常用目的基因制备的方法及原理是哪些？
题目
常用目的基因制备的方法及原理是哪些？
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第1题：
什么是基因诊断？基因诊断中常用的方法有哪些？试简述其中一种方法的原理。
正确答案: 基因诊断是指用分子生物学的技术对引起疾病的原因——遗传基因、致病微生物和寄生虫，以及某些恶性肿瘤在基因水平上进行病原学和细胞遗传基因的检测和分析。基因诊断中常用的方法有核酸分子杂交、PCR、DNA芯片技术、限制酶酶谱分析和DNA序列测定等。
核酸分子杂交是基因诊断的最基本的方法之一。它的基本原理是：互补的核酸单链能够在一定条件下结合成双链，即能够进行杂交。它不仅能在DNA和DNA之间进行，也能在DNA和RNA之间进行。因此，当用一段已知基因的核酸序列作探针，与变性后的单链基因组DNA接触时，如果两者的碱基完全配对，它们即互补地结合成双链，从而表明被测基因组DNA中含有已知的基因序列。 -
第2题：
试述基因芯片的工作原理及制备。
正确答案:基因芯片技术是建立在基因探针和杂交测序技术上的一种高效、快速的核酸序列分析手段。它将大量探针分子固定于支持物上，然后与标记的样品进行杂交，通过检测杂交信号的强度及分布来进行分析。在一块1cm2大小的基因芯片上，根据需要可固定数以千计甚至万计的基因，以此形成一个密集的基因方阵，实现对千万个基因的同步检测。基因芯片技术主要包括四个主要步骤：芯片制备、样品制备、杂交反应和信号检测以及结果分析。 -
第3题：
简述基因诊断的常用技术方法和原理。
正确答案:所谓基因诊断，就是以DNA或RNA为诊断材料，通过检查基因的存在、缺失或表达异常，对人体的状态或疾病作出诊断的方法和过程。
基因诊断通常分为对基因突变的诊断、多态性分析和基因表达异常的诊断。常用技术有：1.核酸分子杂交（具有互补序列的两条核酸单链在一定条件下按碱基互补配对原则形成双链的过程。其基本原理是：具有互补序列的两条单链核酸分子在一定条件下（适当温度、离子强度等），按碱基互补配对原则，重新形成双链。）
①Southern印迹法；②Northern印迹法；③斑点杂交；④原位杂交
2.聚合酶链式反应（在模板、引物、4种dNTP和耐热DNA聚合酶存在的条件下，利用DNA半保留复制和其在不同温度下变性复性的特性，人为控制温度——高温变性，低温复性，室温延伸，循环多次后，特异性扩增位于两段已知序列之间的DNA区段）
3.单链构象多态性检测（DNA经变性形成单链后，在中性条件下单链DNA会因其分子内碱基之间的相互作用，形成一定的分子构象，相同长度的单链DNA，如果碱基序列不同，形成的构象就不同）
4.限制酶酶谱分析（基因突变可能导致基因上某一限制酶识别位点的丢失或相对位置发生改变，以此酶消化待测DNA和野生型对照DNA，通过比较二者的酶切片段的长度，数量上的差异可判断待测DNA的突变情况）
5.DNA序列测定
6.DNA芯片技术 它们共同的原理为是检测DNA或RNA的结构变化与否，量的多少及表达功能是否正常，以确定被检查者是否存在基因水平的异常变化，以此作为疾病确证的依据
互补链，选中间有三个氢键连接的碱基组合，寄生生物与宿主之间的关系，关于某种遗传病的两道逻辑推理题。还有两题忘了。概念题有四个，答案依次为合成代谢、叶绿素、光合作用第三阶段的电子载体（自己去找）、三羧酸循环。实验设计题一为：关于21三体综合症（唐氏综合症）的早期检查的一个设计（与游离的胎儿DNA在母体血液中有关）；题二为NaOH引起某实验失败的验证的设计；题三为甲基化去甲基化T%含量与构建文库是片段大小成反比的这种实验现象的解释；题四说说基因组学与本学科的展望。 -
第4题：
分离纯化基因工程药物常用的色谱方法有哪些？它们的原理是什么？
正确答案: 分离纯化基因工程药物常用的色谱方法有：离子交换色谱，疏水色谱，亲和色谱和凝胶过滤色谱；
离子交换色谱，以离子交换剂为固定相，依据流动相中的组分离子和交换剂上的平衡离子进行可拟交换时的结合力大小的差别而进行分离的一种色谱方法；
疏水色谱，利用蛋白质表面的疏水区域与固定相上疏水性基团相互作用力的差异对蛋白质组分进行分离的色谱方法；
亲和色谱：利用固定化配体与目的蛋白质之间非常特异的生物亲和力进行吸附，这种结合既是特异的又是可逆的，改变条件可以使这种结合解除的原理分离纯化蛋白质；
凝胶过滤色谱，是以多孔性凝胶填料为固定相，按分子大小对溶液中各组分进行分离的液相色谱方法。 -
第5题：
目的基因又称（）.
- A、制造基因
- B、靶基因
- C、制备基因
- D、获取基因
正确答案:B -
第6题：
获得目的基因的手段有哪些？并简述其工作原理.
正确答案: 目的基因的获取方法有：从基因文库中提取目的基因，使用PCR扩增技术获得目的基因，人工合成。
①从基因文库中获取：用限制性内切酶直接获取
②鸟枪法：用限制酶将供体细胞中的DNA切成许多片段，将这些片段分别载入运载体，然后通过运载体分别转入不同的受体细胞，让供体细胞所提供的DNA（外源DNA）的所有片段分别在各个受体细胞中大量复制（在遗传学中叫做扩增），从中找出含有目的基因的细胞，再用一定的方法把带有目的基因的DNA片段分离出来。
③mRNA逆转录成DNA，“RT-PCR法”
真核生物的基因含有不表达的内含子，而有时内含子序列很长，因此这种基因难以和载体DNA结合。这种方法是将含有目的基因的mRNA提取出来，然后以mRNA为模板用，用逆转录酶合成cDNA，利用特异性引物PCR钓取目的基因，最后测序验证。
④人工合成：根据已知氨基酸序列合成DNA
根据基因表达产物的氨基酸顺序，搞清楚基因的核苷酸序列，然后先合成一个个含少量核苷酸的DNA片段，再利用碱基对互补关系使它们形成双链DNA片段，再用连接酶把小的双链DNA片段逐个按顺序连接起来，使双链逐渐加长，最后得到一个完整基因。 -
第7题：
常用的目的基因的获取方法有哪些？
正确答案: 制备基因组文库、构建cDNA文库、PCR扩增目的基因、人工合成DNA技术 -
第8题：
什么是基因探针？制备基因探针的方法有哪些？
正确答案: 基因探针（probE.是一段与目的基因互补的核酸序列：DNA或RNA，用来待测样品DNA或RNA进行核酸分子杂交，可判断两者的同源程度。
制备方法：
（1）缺口平移法
（2）随机引物标记法
（3）生物素标记法（标记方法可分为参入法、末端标记法和光化学法）
（4）酶标记法
（5）半抗原标记法 -
第9题：
目前常用的获得目的基因的方法有（）、（）和（）。
正确答案:鸟枪法；cDNA法；人工合成 -
第10题：
问答题隔热耐火材料的制备方法及原理有哪些？（列举3种）正确答案： （1）通过添加可燃物或易挥发物形成气孔：在制砖的泥料中加入容易烧尽的可燃物，如炭末、锯木屑等，使制品在烧成后具有一定的气孔。
优点：孔径尺寸、气孔率、气孔形貌可控。
缺点：气孔分布很难均匀，可燃物烧不尽时容易出现黑芯，环境污染。
（2）发泡法
1.泡沫法：在制砖的泥料中加入泡沫剂，如松香皂等，并以机械方法使之起泡，经烧成后获得多孔的制品。
2.化学法：在泥料中加入碳酸盐和酸、苛性碱和铝或金属和酸等，借化学反应产生气体，使制品获得气孔。
优点：可制备各种孔径大小和形状的多孔陶瓷，既可以获得开孔材料，也可以获得闭孔材料，特别适合制备闭孔材料。
缺点：工艺条件难以控制和对原料的要求较高。
（3）挤压法在制砖的泥料中加入造孔剂，经挤压成型，烧成后获得多孔的制品。
优点：可以根据需要对孔形状和孔大小进行精确设计。
缺点：不能形成复杂孔道结构和孔尺寸较小的材料
（4）颗粒堆积形成气孔结构：凭借骨料颗粒按一定堆积方式堆积而成，颗粒靠粘结剂或自身粘合成型，颗粒间的孔隙形成相互贯通的微孔。
优点：通过控制颗粒尺寸，能控制孔径大小。
缺点：对颗粒尺寸范围要求严格，不能形成闭气孔。
（5）原位分解合成技术：利用原料矿物在一定温度分解出气体的特性，将此原料和其它原料混合均匀，加热到一定温度，即会在试样内部留下气孔，分解后的产物与其它原料原位反应，生成所需的多孔结构。
（6）多孔材料法用天然的硅藻土或人造的粘土泡沫熟料、氧化铝或氧化锆空心球等多孔原料制取轻质耐火砖。或者将纤维制成定形制品。解析： 暂无解析 -
第11题：
问答题制备基因探针的方法有哪些？正确答案： 制备方法：
（1）缺口平移法
（2）随机引物标记法
（3）生物素标记法（标记方法可分为参入法、末端标记法和光化学法）
（4）酶标记法
（5）半抗原标记法解析： 暂无解析 -
第12题：
问答题试述基因芯片的工作原理及制备。正确答案： 基因芯片技术是建立在基因探针和杂交测序技术上的一种高效、快速的核酸序列分析手段。它将大量探针分子固定于支持物上，然后与标记的样品进行杂交，通过检测杂交信号的强度及分布来进行分析。在一块1cm2大小的基因芯片上，根据需要可固定数以千计甚至万计的基因，以此形成一个密集的基因方阵，实现对千万个基因的同步检测。基因芯片技术主要包括四个主要步骤：芯片制备、样品制备、杂交反应和信号检测以及结果分析。解析： 暂无解析 -
第13题：
把目的基因导入受体细胞常用的方法？
正确答案: ①运用如质粒、大肠杆菌λ噬菌体、Ti质粒等载体；
②利用微弹射击法；
③电击法；
④PEG（聚乙二醇）介导法。 -
第14题：
常用的癌基因诊断方法有哪些？
正确答案: ①基因点突变的检测；
②基因扩增的检测；
③表达异常的检测；
④重排、缺失及多态性的检测；
⑤原位杂交。 -
第15题：
常用的工业催化剂的制备方法有哪些？各自的有缺点及适用场合是什么？
正确答案: （1）沉淀法：常用方法，可制备多组分催化剂影响因素：1）沉淀剂、金属盐的性质2）沉淀反应条件：沉淀剂与金属盐的浓度、pH、温度、加料顺序、搅拌速度、沉淀物的生成速度、沉淀时间、洗涤与干燥方法等（2）浸渍法：制备负载型催化剂的常用方法过量溶液浸渍法、等体积浸渍、多次浸渍、蒸汽相浸渍
（3）热分解法（or固相反应法）：采用可加热分解的盐类：硝酸盐、碳酸盐、草酸盐等1）原料的影响（碱土金属的硝酸盐只能得到亚硝酸盐）2）热分解条件对分解产物的影响：分解温度↑与分解时间↑→粒度↑（4）熔融法（5）还原法：多用于金属氧化物的制备 -
第16题：
制备包合物常用的包合材料是什么？包合物的制备方法有哪些？
正确答案:制备包合物常用的包合材料是环糊精及其衍生物。
包合物的制备方法有：饱和水溶液法、研磨法、超声波法、冷冻干燥法、喷雾干燥法等。 -
第17题：
简述常用目的基因制备的方法及其原理？
正确答案:生物学方法；化学合成法；基因文库法；利用PCR扩增法。
原理：
①生物学方法是采用基因工程手段把染色体DNA用限制内切酶切割，将所有片段都连接到某种载体上，转入大肠杆菌中增殖，再用适当方法来筛选含该基因的重组体菌落，从重组题细菌提取DNA，经酶切后得到目的基因。
②化学合成法是以单核苷酸为原料，在体外用化学方法按照已知基因的碱基序列，先合成DNA短片段，再依次连接而成完整的目的基因链。
③基因文库法是将某种生物全部基因组的遗传信息，贮存在可以长期保存的稳定重组体中，以备需要时能够随时应用它分离所需要的目的基因。
④利用PCR扩增法是在模板DNA、引物和4种脱氧核糖核苷酸存在的条件下，利用DNA聚合酶催化合成反应，体外扩增特异DNA片段。 -
第18题：
常用的目的基因与载体的连接方法有哪些？
正确答案: 外源DNA片段同载体分子连接的方法，即DNA分子体外重组技术，主要是依赖于核酸内切限制酶和DNA连接酶的作用.一般说来在选择外源DNA同载体分子连接反应程序时，需要考虑到下列三个因素：
（1）实验步骤要尽可能地简单易行；
（2）连接形成的"接点”序列，应能被一定的核酸内切限制酶重新切割，以便回收插入的外源DNA片段；
（3）对转录和转译过程中密码结构的阅读不发生干扰。 -
第19题：
制备基因探针的方法有哪些？
正确答案: 制备方法：
（1）缺口平移法
（2）随机引物标记法
（3）生物素标记法（标记方法可分为参入法、末端标记法和光化学法）
（4）酶标记法
（5）半抗原标记法 -
第20题：
简述目的基因的制备方法。
正确答案: （1）采用生物学方法，（2）采用化学合成法，（3）基因文库法，（4）利用PCR扩增法 -
第21题：
目前常用的获得目的基因的方法有（）、（）、（）
正确答案:鸟枪法；cDNA法；人工合成 -
第22题：
判断题大量制备已被克隆基因编码蛋白产物的常用方法是体外转录和翻译。A对
B错
正确答案： 对解析： 暂无解析 -
第23题：
单选题制备目的基因的方法是：（）ADNA复制
BRNA转录
CmRNA反转录
DRNA复制
正确答案： D解析： 暂无解析