何为PCR引物？设计PCR引物时需要注意哪些事项。

第1题：

第2题：

第3题：

PCR-SSP序列特异性引物PCR

正确答案: 是根据等位基因的序列，设计具有序列特异性的引物，对样本进行DNA分型。该方法是以引物决定分型特异性。有以下优点：特异性强、重复性好、结果易于判定。

第4题：

以下关于PCR的说法错误的是（）

• A、PCR反应必须要有模板、引物、dNTP和DNA聚合酶
• B、应用PCR技术可以进行定点突变
• C、PCR的引物必须完全和模板互补配对
• D、PCR反应中，仅介于两引物间的DNA片段得到大量扩增

正确答案:C

第5题：

试述PCR基本技术过程中引物设计的原则。

正确答案: （1）引物的长度一般15～30bp；
（2）引物扩增跨度：以500bp为宜，特定重要条件下可扩增长至10kb的片段；
（3）引物碱基：G+C含量以40%～60%为宜，A、T、G、C最好随机分布，避免5个以上的嘌吟或嘧啶核苷酸的成串排列；
（4）避免引物内部出现二级结构：避免两条引物间互补，特别是3′端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异性的扩增条物；
（5）引物3′端的碱基必须与模板严格配对，而且尽量不要为A，最好选择T，因为3′端末位为T时错配几率大大降低；
（6）产物有或能加上合适的酶切位点；
（7）被扩增的靶序列最好有适宜的酶切点，这对酶切分析或分子克隆很有好处。

第6题：

简述PCR的原理和引物设计原则。

正确答案:1.PCR又称聚合酶链反应，是一种在体特异性外扩增目的核酸的的酶促合成反应。其基本原理是：在模板、引物、4种dNTP和耐热DNA聚合酶存在的条件下，利用DNA半保留复制和其在不同温度下变性复性的特性，人为控制温度——高温变性，低温复性，室温延伸，循环多次后，特异性扩增位于两段已知序列之间的DNA区段。
2.引物设计原则是1. 长度为15~30个核苷酸2. 碱基随机分布，G+C的含量为45~55%
3.避免发夹结构的形成，引物的存在连续互补序列不超过3bp
4.引物之间不应存在互补序列，避免3 ′端互补重叠
5.引物的碱基序列与非扩增区域无同源性
6.引物3 ′端碱基一定与模板配对，最佳碱基选G和C ；
7.引物5 ′端可以修饰，如加酶切位点，突变位点，起始密码子，终止密码子等。

第7题：

PCR引物

正确答案: 在PCR反应中，与待扩增的DNA两侧碱基互补的寡核苷酸片段，其本质是单链DNA。

第8题：

关于重组PCR定点突变和大引物突变法的叙述正确的是（）

• A、只能在DNA片段的特定部位产生突变
• B、不需要测序确定突变结果
• C、重组PCR定点突变法需要4种扩增，3轮PCR反应
• D、大引物法需要3种扩增引物，3轮PCR反应
• E、重组PCR定点突变法操作较大引物法简单

正确答案:C

第9题：

第10题：

第11题：

第12题：

第13题：

第14题：

第15题：

巢式PCR与普通PCR相比（）

• A、普通PCR比巢式PCR敏感
• B、所用酶不同
• C、所用底物不同
• D、模板不同
• E、前者用两对引物，后者用一对引物

正确答案:E

第16题：

什么叫PCR的引物？什么叫特异性引物？什么叫简并性引物？

正确答案: 引物：所谓引物，实际上就是两段与待扩增靶DNA序列互补的寡核苷酸片段，两引物间距离决定扩增片段的长度，两引物的5’端决定扩增产物的5’末端位置。（引物要大大过量）
特异性引物：引物是与靶DNA的3’端和5’端特异性结合的寡核苷酸片段，是决定PCR特异性的关键。只有当每条引物都能特异性地与模板DNA中的靶序列复性形成稳定的结构，才能保证其特异性。
简并性引物：简并引物是指代表编码单个氨基酸所有不同碱基可能性的不同序列的混合物。为了增加特异性，可以参考密码子使用表，根据不同生物的碱基使用偏好，减少简并性。

第17题：

PCR引物设计的基本要求是什么？

正确答案: 1、引物长度一般为15～30个核苷酸。过短影响PCR的特异性，过长会提高相应退火温度，使延伸温度超过TaqDNA聚合酶最适温度74℃，影响产物的生成。
2、引物的碱基尽可能随机，避免出现嘌呤、嘧啶碱基堆积现象。3’端不应有连续3个G和C。否则会使引物和模板错误配对。G+C含量一般占45％-55％。3’端和5’端引物具有相似的Tm值，Tm值计算公式：Tm＝4（G+C.+2（A+T）
3、引物自身不应存在互补序列以避免折叠成发夹结构。引物的连续互补序列，一般不超过3bp。
4、两个引物之间不应存在互补序列，尤其应避免3’端的互补重叠。
5、引物与非特异扩增区的序列的同源性不超过70％，引物3’末端连续8个碱基在待扩增区以外不能有完全互补序列，否则易导致非特异性扩增。
6、引物3’端碱基是引发延伸的起点，因此一定要与模板DNA配对。引物3’端最佳碱基选择是G和C，形成的碱基配对比较稳定。
7、引物与模板结合时，引物的5’端最多可以游离十几个碱基而不影响PCR反应的进行。
8、引物的5’端可以修饰，如附加限制酶位点，引入突变位点，用生物素、荧光物质、地高辛标记其它短序列包括起始密码子、终止密码子等。

第18题：

下列哪个有关PCR的陈述是不对的（）。

• A、PCR需要DNA聚合酶
• B、PCR一般需要在高温下进行
• C、PCR需要一段RNA引物
• D、PCR需要DNA模板

正确答案:C

第19题：

PCR引物设计的原则主要有哪些？

正确答案: （1）引物长度：10～30Nt；
（2）碱基分布：A、T、G、C随机分布；
（3）G+C含量：40%～60%Tm=4（G+C）+2（A+T）；
（4）引物之间：避免3′端互补；
（5）引物自身：不应形成二级结构；
（6）引物3′末端碱基：最好选T、C、G，不选A；
（7）引物5′末端碱基：可不与模板DNA互补。

第20题：

第21题：

第22题：

第23题：

第24题：