有在复杂体系中测定痕量物质的特点，内源性和外源性污染将引起测量结果不可靠，误差变大。在通常实验环境中，所用器皿、材料（塑料、润滑油、滤纸、蒸馏水纯度等）、提取溶剂和衍生化试剂中夹杂的杂质、血样中脂肪酸及其酯类、人体的皮肤、手指接触容器所带入的杂质等都有可能玷污样品。以上这些问题严重时，会使整个测定毫无意义，甚至引起错误判断。 -
第4题：
不同的食品，不同的检验项目，抽样检验对样品的数量要求不通过，但样品的数量至少应满足（）的需要。
- A、三次全项重复检验、保留样品、制样预处理
- B、两次全项重复检验、保留样品、制样预处理
- C、三次全项重复检验、保留样品、制样预处理、投诉性检测
- D、两次全项重复检验、保留样品、制样预处理、投诉性检测
正确答案:A -
第5题：
测定大米中淀粉含量，如何对大米样品进行预处理，试述操作步骤？
正确答案: 取样方法，磨粉机，加水提取，澄清应选用中性醋酸铅，除铅试剂。，用碱中和有机酸 -
第6题：
设计生物样品预处理方法时，应考虑（）
- A、药物的理化性质
- B、药物的浓度范围
- C、测定目的
- D、生物样本类型
- E、拟采取的测定方法
正确答案:A,B,C,D,E -
第7题：
试述生物样品分析方法的设定依据。
正确答案: （1）在做好文献总结及整理工作的基础上充分了解待测药物的特性与生物样品内状况。药物的理化性质包括酸碱性（pKa）、亲脂性、溶解度、极性、光谱特征、稳定性等，生物样品内药物分析的对象是来自生物体内的样品，因此对药物在生物样品内的状况必须了解，如药动学参数、生物样品内代谢情况等。这涉及样品取样频率与间隔、分析方法的选择等。
（2）明确测定的目的和要求。应了解拟建立的方法是用于测定药代动力学参数，还是用于临床药浓监测。前者要求具有一定的灵敏度和准确度，不强调简便、快速，设计方法时应考虑到不同时间获得的样品中药物浓度变化较大这一因素。而用于临床药浓监测，则要求方法简便、快速。另外，是否要求同时测定母体药物和代谢物，若需同时测定两者，则应选择具有分离能力或专属的测定方法。同时，结合实验室条件，选择可行的方法。 -
第8题：
问答题试述生物样品预处理的必要性。正确答案： 根据生物样品内药物分析的对象和特点以及药物在生物样品内的存在形式、生物转化状况，欲进行体内药物及其代谢物测定，除少数情况将体液作简单处理后进行直接测定外，一般在测定之前需采取适当的样品预处理，即进行分离、净化、浓集、衍生化等，从而为药物的分析测定创造良好的条件。
药物在体内以多种形式存在，有原型药（游离型），有与生物分子形成的结合物（与蛋白结合型），有代谢物，有缀合物（与葡萄糖醛酸、硫酸形成的苷、酯等），需分别测定；待测物浓度很低，而生物样品的介质组分繁杂，有众多内源性成分（蛋白质、多肽、脂肪酸、色素、类脂等）和各种潜在的干扰物存在，还有一些共存药物以及各种外源性物质也会影响测定；待测药物类型众多，性质各异很难对样品规定固定的程序和方式，所以样品处理必须根据药物类型、理化性质、存在形式、浓度范围、测定目的、选取的生物样本类型及最后一步测定方法等多种因素，采取相应的分离步骤和净化技术。解析： 暂无解析 -
第9题：
问答题为什么要对样品进行预处理，简述样品预处理所要达到的要求？正确答案： 为了使试样中的待测组分处于适当的状态，以适应分析测定方法的需求，必须对食品试样进行预处理。
样品预备处理的要求：
①消除干扰因素。
②完整保留被测组分。
③应能使被测定物质达到浓缩。解析： 暂无解析 -
第10题：
多选题样品预处理应达到以下目的（）。A浓缩被测组分，提高测定的精密度和准确度
B消除共存组分对测定的干扰
C通过生成衍生物等预处理方法，使一些通常难以获得检测信号的待测组分转化为具有较高响应值的化合物
D经过预处理后的样品更易保存和运输；除去样品中对分析仪器有害的组分，延长仪器的使用寿命。
正确答案： A,B解析： 暂无解析 -
第11题：
问答题试述生物样品分析方法的稳定性评价内容。正确答案： 药物的稳定性是贮存条件、药物的化学性质、空白生物样品和容器系统的函数。在特定的容器和生物样品中待测物的稳定性不能外推至其他系统。在生物样品中待测物的稳定性包括长期贮存、短期贮存和冷冻-解冻循环过程的稳定性，也包括标准贮备液中待测物的稳定性。
（1）长期贮存稳定性
长期稳定性的贮存时间应超过收集第一个样品至最后一个样品分析所需用的时间周期。贮存温度一般为-20℃，如果需要也可在-70℃贮存。要求高、低浓度至少分别测定3次，与第一天测得的相应浓度的结果进行比较。
（2）短期室温稳定性 高、低浓度各3份于室温下放置4～24小时（根据实际操作在室温中需维持的时间而定），在不同时间点取样，进行分析，与0小时测得结果进行比较。
（3）冷冻-解冻稳定性
取高、低浓度样品至少各3份，于-20℃贮存24小时，取出置室温放置使自然融解。当融解完全后，取样，进行分析。然后再把样品放回冷冻状态保持12～24小时，如此解冻-冷冻应重复循环二次以上，然后比较各次分析结果。
（4）贮备液稳定性
药物与内标物贮备溶液的稳定性应对其在室温下至少6小时的稳定性进行考察，然后将其冷藏或冷冻7～14天或恰当周期后进行测定，所得仪器响应值与新鲜配制溶液所得响应值进行比较。解析： 暂无解析 -
第12题：
问答题测定苹果中还原糖含量，如何对苹果样品进行预处理，试述操作步骤？正确答案： 预处理流程：清洁、随机采样、粉碎、再用水提取及澄清剂澄清。
（1）样品制备
洗净后，除去果梗及内核不可食部分，用不锈钢刀切成小块，随机取样100g，加入100mL蒸馏水，置于组织捣碎机快速打成匀浆；
（2）提取
用减量法精确称取10g匀浆，用漏斗转移至250mL容量瓶中，用蒸馏水冲洗漏斗并入容量瓶中，带瓶内总量至150mL左右时，用6mol/L氢氧化钠溶液中和有机酸，每加1-2滴摇匀，直至瓶内溶液至中性为止。
（3）澄清
加入20mL乙酸铅溶液（20%），摇匀，放置10min，再加20mL硫酸钠溶液（10%）以除去过量的铅，摇匀后，加水至刻度，混匀。用干燥滤纸过滤，弃去初滤液20mL作用，滤液备用。解析： 暂无解析 -
第13题：
试述生物样品分析中免疫分析法的分类及内容。
正确答案: 免疫分析中按标记物的不同，可分为放射免疫分析、酶免疫分析、化学发光免疫分析、荧光免疫分析等。根据抗原-抗体的反应达平衡后是否需将结合物（B）与游离标记物（F）分离，免疫分析可分为均相免疫分析和非均相免疫分析两大类。
各种免疫分析的基本原理是一样的，即竞争抑制原理。人工抗原的制备和特异抗体的制备也相同，只是标记抗原（标记药物）的标记物不同，由此产生的测定方法也不同。
放射免疫分析是20世纪50年代末开始发展起来的一种超微量分析技术，它是利用放射性同位素的测量方法与免疫反应基本原理相结合的一种同位素体外检测法。本法最早应用于血浆中微量胰岛素的分析，这一方法不仅用于测定大分子量、有抗原性的蛋白质、酶等生物活性物质，而且也广泛用于测定许多小分子量、本身无抗原性的药物和代谢物等，许多RIA药盒已商品化。
酶免疫分析是20世纪70年代在RIA基础上发展起来的一种新的免疫分析方法。将抗原抗体特异反应与酶的高效专一催化特性相结合，用酶代替放射性同位素来标记药物，具有无放射性危害，标记物衰退期长和仪器设备简单等优点，随着研究进展，EIA的灵敏度已达到甚至超过RIA，凡RIA能测试的项目几乎均可用EIA来替代。 标记酶的作用也是提供可测信号，但酶本身并不能直接发出信号，必须要有其他物质如酶底物、辅酶等的参与才能完成酶反应，引起吸收光谱等方面的变化以供检测。
按照测定过程中，抗原-抗体反应是在单一液相中进行还是在液固相中进行，可将EIA分为均相酶免疫分析法和非均相酶免疫分析法。
一些化学物质在氧化时会发出光量子，这种氧化反应称化学发光，具有这种性质的分子称化学发光分子，用它标记抗原或抗体，以达到测定抗体或抗原为目的的标记免疫技术，称化学发光免疫测定法。自1976年Schroeder等首先建立了生物素CLIA后，激素等众多物质的CLIA也相继建立，并在不断发展中。CLIA也有均相与非均相两种类型。
荧光免疫分析是以荧光物质或潜在荧光物质为标记物，当标记的药物与特异抗体相结合时，发生荧光强度的改变，或在相应的酶作用下发生荧光来检测待测样品中药物浓度的一种方法。也可分为均相与非均相两类，均相荧光免疫分析能自动化操作，是目前应用比较广泛的免疫分析法。按标记物产生荧光方式不同，可将荧光免疫分析分为底物标记荧光免疫分析、荧光偏振免疫分析、荧光淬灭和荧光增强免疫分析等。 -
第14题：
试述生物样品分析方法的稳定性评价内容。
正确答案: 药物的稳定性是贮存条件、药物的化学性质、空白生物样品和容器系统的函数。在特定的容器和生物样品中待测物的稳定性不能外推至其他系统。在生物样品中待测物的稳定性包括长期贮存、短期贮存和冷冻-解冻循环过程的稳定性，也包括标准贮备液中待测物的稳定性。
（1）长期贮存稳定性
长期稳定性的贮存时间应超过收集第一个样品至最后一个样品分析所需用的时间周期。贮存温度一般为-20℃，如果需要也可在-70℃贮存。要求高、低浓度至少分别测定3次，与第一天测得的相应浓度的结果进行比较。
（2）短期室温稳定性 高、低浓度各3份于室温下放置4～24小时（根据实际操作在室温中需维持的时间而定），在不同时间点取样，进行分析，与0小时测得结果进行比较。
（3）冷冻-解冻稳定性
取高、低浓度样品至少各3份，于-20℃贮存24小时，取出置室温放置使自然融解。当融解完全后，取样，进行分析。然后再把样品放回冷冻状态保持12～24小时，如此解冻-冷冻应重复循环二次以上，然后比较各次分析结果。
（4）贮备液稳定性
药物与内标物贮备溶液的稳定性应对其在室温下至少6小时的稳定性进行考察，然后将其冷藏或冷冻7～14天或恰当周期后进行测定，所得仪器响应值与新鲜配制溶液所得响应值进行比较。 -
第15题：
为什么要对样品进行预处理，简述样品预处理所要达到的要求？
正确答案: 为了使试样中的待测组分处于适当的状态，以适应分析测定方法的需求，必须对食品试样进行预处理。
样品预备处理的要求：
①消除干扰因素。
②完整保留被测组分。
③应能使被测定物质达到浓缩。 -
第16题：
食品检验的基本步骤按照下列顺序进行，（）、成分分析、数据的处理和分析报告的撰写等。
- A、样品采集、样品预处理、样品的制备和保存
- B、样品采集、样品的制备和保存、样品预处理
- C、样品的采集、样品的保存、样品预处理、样品的制备
- D、样品采集、样品的保存、样品预处理
正确答案:C -
第17题：
测定苹果中还原糖含量，如何对苹果样品进行预处理，试述操作步骤？
正确答案: 预处理流程：清洁、随机采样、粉碎、再用水提取及澄清剂澄清。
（1）样品制备洗净后，除去果梗及内核不可食部分，用不锈钢刀切成小块，随机取样100g，加入100mL蒸馏水，置于组织捣碎机快速打成匀浆；
（2）提取用减量法精确称取10g匀浆，用漏斗转移至250mL容量瓶中，用蒸馏水冲洗漏斗并入容量瓶中，带瓶内总量至150mL左右时，用6mol/L氢氧化钠溶液中和有机酸，每加1-2滴摇匀，直至瓶内溶液至中性为止。
（3）澄清加入20mL乙酸铅溶液（20%），摇匀，放置10min，再加20mL硫酸钠溶液（10%）以除去过量的铅，摇匀后，加水至刻度，混匀。用干燥滤纸过滤，弃去初滤液20mL作用，滤液备用。 -
第18题：
试述生物样品分析方法建立的一般步骤。
正确答案: （1）以纯品进行测定
取药物或其代谢物纯品适量，按拟定方法测定，求得浓度与测定响应值之间的关系，进行线性范围、最适测定浓度、检测灵敏度、测定最适条件（如pH值、温度、反应时间等）等的选择。
（2）空白样品测定
取空白生物样品，按拟定的方法进行处理，测定空白值（或色谱图）。空白值高低或色谱图状况将影响到方法的灵敏度和专属性，应力求将空白值降低。在色谱分析中应力求减少样品中内源性杂质峰，对无法消除的内源性杂质峰应设法使其从待测物的色谱区域内移开。能否取得良好的样品空白实验结果，是决定测定方法实际可行性的重要环节，必须设法解决。
（3）以水代替空白样品，添加对照品后测定
.以水代替空白生物样品，添加一定量对照品后按拟定方法进行测定，以了解提取回收率及最低检测浓度的大致情况，从而对提取溶剂、富集方法等条件进行选择。
（4）空白样品中添加对照品后测定
于空白生物样品中，添加一定量对照品后按拟定方法进行测定，求得样品回收率数据，建立标准曲线。若采用色谱法测定，若需要用内标法定量，则应首先选择合适的内标物，然后进行回收率的测定。
（5）生物样品内实际样品测定 -
第19题：
TDM中样品预处理的措施有（ ）
- A、灰化
- B、去蛋白
- C、提取
- D、化学衍生物化学反应
- E、离子化
正确答案:B,C,D -
第20题：
多选题设计生物样品预处理方法时，应考虑（）A药物的理化性质
B药物的浓度范围
C测定目的
D生物样本类型
E拟采取的测定方法
正确答案： B,D解析： 暂无解析 -
第21题：
单选题生物样品预处理时，提取次数至多几次（）A1
B2
C3
D4
E5
正确答案： B解析： 暂无解析 -
第22题：
问答题试述生物样品分析方法建立的一般步骤。正确答案： （1）以纯品进行测定
取药物或其代谢物纯品适量，按拟定方法测定，求得浓度与测定响应值之间的关系，进行线性范围、最适测定浓度、检测灵敏度、测定最适条件（如pH值、温度、反应时间等）等的选择。
（2）空白样品测定
取空白生物样品，按拟定的方法进行处理，测定空白值（或色谱图）。空白值高低或色谱图状况将影响到方法的灵敏度和专属性，应力求将空白值降低。在色谱分析中应力求减少样品中内源性杂质峰，对无法消除的内源性杂质峰应设法使其从待测物的色谱区域内移开。能否取得良好的样品空白实验结果，是决定测定方法实际可行性的重要环节，必须设法解决。
（3）以水代替空白样品，添加对照品后测定
.以水代替空白生物样品，添加一定量对照品后按拟定方法进行测定，以了解提取回收率及最低检测浓度的大致情况，从而对提取溶剂、富集方法等条件进行选择。
（4）空白样品中添加对照品后测定
于空白生物样品中，添加一定量对照品后按拟定方法进行测定，求得样品回收率数据，建立标准曲线。若采用色谱法测定，若需要用内标法定量，则应首先选择合适的内标物，然后进行回收率的测定。
（5）生物样品内实际样品测定解析： 暂无解析 -
第23题：
问答题试述预处理生物样品时待测物的损失与玷污。正确答案： 在样品预处理过程中待测物的损失，是由容器的吸附、蛋白共沉淀、药物不稳定而产生化学降解或与重金属离子配合、衍生化反应不完全、浓缩过程中挥发等因素所致。样品的玷污问题，是由于生物样品内药物测定具有在复杂体系中测定痕量物质的特点，内源性和外源性污染将引起测量结果不可靠，误差变大。在通常实验环境中，所用器皿、材料（塑料、润滑油、滤纸、蒸馏水纯度等）、提取溶剂和衍生化试剂中夹杂的杂质、血样中脂肪酸及其酯类、人体的皮肤、手指接触容器所带入的杂质等都有可能玷污样品。以上这些问题严重时，会使整个测定毫无意义，甚至引起错误判断。解析： 暂无解析