简述获得目的基因常用的几种方法。

参考答案：克隆真核基因常用的方法有逆转录法和化学合成法。
一、逆转录法
逆转录法就是先分离纯化目的基因的mRNA，再反转录成互补DNA，然后进行互补DNA的克隆表达。从产生该蛋白质的真核细胞中提取mRNA，以其为模板，在逆转录酶的作用下，反转录合成该蛋白质mRNA的互补DNA，再以互补DNA为模板，在逆转录酶或DNA聚合酶作用下，最终合成编码该蛋白质的双链DNA序列，该序列不含内含子。
(1)mRNA的纯化
细胞内含有三种RNA，mRNA占RNA总量的2%-5%，相对分子量大小不一致，分离也有很大的困难，但是mRNA的3’末端常含有一多聚腺苷酸组成的末端，长达20-250个腺苷酸，足以吸附于寡聚胸苷酸-纤维素上，从而可以用亲和层析法将mRNA从细胞总RNA上分离出来，可得到纯度较高的mRNA。
(2)互补DNA第一链的合成
mRNA的3’末端常含有一多聚腺苷酸序列，可用寡聚脱氧胸苷酸为引物，在逆转录酶的催化下，开始互补DNA的合成。在合成反应体系中加入一种放射性标记的dNTP，在反应中以及反应后可通过测定放射性标记的dNTP掺入量，计算出互补DNA的合成效率，在凝胶电泳后，进行放射自显影分析产物的分子大小，探索最佳反应条件。
(3)互补DNA第二条链的合成
先用碱解或核酸酶酶解的方法除去互补DNA-mRNA杂交链中的mRNA链，然后以互补DNA第一链为模板合成第二链，并用核酸酶S1专一性切除单链DNA。
(4)互补DNA克隆
载体有两种质粒和噬菌体，根据重组后插入的互补DNA是否能够表达、能否经转录和翻译合成蛋白质，又将载体分为表达型载体和非表达型载体。互补DNA插入片段小于10千碱基对，可选用质粒载体，如大于10千碱基对则选用噬菌体作为载体。
二、化学合成法
较小的蛋白质或多肽的编码基因可以采用人工化学合成法合成，其先决条件是已知目的基因的核苷酸序列，或已知蛋白质的氨基酸序列，按相应的密码子推导出DNA的碱基序列。
用化学方法合成目的基因不同部位的两条链的寡核苷酸短片段，再退火成为两端形成粘末端的DNA双链片段，然后将这些双链片段按正确的次序进行退火使连接成较长的DNA片段，再用连接酶连接成完整的基因。
人工化学合成的限制：(1)不能合成太长的基因，50-60个碱基对;
(2)人工合成碱基对时，遗传密码的简并会为选择密码子带来很大的困难;
(3)费用较高。

正确答案：蠕虫病毒防治方法 它的传染机理是利用网络进行复制和传播传染途径是通过网络和电子邮件。比如近几年危害很大的“尼姆达”病毒就是蠕虫病毒的一种。防止系统漏洞类蠕虫病毒的侵害最好的办法是打好相应的系统补丁。可以应用瑞星杀毒软件的“漏洞扫描”工具这款工具可以引导用户打好补丁并进行相应的安全设置彻底杜绝病毒的感染。防范邮件蠕虫病毒的最好办法是提高安全意识不要轻易打开带有附件的电子邮件。另外启用瑞星杀毒软件的“邮件发送监控”和“邮件接收监控”功能也可以提高对病毒邮件的防护能力。 (2)“震荡波”病毒的防治方法 若用户没有感染该病毒首先应迅速下载微软补丁程序迅速升级杀毒软件到最新版本然后打开个人防火墙将安全等级设置为中、高级封堵病毒对该端口的攻击。若确定已经染毒则应迅速下载免费的专杀工具。 (3)“冲击波”病毒的防治方法 被“冲击波”病毒感染的计算机最常见的现象是系统在启动1分钟后反复重启用户这时候没有时间上网去下载专杀工具或打补丁防治方法如下。 i)使用启动盘在DOS环境下清除病毒 ①当用户计算机出现以上现象后用DOS系统启动盘启动进入DOS环境下进入C盘的操作系统目录操作命令集为C:CD C:\windows(或CD c:\winnt)。 ②查找目录中的“msblast.exe”病毒文件。命令操作集为dir msblast.exe/s/p。 ③找到后进入病毒所在的子目录然后将该病毒文件删除。命令操作集为Del msblast.exe。 ii)进入安全模式手工清除病毒 如果用户没有DOS启动盘还有一个方法就是启动系统后进入安全模式然后搜索C盘查找msblast.exe文件找到后将该文件删除然后正常启动计算机即可。 iii)打补丁 当用户手工清除了病毒体后应上网先进入微软网站下载相应的系统补丁给系统打上补丁。 iv)使用专杀工具 打完补丁后用户应下载一个瑞星专杀工具扫描一下系统然后到瑞星网站将瑞星杀毒软件升级到最新版打开实时监控。 (4)特洛伊木马防治方法 特洛伊木马是一种基于远程控制的黑客工具。防治方法如下： ①不要随便运行别人给你的程序特别是.exe可执行程序。 ②不要到不正规的站点下载软件因为许多黑客将木马隐藏在软件的安装程序里。 ③启用防御工具LockDown它能随时监视注册表等文件的变化并且对删除木马有帮助。 ④养成经常查杀木马的良好习惯并留心升级最新的查杀木马的工具或杀毒软件。
蠕虫病毒防治方法 它的传染机理是利用网络进行复制和传播，传染途径是通过网络和电子邮件。比如近几年危害很大的“尼姆达”病毒就是蠕虫病毒的一种。防止系统漏洞类蠕虫病毒的侵害，最好的办法是打好相应的系统补丁。可以应用瑞星杀毒软件的“漏洞扫描”工具，这款工具可以引导用户打好补丁并进行相应的安全设置，彻底杜绝病毒的感染。防范邮件蠕虫病毒的最好办法是提高安全意识，不要轻易打开带有附件的电子邮件。另外，启用瑞星杀毒软件的“邮件发送监控”和“邮件接收监控”功能，也可以提高对病毒邮件的防护能力。 (2)“震荡波”病毒的防治方法 若用户没有感染该病毒，首先应迅速下载微软补丁程序，迅速升级杀毒软件到最新版本，然后打开个人防火墙，将安全等级设置为中、高级，封堵病毒对该端口的攻击。若确定已经染毒，则应迅速下载免费的专杀工具。 (3)“冲击波”病毒的防治方法 被“冲击波”病毒感染的计算机，最常见的现象是系统在启动1分钟后反复重启，用户这时候没有时间上网去下载专杀工具或打补丁，防治方法如下。 i)使用启动盘，在DOS环境下清除病毒 ①当用户计算机出现以上现象后，用DOS系统启动盘启动进入DOS环境下，进入C盘的操作系统目录，操作命令集为C:CD C:\windows(或CD c:\winnt)。 ②查找目录中的“msblast.exe”病毒文件。命令操作集为dir msblast.exe/s/p。 ③找到后进入病毒所在的子目录，然后将该病毒文件删除。命令操作集为Del msblast.exe。 ii)进入安全模式，手工清除病毒 如果用户没有DOS启动盘，还有一个方法，就是启动系统后进入安全模式，然后搜索C盘，查找msblast.exe文件，找到后将该文件删除，然后正常启动计算机即可。 iii)打补丁 当用户手工清除了病毒体后，应上网先进入微软网站，下载相应的系统补丁，给系统打上补丁。 iv)使用专杀工具 打完补丁后，用户应下载一个瑞星专杀工具，扫描一下系统，然后到瑞星网站将瑞星杀毒软件升级到最新版，打开实时监控。 (4)特洛伊木马防治方法 特洛伊木马，是一种基于远程控制的黑客工具。防治方法如下： ①不要随便运行别人给你的程序，特别是.exe可执行程序。 ②不要到不正规的站点下载软件，因为，许多黑客将木马隐藏在软件的安装程序里。 ③启用防御工具LockDown，它能随时监视注册表等文件的变化，并且对删除木马有帮助。 ④养成经常查杀木马的良好习惯，并留心升级最新的查杀木马的工具或杀毒软件。

参考答案：A