简述不对称PCR。
题目
简述不对称PCR。
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第1题：
能对未知序列进行扩增的PCR是（）
- A、多重PCR
- B、巢式PCR
- C、原位PCR
- D、反向PCR
- E、不对称PCR
正确答案:D -
第2题：
不对称PCR
正确答案:是用不等量的一对引物，PCR扩增后产生大量的单链DNA（SSDNA）.这对引物分别称为非限制引物与限制性引物，其比例一般为50～1001∶，在PCR反应的最初10～15个循环中，其扩增产物主要是双链DNA，但当限制性引物（低浓度引物）消耗完后，非限制性引物（高浓度引物）引导的PCR就会产生大量的单链DNA。因PCR反应中使用的二种引物浓度不同，因此称为不对称PCR。 -
第3题：
可以产生大量单链DNA的PCR技术称作（）。
- A、共享引物PCR
- B、不对称PCR
- C、彩色PCR
- D、定量PCR
- E、差异显示PCR
正确答案:B -
第4题：
简述PCR的原理及其应用。
正确答案:PCR技术是模拟体内条件下，应用DNA聚合酶反应特异性扩增某一DNA片段的技术。它根据待扩增区域两端已知序列合成两个与模板DNA互补的核苷酸引物，这一单链引物的序列决定了待扩增片段的特异性和片段长度，当有模板DNA存在时，引物便可在一定的复性温度下特异地与热变性形成单链的DNA模板互补形成“退火”。当有DNA聚合酶和dNTP存在时，便可在一定条件下，按5（→3（方向从引物端合成DNA链，从而可以产生倍增的DNA片段，当经过30～35个周期后便可产生100万倍以上的所需DNA片段。由于PCR扩增技术的快速、简便、准确、可靠，因此，该技术已广泛应用于遗传病的基因诊断，病原体的检测，肿瘤的DNA诊断，法医学亲权鉴定，性别鉴定以及在DNA水平上研究生物进化等。 -
第5题：
何谓易错PCR技术？简述易错PCR技术进行体外基因突变的主要过程
正确答案:指从酶的单一基因出发，在改变反应条件的情况下进行PCR，使扩增得到的基因出现碱基配对错误，从而引起基因突变的技术过程。
过程：双链DNA的变性、引物与单链DNA退火结合、引物延伸。 -
第6题：
简述定量PCR的测定原理和方法。
正确答案:荧光标记技术是分子生物学最常用的标记技术，荧光染料或荧光标记物与扩增产物结合后，被激发的荧光强度和扩增产物成正比。而根据扩增原理，扩增是呈指数增长，因此在反应体系和反应条件完全一样下，样本含量应与扩增产物的对数成正比，故在一定的条件下荧光强度和样本含量成正比。 -
第7题：
简述PCR原理。
正确答案:PCR是在体外扩增DNA序列的方法，原理并不复杂，首先将双链DNA分子在邻近沸点的温度下加热分离成两条单链DNA分子，DNA聚合酶以单链DNA为模板并利用反应混合物当中的四种脱氧核苷三磷酸合成新生的DNA互补链。包括：DNA解链（变性）、引物与模板DNA结合（退火）、DNA合成（延伸）三步，可以被不断重复。 -
第8题：
问答题何谓易错PCR技术？简述易错PCR技术进行体外基因突变的主要过程正确答案： 指从酶的单一基因出发，在改变反应条件的情况下进行PCR，使扩增得到的基因出现碱基配对错误，从而引起基因突变的技术过程。
过程：双链DNA的变性、引物与单链DNA退火结合、引物延伸。解析： 暂无解析 -
第9题：
问答题简述不对称PCR。正确答案： 不对称PCR的基本原理是采用不等量的一对引物产生大量的单链DNA。
分为引物浓度不对称PCR和热不对称PCR。结果是产生大量的单链DNA，又避免了在检测时要先出去剩余引物的操作。
引物浓度不对称PCR：两引物的浓度不同，其中浓度低的为限制性引物，起决定性作用，只有当限制性引物耗尽后才会开始大量产生ssDNA；浓度高的为非限制性引物。前10-15循环为双链产物，而后为单链。 常规热不对称PCR（常规引物长度不对称PCR）：一对引物的碱基数目与组成不同造成退火温度不同。将限制性引物比非限制性引物的退火温度低至少10度。在刚开始的10～15个循环中，退火温度略低于限制性引物的退火温度，产生双链DNA，以耗尽限制性引物；之后的退火温度便以非限制性引物的退火温度为准，大量产生单链DNA。
交错式热不对称PCR（TAIL-PCR）：利用一系列序列特异性的巢式引物和一个短的任意引物引导扩增，一种半特异性的PCR。解析： 暂无解析 -
第10题：
填空题用不对称 PCR 合成单链 DNA探针时，两个引物的浓度比为：（）。正确答案： 50：1—100：1解析： 暂无解析 -
第11题：
简述PCR的步骤。PCR是如何使得特异性DNA片段以几何级数倍增的？
正确答案: PCR分三步：
①双链模板DNA变性。双链解开成单链。
②退火。
即引物与单链DNA两端互补序列配对，形成DNA聚合反应中的模板与引物的关系。没有引物的帮助，所有的DNA聚合酶都无能力从头合成一条新链。
③链的延伸。
DNA聚合酶从引物3’-OH端开始进行聚合酶反应，直至完全产生两条互补的新链。
三个反应阶段结束后，又可以开始下一次的循环，引物链的延伸产物与原来的模板DNA经加热变性后，也作为模板DNA和另一个引物互补，在DNA聚合酶作用下又发生引物链的延伸反应。这样反复循环数十次，可使特异性DNA片段以几何级数倍增。 -
第12题：
简述PCR原理及其基本反应步骤。
正确答案:PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：
①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；
②模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；
③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板互补的DNA链。 -
第13题：
简述容错PCR定义。
正确答案: 是指在利用Taq聚合酶进行目的基因的PCR扩增的同时引入碱基错配，导致目的基因随机突变的一种DNA体外进化技术。 -
第14题：
简述PCR及其临床应用。
正确答案:聚合酶链反应（PCR）：利用DNA聚合酶（如TagDNA聚合酶）等在体外条件下，催化一对引物间的特异DNA片段合成的基因体外扩增技术。引物：单链DNA片段。过程：变性DNA双链-单链（93～98℃），退火引物与模板结合（37～65℃），延伸双链合成（70～75℃）。常见PCR技术的类型：原位PCR、逆转录PCR（RT-PCR）及定量RT-PCR、反向PCR、PCR-SSCP、PCR-ELISA.固相锚定PCR、mRNA差异显示逆转录PCR。PCR的应用：（1）在感染性疾病中的应用：对传染性疾病进行病原学确证诊断；对病原体进行基因分型和同源性比较；克隆病原体各种蛋白质的基因，用于蛋白表达，制备诊断试剂或疫苗；发现新病原体；克隆病原体各种基因，建立基因表达载体，用于基因治疗。（2）遗传性疾病的基因诊断：发现的遗传病有4000多种；产前诊断PCR-RFLP；PCR-ASO。（3）肿瘤的研究及诊断：癌基因与抑癌基因。（4）在法医学中的应用：个人认识；亲子鉴定。（5）其他应用：DNA克隆；引入点突变、缺失或插入；重组PCR；DNA测序；示差PCR。 -
第15题：
简述易错PCR技术与常规PCR技术的异同点。
正确答案:易错PCR技术是从酶的单一基因出发，在改变反应条件的情况下进行聚合酶链反应（PCR），使扩增得到的基因出现碱基配对错误，而引起基因突变的技术过程。
易错PCR技术与常规PCR技术有很多相同之处，都是用DNA聚合酶为催化剂，使用四种脱氧核苷三磷酸为底物，都要添加镁离子，其操作过程也相同，都经过双链DNA的变性、引物与单链DNA退火结合、引物延伸三个步骤。
（1）双链DNA的变性（解链）：将待扩增的模板DNA升温至85~95℃，使DNA双链之间的氢键断开，解离为单链DNA。
（2）引物与单链DNA退火结合：单链DNA在温度逐步降低至50~70℃时，会与其碱基互补的引物结合形成双链，引物是经过设计后人工合成的与模板DNA某一片段互补的寡核苷酸链，长度为15~30个碱基。
（3）引物延伸：引物结合后，将温度升高至70~75℃，在DNA聚合酶的作用下，以引物为起点，以四种脱氧核苷三磷酸为底物，以目标DNA链为模板，按照碱基配对原则，由5′-端向3′-端的方向延伸，而进行DNA复制。以上三个步骤反复进行，一般经过30次循环，即可使目的基因扩增几百万倍。
易错PCR技术与常规PCR技术的主要不同点在于反应条件有所不同。
（1）在易错PCR中镁离子浓度较高：常规PCR扩增时，镁离子浓度为0.5~2.5mmol/L，进行易错PCR时，在原有基础上提高镁离子的浓度，以稳定非互补的碱基对。
（2）在易错PCR中可以添加一定浓度的锰离子，以降低聚合酶对模板的特异性，而常规PCR不用添加锰离子。
（3）在易错PCR中四种底物（dATP、dTTP、dCTP、dGTP）的浓度比改版，即采用浓度不平衡的各种底物，是DNA聚合酶在催化基因扩增时，碱基配对错误的出现频率增加，而容易引起基因突变。 -
第16题：
专门用于制备单链DNA的PCR技术是（）
- A、对称PCR
- B、反向PCR
- C、RT－PCR
- D、不对称PCR
- E、嵌套PCR
正确答案:D -
第17题：
问答题简述易错PCR技术与常规PCR技术的异同点。正确答案： 易错PCR技术是从酶的单一基因出发，在改变反应条件的情况下进行聚合酶链反应（PCR），使扩增得到的基因出现碱基配对错误，而引起基因突变的技术过程。
易错PCR技术与常规PCR技术有很多相同之处，都是用DNA聚合酶为催化剂，使用四种脱氧核苷三磷酸为底物，都要添加镁离子，其操作过程也相同，都经过双链DNA的变性、引物与单链DNA退火结合、引物延伸三个步骤。
（1）双链DNA的变性（解链）：将待扩增的模板DNA升温至85~95℃，使DNA双链之间的氢键断开，解离为单链DNA。
（2）引物与单链DNA退火结合：单链DNA在温度逐步降低至50~70℃时，会与其碱基互补的引物结合形成双链，引物是经过设计后人工合成的与模板DNA某一片段互补的寡核苷酸链，长度为15~30个碱基。
（3）引物延伸：引物结合后，将温度升高至70~75℃，在DNA聚合酶的作用下，以引物为起点，以四种脱氧核苷三磷酸为底物，以目标DNA链为模板，按照碱基配对原则，由5′-端向3′-端的方向延伸，而进行DNA复制。以上三个步骤反复进行，一般经过30次循环，即可使目的基因扩增几百万倍。
易错PCR技术与常规PCR技术的主要不同点在于反应条件有所不同。
（1）在易错PCR中镁离子浓度较高：常规PCR扩增时，镁离子浓度为0.5~2.5mmol/L，进行易错PCR时，在原有基础上提高镁离子的浓度，以稳定非互补的碱基对。
（2）在易错PCR中可以添加一定浓度的锰离子，以降低聚合酶对模板的特异性，而常规PCR不用添加锰离子。
（3）在易错PCR中四种底物（dATP、dTTP、dCTP、dGTP）的浓度比改版，即采用浓度不平衡的各种底物，是DNA聚合酶在催化基因扩增时，碱基配对错误的出现频率增加，而容易引起基因突变。解析： 暂无解析 -
第18题：
名词解释题不对称PCR正确答案： 不对称PCR：不对称PCR的目的是扩增产生特异长度的单链DNA。PCR反应中采用两种不同浓度的引物，一般采用50～100：1比例，最初的10～15个循环中主要产物还是双链DNA，但当低浓度的引物被消耗尽后，以后的循环只产生高浓度引物的延伸产物，结果产生大量单链DNA。因PCR反应中使用二种引物浓度不同，因此称为不对称PCR。解析： 暂无解析 -
第19题：
单选题能使扩增灵敏度提高的方法是（）A多重PCR
B巢式PCR
C原位PCR
D反向PCR
E不对称PCR
正确答案： A解析： 暂无解析 -
第20题：
单选题专门用于制备单链DNA的PCR技术是（ ）。A对称PCR
B反向PCR
CRT-PCR
D不对称PCR
E嵌套PCR
正确答案： D解析： 暂无解析