基因干预的方法有哪些？

第1题：

获得动物目的基因的方法有哪些？

正确答案: ①cDNA方法；
②DNA的化学合成；
③利用PCR法获得基因，除了用到普通PCR法外，还要用到逆转录PCR、锚定PCR和反向PCR。

第2题：

克隆抗生素生物合成基因的方法有哪些？

正确答案:1、阻断变株法；
2、突变克隆法；
3、直接克隆法；
4、克隆抗生素抗性基因法；
5、寡核苷酸探针法；
6、同源基因杂交法；
7、在标准宿主系统克隆检测单基因产物法。

第3题：

常用的目的基因与载体的连接方法有哪些？

正确答案: 外源DNA片段同载体分子连接的方法，即DNA分子体外重组技术，主要是依赖于核酸内切限制酶和DNA连接酶的作用.一般说来在选择外源DNA同载体分子连接反应程序时，需要考虑到下列三个因素：
（1）实验步骤要尽可能地简单易行；
（2）连接形成的"接点”序列，应能被一定的核酸内切限制酶重新切割，以便回收插入的外源DNA片段；
（3）对转录和转译过程中密码结构的阅读不发生干扰。

第4题：

利用特定的反义核酸阻断变异基因异常表达的基因治疗方法是（）。

A、基因干预
B、基因矫正
C、基因置换
D、基因添加
E、基因剔除

正确答案:A

第5题：

有关基因干预描述错误的是（）。

A、目的是为了加强部分基因的表达
B、是为了抑制有害基因的表达
C、靶基因可以是癌基因或病毒基因
D、遗传病治疗的最佳方法
E、关键技术是基因打靶

正确答案:A,E

第6题：

连接目的基因与载体的方法有哪些？

正确答案:亚克隆、黏性末端连接、平端连接、人工接头连接、同聚物加尾连接等。

第7题：

简单说明有哪些方法可以得到所需要的基因。

正确答案: 概括地讲，有如下方法可以获得目的基因：
（1）PCR法设计特定的引物，即可以扩增得到特定目的基因。
（2）酶法经过特定的限制性内切酶作用及凝胶电泳后可以专
一的获取特定大小的目的基因。
（3）探针法用特定的探针（探针根据DNA序列、RNA序列或
蛋白质序列进行设计）从总DNA溶液中获取特定目的基因。
（4）cDNA法用特异功能的mRNA进行反转录，也可以获取特
定目的基因。
（5）用差别杂交或扣除杂交法获取特定目的基因。
（6）用mRNA差别显示技术分离目的基因。
（7）用表达文库分离目的基因。

第8题：

植物基因转化的方法有哪些？各自的特点是什么？

正确答案:1）农杆菌介导法：受体类型广泛，简单易行、周期短、转化频率高，转化体常出现“嵌合”现象，影响转化频率的因素相对较少等。
2）病毒介导法：特点是病毒增殖水平较高、增殖速度快，基因组较小，宿主范围广，易于纯化等。
3）基因枪转化法：适用范围广、无宿主限制、靶受体类型广泛、可控度高、操作简便、快速等。
4）电激法
5）PEG介导法：特点是成本低廉、效果稳定
6）花粉管通道法：特点是方便易行，不需专门仪器和昂贵药品，直接得到转化的种子，受季节限制。
7）显微注射法：特点是转化效率高，转化细胞的培养过程无需特殊的选择系统。

第9题：

问答题

从基因组DNA或mRNA序列克隆基因的方法有哪些？

正确答案：（1）同源序列法
（2）表达序列标签法
（3）连锁图谱法
（4）转座子标签法
（5）差异显示法

解析：暂无解析

第10题：

问答题

获得目的基因的方法有哪些？

正确答案：获得目的基因的方法有：鸟枪法（shotgun）；物理化学法（密度梯度离心法、单链酶法、分子杂交法）；化学合成法；酶促逆转录合成法；PCR扩增法。

解析：暂无解析

第11题：

问答题

试述基因定位有哪些方法？

正确答案：（1）系谱分析法
（2）体细胞杂交（同线、缺失、剂量效应等）
（3）原位杂交
（4）分子遗传标记作图

解析：暂无解析

第12题：

填空题

基因干预的较常用方法包括（）、（）或（）等。

正确答案：反义RNA,RNA干扰,核酶

解析：暂无解析

第13题：

口腔肿瘤相关基因筛选与功能研究的主要方法有哪些？

正确答案:①抑制消减杂交技术
②基因芯片技术
③激光显微切割技术
④小鼠体内的逆转录插入性突变
⑤口腔肿瘤相关基因功能研究策略。
另：遗传学方法定位、直接测序分析。

第14题：

动物转基因常用的外源基因导入方法有哪些？各有何优缺点？

正确答案: 显微注射法：优点：准确、快捷。缺点：成本很高。
体细胞核移植方法：优点：经济、有效。缺点：耗时。

第15题：

常用的目的基因的获取方法有哪些？

正确答案: 制备基因组文库、构建cDNA文库、PCR扩增目的基因、人工合成DNA技术

第16题：

简述反义RNA、RNA干扰及核酶三种基因干预方法的差异。

正确答案:反义RNA指能与特定基因mRNA互补结合的一类RNA，可抑制一些有害基因的翻译。RNA干扰是指由双链RNA诱发的基因沉默现象：与其有同源序列的mRNA被降解，从而抑制了该基因的表达。核酶是具有酶活性的RNA，可降解特异的mRNA序列。

第17题：

生产转基因动物的常用方法有哪些？各有何优缺点？

正确答案:六种方法：
（1）原核期胚胎的显微注射技术，优点：有外源基因长度不受限制，可直接用不含原核载体DNA片段的外源基因进行转移；实验周期相对较短。缺点：大动物原核胚的胚胎胞质中含有大量的泡状颗粒，影响其透光性，且显微操作技术含量较高，需要特殊的仪器并可能在注射过程中对胚胎造成损伤等；外源基因能否整合到受体基因组中，要等到子一代出生后经过选择才能确定，这对生育周期长，产仔少的大动物来说，效率就很低，而且整合位点随机，易造成宿主基因组内生命活动所必需的基因失活和导致胚胎或动物死亡；整合一般是指多拷贝首尾串联相接，不利于研究基因结构、功能及表达调控。
（2）反转录病毒技术，优点：感染率高，易转染，操作简单，而且多数为单拷贝，并可稳定的整合到可识别插入位点。缺点：反转录病毒作为载体，其插入的外源基因最大不能超过10KB，并且容易产生嵌合体。另外，插入的外干扰源基因容易丢失，反转录病毒本身的DNA序列也会干扰外源基因的表达。还有反转录病毒在安全方面仍存在问题。
（3）慢病毒载体技术，优点：高效的转染率和转基因的高表达。缺点：插入外源基因需小于8.5kb和插入突变，经传代整合后所得原病毒DNA易发生甲基化，影响外源基因表达。
（4）精子载体技术，优点：简单易行，直接可以用精子作为外源DNA载体进行基因转移。可以对大量的精子细胞进行处理，不损伤卵母细胞，在短时间内生产转基因胚胎，而且整合率高，成本低。缺点：结果不稳定，有的外源DNA并未整合到宿主的基因组中，而是以附加体的形式存在于染色体之外，由于存在于正常的细胞有丝分裂中，附加体丢失的概率很高。
（5）体细胞核移植转基因技术，优点：动物转基因效率大幅提高，体细胞克隆技术可将基因整合和生产胚胎分开操作，有利于使用基因打靶技术。缺点：克隆技术的效率有待提高。
（6）胚胎干细胞介导技术，优点：可以将外源基因整合到细胞的染色体组中，然后把这些干细胞经过筛选，找到理想的干细胞，大大减少了整合突变率，还可以消除随机整合产生的位置效应的影响。

第18题：

制备基因探针的方法有哪些？

正确答案: 制备方法：
（1）缺口平移法
（2）随机引物标记法
（3）生物素标记法（标记方法可分为参入法、末端标记法和光化学法）
（4）酶标记法
（5）半抗原标记法

第19题：

什么是基因探针？制备基因探针的方法有哪些？

正确答案: 基因探针（probE.是一段与目的基因互补的核酸序列：DNA或RNA，用来待测样品DNA或RNA进行核酸分子杂交，可判断两者的同源程度。
制备方法：
（1）缺口平移法
（2）随机引物标记法
（3）生物素标记法（标记方法可分为参入法、末端标记法和光化学法）
（4）酶标记法
（5）半抗原标记法

第20题：

单选题

利用特定的反义核酸阻断变异基因异常表达的基因治疗方法是（）。

A

基因干预

B

基因矫正

C

基因置换

D

基因添加

E

基因剔除

正确答案： C

解析：暂无解析

第21题：

问答题

转基因生物的外源基因检测方法有哪些？

正确答案：（1）形态标记。形态标记是指在杂种后代中那些可被直接观察到的性状，如植株的茎、叶、穗、籽粒各部分大小、色泽、形状及抗病性表现等。这是检测外源基因最常用的、也是最直观的方法。一般是参照双亲的特征，根据杂咱后代的表现情况，来确定杂种后代中是否有外源基因导入。
（2）细胞标记。细胞标记，即细胞学鉴定。通过对染色体的数目和形态特征观察、染色体带型和核型分析以及减数分裂染色体配对行为的观察，来检测外源基因。这是检测外源基因最基本、最经典的方法。
具体包括：
A.杂种细胞学，观察通过对杂种体细胞染色体观察，统计其染色体数目，并结合花粉母细胞减数分裂中期染色体配对行为观察，来确是否有外源基因导入。通过染色体计数和配对行为观察，很容易确定双二倍体、部分双二倍体、附加系、单体、缺体、端体等染色体的数目和类型。利用有无随体染色体，也可鉴定外源基因。
B.核型及核型分析，核型通常是指体细胞染色体所有可测定的表型特证的总称。核型分析就是对核型的各种特征进行定量或定性的表达。核型分析的染色体，一般以体细胞分裂中期的染色体作为基本形态。在核型分析的表述格式中，一般包括染色体数目和染色体形态特征，形态特征主要包括相对长度、臂比、着丝点位置和随体的有无。染色体的分类目前采用应用最广泛的两点四区系统，我国于1984年第一届全国植物染色体学术讨论会上稍加修改后推行。根据臂比值将染色体分为正中部着丝点（M）、中部着丝点区（m）、近中部着丝点区（sm）、近端部着丝点区（st）、端部着丝点区（t）和端着丝点（T）即所谓的两点四区。
C.染色体分带，染色体分带技术是通过一定的碱、酸、盐、温度等因素对染色体进行处理，借助Giemsa等染料染色，使染色体在一定部位呈现深浅程度不同的染色区段而形成特定的带纹，由于其带纹在各染色体上显示的位置、宽窄、大小、数目、浓淡等具有相对的稳定性，故可用来进行染色体的鉴别和分析。
（3）生化标记。生化标记是利用电泳等技术对生物大分子，如蛋白质、酶等进行鉴定。因为蛋白质是由基因编码的，特定的基因型决定了蛋白质的特定组成，因此，不同种、属所特有的蛋白质组成能够反映出该种、属的基因型。
具体包括：
A、贮藏蛋白分析法，按其溶解特性可分成谷蛋白和醇溶蛋白两大类，其蛋白的亚基存在着丰富的变异类型，不受环境条件影响而能稳定遗传。
B、同工酶分析法，同工酶是结构不同但功能相同的一类酶。在一定条件下电泳染色，同一遗传材料可同时显示几条酶带，而不同的遗传材料可具有不同的酶带。同工酶是基因的直接产物，是基因表达的结果。
（4）分子标记。分子标记是继形态标记、细胞标记、生化标记之后的一种新的分子遗传标记方法，它是以DNA多态性与性状间的紧密连锁关系为基础的遗传标记，能够稳定遗传，且遗传方式比较简单，是性状基因的真实反映，能在不同发育阶段对不同组织DNA进行检测分析。目前，用于检测小麦外源基因的分子标记主要有限制性片段长度多态性（restriction fragment length length polymorphism 简称 RFLP）、随机扩增多态性DNA（random amplified polymorphic DNA 简称 RAPD ）和基因组原位杂交（genomic in situ hybridization 简称 GISH）。这项新技术越来越受到重视，特别是在检测外源小片断染色时更是倍受青睐。
具体包括：
A、RFLP，RFLP技术是基于不同物种、不同材料间基因组DNA的限制性内切酶识别位不同的原理，通过对基因组DNA经特定的限制性内切酶消化，产生不同大小的DNA片断，经电泳后转移到固定支撑物上，用特定的放射性标记的DNA片断（探针）杂交检测多态性。它是检测不同物种个体间基因细微差异的可靠手段，标记的数量较大，呈简单的孟德尔显性遗传。RFLP是较早应用于植物基因标记的一项分子标记技术。
B、RAPD，RAPD技术是基于聚合酶链式反应原理，通过运用不同核苷酸序列的随机引物（通常为10个碱基）对基因组DNA进行扩增，对扩增产物进行电泳寻找多态性标记。这类标记通常也是显性遗传，由于它在技术上非常简单，也无需对基因组序列有多少了解，只要合成一套随机引物就可用于作物物种，因而应用最为广泛。RAPD技术最大的缺点是稳定性差，易受不同药品的影响。为了提高该标记的稳定性和重复性，有必要将RAPD技术转化为特异序列扩增的SCAR(Sequence characterized amplified region )标记。即将RAPD作为初步筛选鉴定的一种方法，一旦发现所需的DNA扩增产物之后，再用特异序列扩增的方法，将RAPD转变成经典的PCR方法。
C、FISH，这是一项利用标记的DNA探针与染色体上的DNA杂交，在染色体上直接进行检测的分子标记技术。该项技术在研究内容，研究方法上将传统的细胞遗传学与现代分子遗传学结合起来，形成一门新的交叉学科――分子细胞遗传学。制作良好的染色体分裂相片子是该技术的关键。其最大优点是利用普通的显微镜，可以直接鉴定到所要研究的基因在染色体上的位置和分布。
总之，形态标记、细胞标记、生化标记和分子标记是检测外源基因重要的遗传标记形式。形态标记检测方法简便易行，提供直接的结果，但标记数少、多态性差、易受环境条件影响。 •细胞标记检测是最经典的方法，但工作量大，费人才。生化标记检测设备简单，试剂价格低廉，但标记数目有限。分子标记检测结果可靠，但仪器、试剂都较昂贵，其利用受到一定的限制。各种遗传标记形式都有其局限性，在检测外源基因时，可根据研究条件、研究目的及研究对象，合理地选择相应的检测方法。在实际应用中，常常将几种标记结合起来使用，其结果相互印证，提高了检测结果的准确性和可靠性。

解析：暂无解析

第22题：

问答题

简述反义RNA、RNA干扰及核酶三种基因干预方法的差异。

正确答案：反义RNA指能与特定基因mRNA互补结合的一类RNA，可抑制一些有害基因的翻译。RNA干扰是指由双链RNA诱发的基因沉默现象：与其有同源序列的mRNA被降解，从而抑制了该基因的表达。核酶是具有酶活性的RNA，可降解特异的mRNA序列。