简述疏水色谱的原理，并说明基本操作步骤。
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简述疏水色谱的原理，并说明基本操作步骤。
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第1题：
请简述色谱分离的基本原理。
正确答案:使用外力使含有样品的流动相（气体、液体或超临界流体）通过一固定于柱或平板上，与流动相互不相容的固定相表面。由于处于柱起始端样品中各组分与两相（固定相与流动相）的作用程度不同，因此，与固定相作用强的组分随流动相流出的速度较慢，而与固定相作用弱得组分随流动相流出的速度较快。由于流出的速度的差异，使得混合组分最终形成各个单组份的“”带其或“区”，从而达到分离的目的。 -
第2题：
简述气相色谱发测定甲醇原理及操作步骤。
正确答案:原理：利用不同醇类在氢火焰中的化学电离反应节进行检测，根据色谱峰的保留时间定性，以峰高与标准比较定量。
操作方法：分别吸取0.5ul样品及标准使用液注入色谱仪，制得色谱图。以各级保留时间与各标准品的保留时间对照定性。分别记录各组分峰高或峰面积与相应的标准比较定量。
说明：①本法最低检出浓度为：甲醇0.008g/100ml；杂醇油（以异丁醇计）0.01g/100ml。②与分光光度法想比较，后者嗦测得的甲醇值较气相色谱法的结果高。 -
第3题：
简述蛋白质免疫印迹法的基本原理和主要操作步骤。
正确答案: 蛋白质印迹法又称蛋白质免疫印迹法，是20世纪70年代末80年代初在蛋白质凝胶电泳和固相免疫测定的基础上发展起来的蛋白质检测技术，为检测样品中是否存在蛋白质抗原提供了一种可靠的方法。该法鉴定蛋白质的原理是根据被测蛋白能与特定抗体的结合特性和该蛋白的相对分子质量。
免疫印迹法程序可分为5个步骤：
（1）蛋白样品的制备；
（2）经过SDS-PAGE分离样品；
（3）分离的蛋白转移到膜载体上，转移后首先将膜上未反应的位点封闭起来以抑制抗体的非特异性吸附；
（4）用固定在膜上的蛋白质作为抗原，与对应的非标记抗体（一抗）结合；
（5）洗去未结合的一抗，加入酶耦联或放射性同位素标记的二抗，通过显色或放射性自显影法检测凝胶中的蛋白成分。 -
第4题：
简述黄曲霉毒素B1薄层色谱法的原理和步骤。
正确答案:样品中黄曲霉毒素B1经提取、浓缩、薄层分离后，在波长365nm紫外光下产生蓝紫色荧光，根据其在薄层上显示荧光的最低检出量来测定含量。
仪器：紫外光灯：100~125W，带有波长365nm滤光片。
操作方法：
（1）取样
（2）提取
（3）测定：
①单向展开法：第一点：10μl0.04μg/ml黄曲霉毒素B1标准使用液。第二点：20μg 样液。第三点：20μl 样液+10μl0.04μg/ml黄曲霉素B1标准使用液。第四点：20μl 样液+10μl0.2μg/ml黄曲霉毒素B1标准使用液。
②双向展开法。滴加样式如下：滴加两点法：点样、展开、确证试验。 -
第5题：
高效液相色谱法测定低聚糖原理及操作步骤。
正确答案:原理：以乙腈、水作流动相在碳水化合物分析柱上糖的分离顺序是先单糖后双糖，先低聚后多聚，以示差折射检测器检测。
操作步骤：样品处理：1、固体样品加水，超声，定溶，用0.45um过滤测定。2、奶制品加无水乙醇，加热蛋白质沉淀，过滤，浓缩后定刻度。3、饮料或口服液，加水稀释定至刻度。测定。 -
第6题：
问答题简述气相色谱方法测定植物性食品中氨基甲酸酯类农药的残留原理及操作步骤。正确答案： 原理：含氮有机化合物被色谱柱分离后在加热的碱金属片的表面产生热分解，形成氰自由基（CN-），并且从被加热的碱金属表面放出的原子状态的碱金属于（Rb）接受电子变成（CN-），这个离子进一步与氢原子结合，放出电子的碱金属（Rb）变成正离子，由收集极收集，并作为信号电流而被测定。电流信号的大小与含氮化合物的含量成正比。以峰面积及峰高比较定量。仪器：附有火焰热离子检测器的气相色谱仪、旋转蒸发仪等。
操作方法：
（1）提取：称取粉碎粮食或蔬菜样品，置于具塞锥瓶中，加入无水甲醇、塞紧摇匀提取，然后过滤。将滤液转入分液漏斗中。
（2）净化：滤液加入石油醚振摇后静置分层，将下层（甲醇氯化钠溶液）放入另一分液漏斗中，用甲醇氯化钠溶液洗涤石油醚层二次，静止分层后。
（3）浓缩：于盛有样品净化液用二氯甲烷依次提取三次，将蒸馏瓶接上减压浓缩装置，于水浴旋转蒸发仪减压浓缩将残余物用二氯甲烷反复洗涤，然后吹氮气除尽二氯甲烷溶剂，用丙酮溶解残渣并定容，供色谱分析。
（4）测定：吸取标准液及样品净化液注入色谱仪中，以保留时间定性。以试样的峰高或面积与标准比较定量。解析： 暂无解析 -
第7题：
问答题简述反相色谱和疏水色谱原理。正确答案： 反相色谱和疏水色谱原理：
反相色谱和疏水色谱都是基于物质分子和疏水基团与色谱介质上的疏水基团相互作用在非极性的固定相和极性的流动相之间不断的分配得以分离技术。
原理：反相色谱是利用溶质分子中的非极性基团与非极性固定相之间相互作用力的大小，以及溶质分子中极性基团与流动相中极性分子之间的相反方向作用力大小的差异进行分离的.进行生物大分子反相。疏水色谱的原理与反相色谱相似，主要是利用蛋白质分子表面上的疏水区域和介质的疏水基团之间的互相作用，无机盐的存在能使相互作用力增强。所用蛋白质分子表面上的疏水性比反相色谱所用介质弱，为有机聚合物键合相或大孔硅胶键合相，流动相一般为pH6-8的盐水溶液。在高盐浓度时，蛋白质分子中的疏水部分与介质的疏水基团产生疏水作用而被吸附：当盐浓度降低时蛋白质的疏水作用减弱，目的蛋白质被逐步洗脱下来，蛋白质的疏水性越强，洗脱时间越长.与反相色谱相比，疏水色谱回收率较高，蛋白质变性的可能性小。解析： 暂无解析 -
第8题：
问答题简述疏水色谱的原理，并说明基本操作步骤。正确答案： 原理：高浓度盐溶液中，亲水性较强的物质，分子内部的疏水基团外露，便可与疏水的固定相以疏水作用力相结合（吸附）。由于这种作用力大小不同，可以通过改变极性流动相的离子强度（由高到低）使其依次解吸附。即高浓度的盐溶液可将吸附力弱（小）（极性大）的物质先洗脱下来，而低浓度的盐则使吸附力强（大）（极性小）的物质被后洗脱下来。
注意：只有对极性很强的物质，才需在流动相中添加有机溶剂，以降低极性，使其解吸附。此时，须注意防止有效成分变性。
操作：
1.色谱柱和吸附剂的选择色谱柱规格：类似普通色谱。当被分离样品量较大时、被分离物与杂质间的疏水性差异较大时，选用体积较大的柱子（h：d≤3）。固定相选择：根据要分离物质的特点，结合吸附剂的性能进行选择。
2.装柱先将吸附剂悬浮于乙醇溶液中→浸泡离心→弃上清，收沉淀→50%（m/V）浓度悬浮于样品缓冲溶液中装柱（同常规）。
3.加样：样品预处理：补加盐→混匀→放置（片刻）上柱→吸附（0.5～1h）。
4.洗脱：平衡液洗涤浓度由高→低。即先用高离子强度的平衡液洗涤，再用低离子强度的平衡液洗脱。同时，收集和检测。
5.柱再生：用8mol/L的脲素溶液（或其缓冲溶液）洗涤（除杂）→平衡缓冲液平衡。解析： 暂无解析 -
第9题：
问答题简述色谱法的基本步骤。正确答案： 1、准备色谱柱：根据式样分析目的选择好固定相。
2、进样。
3、洗脱。
4、分析。解析： 暂无解析 -
第10题：
问答题简述气相色谱发测定甲醇原理及操作步骤。正确答案： 原理：利用不同醇类在氢火焰中的化学电离反应节进行检测，根据色谱峰的保留时间定性，以峰高与标准比较定量。
操作方法：分别吸取0.5ul样品及标准使用液注入色谱仪，制得色谱图。以各级保留时间与各标准品的保留时间对照定性。分别记录各组分峰高或峰面积与相应的标准比较定量。
说明：①本法最低检出浓度为：甲醇0.008g/100ml；杂醇油（以异丁醇计）0.01g/100ml。②与分光光度法想比较，后者嗦测得的甲醇值较气相色谱法的结果高。解析： 暂无解析 -
第11题：
问答题简述疏水层析的原理，并说明基本操作步骤？正确答案： 在载体表面连接上疏水的直链碳链或其他疏水基团，可以与蛋白质的某些疏水基团相互作用，从而实现多组分的分离。
在高盐浓度下，蛋白质表面的疏水区域暴露，固定相表面修饰了一些疏水基团，这样蛋白质的疏水部分即可与固定相发生较强的疏水相互作用，从而被结合在固定相表面，而一旦降低流动相的盐浓度即可实现蛋白质的洗脱。解析： 暂无解析 -
第12题：
问答题简述疏水层析的概念及其基本原理。正确答案： 疏水作用层析（HIC.是根据分子表面疏水性差别来分离蛋白质和多肽等生物大分子的一种较为常用的方法。
疏水性弱的物质，在较高离子强度的溶液时被洗脱下来，当离子强度降低时，疏水性强的物质才随后被洗脱下来。解析： 暂无解析 -
第13题：
简述疏水层析的原理，并说明基本操作步骤？
正确答案: 在载体表面连接上疏水的直链碳链或其他疏水基团，可以与蛋白质的某些疏水基团相互作用，从而实现多组分的分离。
在高盐浓度下，蛋白质表面的疏水区域暴露，固定相表面修饰了一些疏水基团，这样蛋白质的疏水部分即可与固定相发生较强的疏水相互作用，从而被结合在固定相表面，而一旦降低流动相的盐浓度即可实现蛋白质的洗脱。 -
第14题：
简述色谱法的基本步骤。
正确答案:1、准备色谱柱：根据式样分析目的选择好固定相。
2、进样。
3、洗脱。
4、分析。 -
第15题：
简述疏水层析的概念及其基本原理。
正确答案: 疏水作用层析（HIC.是根据分子表面疏水性差别来分离蛋白质和多肽等生物大分子的一种较为常用的方法。
疏水性弱的物质，在较高离子强度的溶液时被洗脱下来，当离子强度降低时，疏水性强的物质才随后被洗脱下来。 -
第16题：
简述气相色谱方法测定植物性食品中氨基甲酸酯类农药的残留原理及操作步骤。
正确答案:原理：含氮有机化合物被色谱柱分离后在加热的碱金属片的表面产生热分解，形成氰自由基（CN-），并且从被加热的碱金属表面放出的原子状态的碱金属于（Rb）接受电子变成（CN-），这个离子进一步与氢原子结合，放出电子的碱金属（Rb）变成正离子，由收集极收集，并作为信号电流而被测定。电流信号的大小与含氮化合物的含量成正比。以峰面积及峰高比较定量。仪器：附有火焰热离子检测器的气相色谱仪、旋转蒸发仪等。
操作方法：
（1）提取：称取粉碎粮食或蔬菜样品，置于具塞锥瓶中，加入无水甲醇、塞紧摇匀提取，然后过滤。将滤液转入分液漏斗中。
（2）净化：滤液加入石油醚振摇后静置分层，将下层（甲醇氯化钠溶液）放入另一分液漏斗中，用甲醇氯化钠溶液洗涤石油醚层二次，静止分层后。
（3）浓缩：于盛有样品净化液用二氯甲烷依次提取三次，将蒸馏瓶接上减压浓缩装置，于水浴旋转蒸发仪减压浓缩将残余物用二氯甲烷反复洗涤，然后吹氮气除尽二氯甲烷溶剂，用丙酮溶解残渣并定容，供色谱分析。
（4）测定：吸取标准液及样品净化液注入色谱仪中，以保留时间定性。以试样的峰高或面积与标准比较定量。 -
第17题：
简述高效液相色谱法测定胡萝卜素原理及操作步骤。
正确答案:样品中的β-胡萝卜素，用石油醚+丙酮混合液提取，经三氧化二铝纯化，然后用高效液相色谱法测定，以保留时间定性，峰高或峰面积定量。
操作步骤：样品提取：淀粉类食品：样品用石油醚或石油醚+丙酮混合液振摇提取，吸取上层黄色液体并转入蒸发器中，重复提取至无色。合并提取液，于旋转蒸发器上蒸发至干。液体食品：样品加石油醚+丙酮反复提取，分层，将下层水溶液放入另一分液漏斗中再提取至无色。合并提取液与旋转蒸发器蒸干。油类食品：样品加石油醚+丙酮反复提取，上层提取液为无色，合并提取液，蒸干。纯化：将样品提取液残渣，用石油醚溶解，进行氧化铝层析。用洗脱液丙酮+石油醚洗氧化铝柱，再加入溶解样品提取液的溶液，用丙酮+石油醚洗脱β—胡萝卜素，收集于容量瓶中。样品测定：20ul进样。 -
第18题：
问答题简述黄曲霉毒素B1薄层色谱法的原理和步骤。正确答案： 样品中黄曲霉毒素B1经提取、浓缩、薄层分离后，在波长365nm紫外光下产生蓝紫色荧光，根据其在薄层上显示荧光的最低检出量来测定含量。
仪器：紫外光灯：100~125W，带有波长365nm滤光片。
操作方法：
（1）取样
（2）提取
（3）测定：
①单向展开法：第一点：10μl0.04μg/ml黄曲霉毒素B1标准使用液。第二点：20μg 样液。第三点：20μl 样液+10μl0.04μg/ml黄曲霉素B1标准使用液。第四点：20μl 样液+10μl0.2μg/ml黄曲霉毒素B1标准使用液。
②双向展开法。滴加样式如下：滴加两点法：点样、展开、确证试验。解析： 暂无解析 -
第19题：
问答题简述蛋白质免疫印迹法的基本原理和主要操作步骤。正确答案： 蛋白质印迹法又称蛋白质免疫印迹法，是20世纪70年代末80年代初在蛋白质凝胶电泳和固相免疫测定的基础上发展起来的蛋白质检测技术，为检测样品中是否存在蛋白质抗原提供了一种可靠的方法。该法鉴定蛋白质的原理是根据被测蛋白能与特定抗体的结合特性和该蛋白的相对分子质量。
免疫印迹法程序可分为5个步骤：
（1）蛋白样品的制备；
（2）经过SDS-PAGE分离样品；
（3）分离的蛋白转移到膜载体上，转移后首先将膜上未反应的位点封闭起来以抑制抗体的非特异性吸附；
（4）用固定在膜上的蛋白质作为抗原，与对应的非标记抗体（一抗）结合；
（5）洗去未结合的一抗，加入酶耦联或放射性同位素标记的二抗，通过显色或放射性自显影法检测凝胶中的蛋白成分。解析： 暂无解析 -
第20题：
问答题简述高效液相色谱法测定食品中维生素A及E原理及操作步骤。正确答案： 样品中的维生素A及E皂化提取处理后，将其从不可皂化部分提取至有机溶剂中。用高效液相色谱C18反相柱将维生素A及E分离，经紫外检测器检测，并用内标法定量测定。
操作步骤：1、皂化：样品于皂化瓶中，加无水乙醇搅拌，颗粒物分散均匀为止。加10%抗坏血酸，苯并芘内标液，混匀。加氢氧化钾混匀，废水与回流30min皂化完全。
2、提取：将皂化后的样品移入分液漏斗，静层，弃去水层。用水洗分液漏斗中乙醚层，至不显碱性。
3、浓缩：将乙醚提取液经过无水硫酸钠滤至旋转蒸发瓶，待瓶中约2ml取出，用氮吹去掉乙醚，加入乙醇，混合提取。2样品分析：去样品浓缩液20ul，待绘制出色谱图后，再进行定性和定量。解析： 暂无解析 -
第21题：
问答题简述薄层色谱法的主要操作步骤是什么？正确答案： （1）薄层板的制备
（2）点样
（3）展开
（4）显色与检视
（5）记录解析： 暂无解析 -
第22题：
问答题简述高效液相色谱法测定胡萝卜素原理及操作步骤。正确答案： 样品中的β-胡萝卜素，用石油醚+丙酮混合液提取，经三氧化二铝纯化，然后用高效液相色谱法测定，以保留时间定性，峰高或峰面积定量。
操作步骤：样品提取：淀粉类食品：样品用石油醚或石油醚+丙酮混合液振摇提取，吸取上层黄色液体并转入蒸发器中，重复提取至无色。合并提取液，于旋转蒸发器上蒸发至干。液体食品：样品加石油醚+丙酮反复提取，分层，将下层水溶液放入另一分液漏斗中再提取至无色。合并提取液与旋转蒸发器蒸干。油类食品：样品加石油醚+丙酮反复提取，上层提取液为无色，合并提取液，蒸干。纯化：将样品提取液残渣，用石油醚溶解，进行氧化铝层析。用洗脱液丙酮+石油醚洗氧化铝柱，再加入溶解样品提取液的溶液，用丙酮+石油醚洗脱β—胡萝卜素，收集于容量瓶中。样品测定：20ul进样。解析： 暂无解析 -
第23题：
问答题高效液相色谱法测定低聚糖原理及操作步骤。正确答案： 原理：以乙腈、水作流动相在碳水化合物分析柱上糖的分离顺序是先单糖后双糖，先低聚后多聚，以示差折射检测器检测。
操作步骤：样品处理：1、固体样品加水，超声，定溶，用0.45um过滤测定。2、奶制品加无水乙醇，加热蛋白质沉淀，过滤，浓缩后定刻度。3、饮料或口服液，加水稀释定至刻度。测定。解析： 暂无解析