简述蛋白质的复性操作的主要方法。
题目
简述蛋白质的复性操作的主要方法。
相似考题
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第1题：
简述蛋白质变性与复性的概念。
正确答案: 在酸、碱、热、有机溶剂或辐照处理时，蛋白质的二、三、四级结构会发生不同程度的改变，这个过程称之为变性；变性的天然蛋白质，有时在引起变性的因素解除后，恢复原来结构性质的过程称之为蛋白质的复性。 -
第2题：
简述醋炙的主要操作方法及其适应的药物。
正确答案: （1）先拌醋后炒药将净制或切制后的药物，加入定量的米醋拌匀，闷润，待醋被吸尽后，置
炒制容器内，用文火炒至一定程度，取出晾凉，即得。此法适用于大多数植物类药材，如甘遂、商陆、芫花、柴胡、三棱等。
（2）先炒药后喷醋将净选后的药物，置炒制容器内，炒至表面熔化发亮（树脂类）或炒至
表面颜色改变，有腥气溢出（动物粪便类）时，喷洒定量米醋，炒至微干，取出后继续翻动，摊开晾干。此法适于用树脂类、动物粪便类药材，如乳香、没药、五灵脂等。 -
第3题：
简述常用的蛋白质沉淀方法
正确答案: 盐析法；
有机溶剂沉淀法；
等电点沉淀法；
选择性变性沉淀法；
有机聚合物沉淀法。 -
第4题：
利用液相色谱方法对包含体蛋白质进行复性比稀释复性法优越。
正确答案:正确 -
第5题：
简述蛋白质的变性与复性
正确答案: 1、蛋白质的变性作用：在某些物理、化学因素的影响下，蛋白质分子中次级键被破坏，结果蛋白质分子从有序紧密的构象变为无序而松散的构象，即蛋白质分子构象改变至解体的过程。
变性作用不涉及共价键（肽键和二硫键等）的断裂，一级结构保持完好；变性作用是一个协同过程，此过程是在变性剂浓度很窄范围内；或很窄的pH范围内，或很窄的温度间隔内突然发生的。
2、引起蛋白质变性因素
物理因素：热、紫外线照射、高压和表面张力等； 化学因素：酒精、尿素、丙酮等有机溶剂，酸，碱等。 3、变性过程中蛋白质分子的变化：
（1）蛋白质内部一些侧链基团暴露，如疏水基团外露等。
（2）蛋白质理化性质改变，如溶解度下降，蛋白质分子伸展，不对称性增加等。
（3）生物化学性质的改变，如变性后的蛋白质更易被蛋白酶水解等。
4、生物活性的丧失：生物活性丧失是蛋白质变性的主要特征。有时空间结构只有轻微的局部变化，甚至这些变化还没有影响物理化学性质时，蛋白质的生物活性就已经丧失了。 蛋白质的复性：当变性因素除去后，有些变性的蛋白质又可重新回复其天然构象，这一过程称为复性。 -
第6题：
简述蛋白质免疫印迹法的基本原理和主要操作步骤。
正确答案: 蛋白质印迹法又称蛋白质免疫印迹法，是20世纪70年代末80年代初在蛋白质凝胶电泳和固相免疫测定的基础上发展起来的蛋白质检测技术，为检测样品中是否存在蛋白质抗原提供了一种可靠的方法。该法鉴定蛋白质的原理是根据被测蛋白能与特定抗体的结合特性和该蛋白的相对分子质量。
免疫印迹法程序可分为5个步骤：
（1）蛋白样品的制备；
（2）经过SDS-PAGE分离样品；
（3）分离的蛋白转移到膜载体上，转移后首先将膜上未反应的位点封闭起来以抑制抗体的非特异性吸附；
（4）用固定在膜上的蛋白质作为抗原，与对应的非标记抗体（一抗）结合；
（5）洗去未结合的一抗，加入酶耦联或放射性同位素标记的二抗，通过显色或放射性自显影法检测凝胶中的蛋白成分。 -
第7题：
问答题简述蛋白质免疫印迹法的基本原理和主要操作步骤。正确答案： 蛋白质印迹法又称蛋白质免疫印迹法，是20世纪70年代末80年代初在蛋白质凝胶电泳和固相免疫测定的基础上发展起来的蛋白质检测技术，为检测样品中是否存在蛋白质抗原提供了一种可靠的方法。该法鉴定蛋白质的原理是根据被测蛋白能与特定抗体的结合特性和该蛋白的相对分子质量。
免疫印迹法程序可分为5个步骤：
（1）蛋白样品的制备；
（2）经过SDS-PAGE分离样品；
（3）分离的蛋白转移到膜载体上，转移后首先将膜上未反应的位点封闭起来以抑制抗体的非特异性吸附；
（4）用固定在膜上的蛋白质作为抗原，与对应的非标记抗体（一抗）结合；
（5）洗去未结合的一抗，加入酶耦联或放射性同位素标记的二抗，通过显色或放射性自显影法检测凝胶中的蛋白成分。解析： 暂无解析 -
第8题：
问答题简述蛋白质变性与复性的概念。正确答案： 在酸、碱、热、有机溶剂或辐照处理时，蛋白质的二、三、四级结构会发生不同程度的改变，这个过程称之为变性；变性的天然蛋白质，有时在引起变性的因素解除后，恢复原来结构性质的过程称之为蛋白质的复性。解析： 暂无解析 -
第9题：
问答题简述蛋白质的变性与复性，并说明其分子机制。正确答案： （1）在某些物理或化学因素作用下，蛋白质的空间构象被破坏，从而导致其理化性质的改变和生物活性的丧失，称为蛋白质的变性。一般蛋白质的变性主要发生二硫键和非共价键的破坏，但不涉及肽链一级结构的断裂。蛋白质变性后，其溶解度降低，粘度增加，丧失结晶能力，易被蛋白酶水解，酶活性和免疫活性丧失。
（2）若蛋白质变性程度较轻，去除变性因素后，有些蛋白质仍可恢复或部分恢复其原有的构象和功能，称为复性。例如在核糖核酸酶溶液中加入尿素和β—巯基乙醇，可解除其分子中的4对二硫键和氢键，使空间构象遭到破坏，丧失其生物活性。变性后如用透析方法除去尿素和β—巯基乙醇，并设法使巯基氧化成二硫键，核糖核酸酶又将恢复其原来的构象，生物学活性也可几乎全部恢复。但许多蛋白质变性后，空间构象破坏严重，不能复原，称为不可逆性变性。解析： 暂无解析 -
第10题：
问答题简述蛋白质的凯氏测定法定量的依据（原理），操作要点，方法特点？正确答案： （1）原理：样品与浓硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，其中碳和氢被氧化为二氧化碳和水逸出，而样品中的有机氮转化为氨与硫酸结合成硫酸铵。然后加碱蒸馏，使氨蒸出，用硼酸吸收后再以盐酸或硫酸标准溶液滴定。根据标准酸消耗量可测定总氮量，然后乘以蛋白质换算系数，可得到蛋白质含量。
（2）操作要点：样品消化；蒸馏；吸收与滴定。
（3）方法特点：蛋白质含量测定最常用的方法是凯氏定氮法，它是测定总有机氮的准确和操作较简便的方法之一，在国内外应用普遍。
凯氏法可用于所有食品的蛋白质测定，但因样品中常含有核酸、生物碱、含氮类脂、卟啉以及含色素等非蛋白质的含氮化合物，故结果称为粗蛋白质含量。解析： 暂无解析 -
第11题：
填空题指出蛋白质复性的三种方法：（）、（）、（）等。正确答案： 稀释法,透析法,液相色谱法解析： 暂无解析 -
第12题：
问答题简述醋炙的主要操作方法及其适应的药物。正确答案： （1）先拌醋后炒药将净制或切制后的药物，加入定量的米醋拌匀，闷润，待醋被吸尽后，置
炒制容器内，用文火炒至一定程度，取出晾凉，即得。此法适用于大多数植物类药材，如甘遂、商陆、芫花、柴胡、三棱等。
（2）先炒药后喷醋将净选后的药物，置炒制容器内，炒至表面熔化发亮（树脂类）或炒至
表面颜色改变，有腥气溢出（动物粪便类）时，喷洒定量米醋，炒至微干，取出后继续翻动，摊开晾干。此法适于用树脂类、动物粪便类药材，如乳香、没药、五灵脂等。解析： 暂无解析 -
第13题：
解释蛋白质的复性？
正确答案:若蛋白质变性程度较轻，去除变性因素后，有些蛋白质仍可恢复或部分恢复其原有的构象和功能，称为复性。但许多蛋白质变性后，空间构象破坏严重，不能复原，称为不可逆性变性。 -
第14题：
什么是沉淀法，简述沉淀蛋白质的几种主要方法的原理及应用。
正确答案:沉淀法：利用某种试剂使生物大分子沉淀，但不影响大分子结构的方法。
主要方法：
（1）中性盐沉淀（盐析法）：中性盐的亲水性大于蛋白质和酶分子的亲水性，所以在加入大量中性盐后，其夺走了水分子，破坏了水膜。同时又中和了电荷，破坏亲水胶体，蛋白质分子即形成沉淀。
应用：除了蛋白质和酶以外，多肽、多糖和核酸等都可以用盐析法进行沉淀分离。盐析法应用最广的还是在蛋白质领域。
（2）有机溶剂沉淀法：降低了水溶液的介电常数，减小了溶剂的极性。同时削弱了溶剂分子与蛋白质分子间的相互作用，从而导致蛋白质溶解度降低而沉淀。除此以外，使带电溶质分子更易互相吸引而凝集，破坏了蛋白质的水化膜，从而发生沉淀。
应用：生化制备。
（3）选择性变性沉淀法：利用蛋白质、酶与核酸等生物大分子与非目的生物大分子在物理化学性质等方面的差异，选择一定的条件使杂蛋白等非目的物质变性沉淀而得到提纯，称为选择性变性沉淀法。
应用：通常用于生物大分子分离纯化的初期，是分离纯化流程中附带进行的一个分离纯化步骤。
（4）等电点沉淀法：等电点沉淀法是利用具有不同等电点的两性电解质在达到电中性时溶解度最低，易发生沉淀，从而实现分离的方法。
应用：此法主要用于在分离纯化流程中去除杂蛋白，而不用于沉淀目的物。
（5）有机聚合物沉淀 -
第15题：
试述包含体复性的基本过程，复性过程错误发生的主要原因是什么？举例分析主要的复性方法的优缺点，为什么LC复性是最好的？
正确答案: 包含体复性的基本过程：
①分离包含体：第一步是对培养收集的细胞进行破碎，比较有效的方法是高压匀浆结合溶菌酶处理，然后5000~20000g离心，可使大部分包涵体沉淀，与可溶性蛋白分离。
②洗涤：包涵体沉淀需用去污剂（TritonX-100或脱氧胆酸钠）和低浓度变性剂（2mol/L尿素或盐酸胍等）洗涤除去脂类和膜蛋白，这一步很重要，否则会导致包涵体溶解和复性的过程中重组蛋白质的降解。
③溶解：包涵体的溶解必须用很强的变性剂，通过离子间的相互作用破坏包涵体蛋白间的氢键而增溶蛋白。去污剂可以破坏蛋白内的疏水键，可以增溶几乎所有的蛋白，但由于无法彻底去除而不允许用在制药行业中；酸可以破坏蛋白的次级键从而增溶蛋白，这种方法只适合少数蛋白质。对于含有半胱氨酸的蛋白，在增溶时应加入还原剂打开蛋白质中所有二硫键，对于没有二硫键的目标蛋白有时也应使用还原剂，因为含二硫键的杂蛋白会影响包涵体的溶解，同时还应加入金属螯合剂用来螯合Cu2+、Fe3+等金属离子以防止其与还原状态的巯基发生氧化反应。
复性过程错误发生的主要原因是：在去除变性剂的同时，重组蛋白质在体外折叠，分子间存在大量错误折叠和聚合，复性效率往往很低，包涵体蛋白折叠复性的效率实际上取决于正确折叠过程与聚集过程之间的竞争。
复性方法的优点：透析、稀释和超滤复性法，这三种方法是最传统也是应用最普遍的蛋白质折叠复性方法，使变性剂浓度降低到蛋白质能恢复折叠的浓度。
复性方法的缺点：复性活性回收率低，而且难于与杂蛋白分离。稀释法大大增加溶液体积，不利于后续的分离纯化；透析法耗时长，易形成无活性蛋白质聚集体；超滤法在膜上聚集变性，易造成膜污染；稀释法处理量太大，不利于工业放大。
LC复性是最好的原因：与传统的稀释法和透析法相比，液相色谱复性的优点是：
①在进样后可很快的除去变性剂；
②色谱固定相对变性蛋白质的吸附可明显的减少、甚至完全消除变性蛋白质分子在
脱离变性剂环境后的分子聚集，从而避免了沉淀的产生，提高蛋白质复性的质量和活性回收率；
③在蛋白质复性的同时，可使目标蛋白质与杂蛋白分离达到纯化的目的，使复性和纯化同时进行；
④便于回收变性剂，降低废水处理成本。 -
第16题：
简述蛋白质的性质及其分离方法
正确答案: 1、蛋白质的酸碱性质
在蛋白质分子中有游离的α-氨基、α-羧基，R基侧链上也有各种功能基团，因此蛋白质的很多物理化学性质与氨基酸是相同的，如蛋白质也是两性化合物；也可把它看成多价离子，也有等电点（pI）等。
2、蛋白质的胶体性质与沉淀
（1）蛋白质溶液属于胶体溶液
根据分散程度可以把分散系统分成三类：分散相质点小于1nm的为真溶液；大于100nm的为悬浊液；介于1-100nm的为胶体溶液。
分散相质点在胶体系统中保持稳定，需要具备三个条件：一是分散相的质点在1-100nm间；二是分散相质点带有同种电荷，结果质点间互相排斥，不易产生沉淀；三是分散相质点能与溶剂形成溶剂化层，如水分层。质点的水化层使质点不易相互靠近，从而不易产生沉淀。 蛋白质溶液属于胶体溶液，和一般的胶体系统一样也有布朗运动、丁达尔现象及不能通过半透膜等特性。
（2）蛋白质分子的质点大小、带同种电荷和水化层是稳定蛋白质胶体系统的主要因素。任何影响这些条件的因素都有会影响蛋白质溶液的稳定性，使蛋白质发生沉淀。 沉淀蛋白质的几种常用方法
①盐析法：向蛋白质溶液中加入大量的中性盐（如氯经钠、硫酸钠等），使蛋白质脱去水化层而沉淀，这种方法一般会使蛋白质变性。
②有机溶剂沉淀法：向蛋白质溶液中加入一定量的有机溶剂（如乙醇、丙酮），使蛋白质脱去水化层，同时降低了溶剂的介电常数，从而使蛋白质沉淀。
③重金属盐沉淀法：当溶液pH大于等电点时，蛋白质颗粒带负电，这样就易和重金属离子结合成不溶性盐而沉淀。
④生物碱试剂和某些酸类沉淀法：当溶液pH小于等电点时，蛋白质颗粒带正电荷，易与生物碱试剂、酸根离子生成难溶性盐而沉淀 。
⑤加热变性沉淀法：当蛋白质处于等电点，加热凝固最完全和最迅速。 -
第17题：
简述包含体形成的原因和包含体蛋白复性的主要步骤。
正确答案: 重组蛋白在细菌中表达时，尤其当表达目的蛋白量超过细菌体总蛋白量10%时，会在细胞内与细菌杂蛋白、核酸等成分聚集成没有生物活性的直径0.1-0.3μm的固体颗粒，这种不溶性聚合体即包含体（inclusion body）。
生成包含体的原因可能有是蛋白质合成速度太快，多肽链相互缠绕，影响了多肽链的正确折叠，导致疏水基团外露等。
（包含体的形成有利于防止蛋白酶对表达蛋白的降解，并且非常有利于分离表达产物。但包含体形成后，表达蛋白不具有生物活性，因此必须溶解包含体并对表达蛋白进行复性。）
包含体复性即从伸展态－中间体－后期中间体－天然态的过程，操作步骤一般为用超声波、匀浆等使菌体破碎后，离心得到包含体－加入强蛋白质变性剂如6～8mol／L盐酸胍或9～10mol／L尿素溶解包含体－用透析、稀释和超滤复性法等等方法使之正确折叠。 -
第18题：
蛋白质的复性
正确答案:指在一定条件下，变性的蛋白质分子恢复其原有的天然构象并恢复生物活性的现象。 -
第19题：
问答题什么是沉淀法，简述沉淀蛋白质的几种主要方法的原理及应用。正确答案： 沉淀法：利用某种试剂使生物大分子沉淀，但不影响大分子结构的方法。
主要方法：
（1）中性盐沉淀（盐析法）：中性盐的亲水性大于蛋白质和酶分子的亲水性，所以在加入大量中性盐后，其夺走了水分子，破坏了水膜。同时又中和了电荷，破坏亲水胶体，蛋白质分子即形成沉淀。
应用：除了蛋白质和酶以外，多肽、多糖和核酸等都可以用盐析法进行沉淀分离。盐析法应用最广的还是在蛋白质领域。
（2）有机溶剂沉淀法：降低了水溶液的介电常数，减小了溶剂的极性。同时削弱了溶剂分子与蛋白质分子间的相互作用，从而导致蛋白质溶解度降低而沉淀。除此以外，使带电溶质分子更易互相吸引而凝集，破坏了蛋白质的水化膜，从而发生沉淀。
应用：生化制备。
（3）选择性变性沉淀法：利用蛋白质、酶与核酸等生物大分子与非目的生物大分子在物理化学性质等方面的差异，选择一定的条件使杂蛋白等非目的物质变性沉淀而得到提纯，称为选择性变性沉淀法。
应用：通常用于生物大分子分离纯化的初期，是分离纯化流程中附带进行的一个分离纯化步骤。
（4）等电点沉淀法：等电点沉淀法是利用具有不同等电点的两性电解质在达到电中性时溶解度最低，易发生沉淀，从而实现分离的方法。
应用：此法主要用于在分离纯化流程中去除杂蛋白，而不用于沉淀目的物。
（5）有机聚合物沉淀解析： 暂无解析 -
第20题：
问答题试述包含体复性的基本过程，复性过程错误发生的主要原因是什么？举例分析主要的复性方法的优缺点，为什么LC复性是最好的？正确答案： 包含体复性的基本过程：
①分离包含体：第一步是对培养收集的细胞进行破碎，比较有效的方法是高压匀浆结合溶菌酶处理，然后5000~20000g离心，可使大部分包涵体沉淀，与可溶性蛋白分离。
②洗涤：包涵体沉淀需用去污剂（TritonX-100或脱氧胆酸钠）和低浓度变性剂（2mol/L尿素或盐酸胍等）洗涤除去脂类和膜蛋白，这一步很重要，否则会导致包涵体溶解和复性的过程中重组蛋白质的降解。
③溶解：包涵体的溶解必须用很强的变性剂，通过离子间的相互作用破坏包涵体蛋白间的氢键而增溶蛋白。去污剂可以破坏蛋白内的疏水键，可以增溶几乎所有的蛋白，但由于无法彻底去除而不允许用在制药行业中；酸可以破坏蛋白的次级键从而增溶蛋白，这种方法只适合少数蛋白质。对于含有半胱氨酸的蛋白，在增溶时应加入还原剂打开蛋白质中所有二硫键，对于没有二硫键的目标蛋白有时也应使用还原剂，因为含二硫键的杂蛋白会影响包涵体的溶解，同时还应加入金属螯合剂用来螯合Cu2+、Fe3+等金属离子以防止其与还原状态的巯基发生氧化反应。
复性过程错误发生的主要原因是：在去除变性剂的同时，重组蛋白质在体外折叠，分子间存在大量错误折叠和聚合，复性效率往往很低，包涵体蛋白折叠复性的效率实际上取决于正确折叠过程与聚集过程之间的竞争。
复性方法的优点：透析、稀释和超滤复性法，这三种方法是最传统也是应用最普遍的蛋白质折叠复性方法，使变性剂浓度降低到蛋白质能恢复折叠的浓度。
复性方法的缺点：复性活性回收率低，而且难于与杂蛋白分离。稀释法大大增加溶液体积，不利于后续的分离纯化；透析法耗时长，易形成无活性蛋白质聚集体；超滤法在膜上聚集变性，易造成膜污染；稀释法处理量太大，不利于工业放大。
LC复性是最好的原因：与传统的稀释法和透析法相比，液相色谱复性的优点是：
①在进样后可很快的除去变性剂；
②色谱固定相对变性蛋白质的吸附可明显的减少、甚至完全消除变性蛋白质分子在
脱离变性剂环境后的分子聚集，从而避免了沉淀的产生，提高蛋白质复性的质量和活性回收率；
③在蛋白质复性的同时，可使目标蛋白质与杂蛋白分离达到纯化的目的，使复性和纯化同时进行；
④便于回收变性剂，降低废水处理成本。解析： 暂无解析 -
第21题：
问答题简述蛋白质的复性操作的主要方法。正确答案： （1）将溶液稀释，降低变性剂的浓度和降低蛋白质的浓度，使蛋白质复性。
该法的缺点是增大了后处理体积。
（2）利用透析、超滤等膜分离技术去除变性剂。
该法适用于较高浓度的蛋白质复性。复性的效果取决于蛋白质聚集和正确折叠之间的竞争。为了减轻聚集，复性通常在低浓度（10～100μg/ml）下进行。解析： 暂无解析 -
第22题：
判断题利用液相色谱方法对包含体蛋白质进行复性比稀释复性法优越。A对
B错
正确答案： 对解析： 暂无解析 -
第23题：
问答题简述蛋白质的变性与复性正确答案： 1、蛋白质的变性作用：在某些物理、化学因素的影响下，蛋白质分子中次级键被破坏，结果蛋白质分子从有序紧密的构象变为无序而松散的构象，即蛋白质分子构象改变至解体的过程。
变性作用不涉及共价键（肽键和二硫键等）的断裂，一级结构保持完好；变性作用是一个协同过程，此过程是在变性剂浓度很窄范围内；或很窄的pH范围内，或很窄的温度间隔内突然发生的。
2、引起蛋白质变性因素
物理因素：热、紫外线照射、高压和表面张力等； 化学因素：酒精、尿素、丙酮等有机溶剂，酸，碱等。 3、变性过程中蛋白质分子的变化：
（1）蛋白质内部一些侧链基团暴露，如疏水基团外露等。
（2）蛋白质理化性质改变，如溶解度下降，蛋白质分子伸展，不对称性增加等。
（3）生物化学性质的改变，如变性后的蛋白质更易被蛋白酶水解等。
4、生物活性的丧失：生物活性丧失是蛋白质变性的主要特征。有时空间结构只有轻微的局部变化，甚至这些变化还没有影响物理化学性质时，蛋白质的生物活性就已经丧失了。 蛋白质的复性：当变性因素除去后，有些变性的蛋白质又可重新回复其天然构象，这一过程称为复性。解析： 暂无解析