简述蛋白质抗原的制备方法。
题目
简述蛋白质抗原的制备方法。
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第1题：
简述蛋白质抗原的外源性提呈途径。
正确答案:即MHC-II类限制的抗原提呈途径，主要涉及抗原提呈细胞对外源性抗原的加工、处理，抗原肽被提呈给CD4+T细胞识别。
（1）APC对外源抗原的摄取和加工
（2）抗原肽-MHC-II类分子复合物的形成和转运
M.HC-II类分子在内质网腔中被合成，经折叠后插在内质网膜上。MHC-II类分子与抗原肽结合区被Ia相关的恒定链（Ii）的II类链短肽（CLIP，或称“榫子”）所封闭，在Ii胞浆端的信号肽引导下进入内吞系统与外源性抗原相遇。
在内吞系统中Ii被降解，但CLIP仍结合在MHC-II类分子上，因此不能与抗原肽结合。
而溶酶体内有HLA-DM可与MHC-II类分子作用，将CLIP从MHC-II类分子上解离，抗原肽随之结合到MHCII类分子上，形成复合体通过胞内转运或胞吐作用表达于APC表面，并被提呈给CD4+T细胞的TCR识别。 -
第2题：
简述固体分散体的主要制备方法、制备关键及适应的药物或载体材料。
正确答案: （1）熔融法：将药物与载体混匀，加热熔融后迅速冷却成固体。本法的关键是应由高温迅速冷却，使多个胶态晶核迅速形成，得到高度分散的药物，而不是析出粗晶。该法适用于对热稳定的药物和载体。多用熔点低、不溶于有机溶剂的载体材料，如PEG类、枸橼酸、糖类等。也可将熔融物滴入冷凝液中使之迅速收缩、凝固成丸，这样制成的固体分散体俗称滴丸。
（2）溶剂法：又称共沉淀法或共蒸发法。药物与载体共同溶解于有机溶剂中，蒸去溶剂后得到药物在载体中混合而成的共沉淀固体分散体，经干燥即得。本法的关键是有机溶剂的选择。固体分散体内存在少量未除尽的溶剂时，易引起药物的重结晶而降低主药的分散度。常用的有机溶剂有氯仿、无水乙醇、乙醇、丙酮等。该法适于对热不稳定或易挥发的药物，可选用能溶于水、有机溶剂及熔点高、对热不稳定的载体材料，如PVP类、甘露糖、半乳糖、胆酸类等。
（3）溶剂-熔融法：凡适用于熔融法的载体材料皆可采用。将药物先溶于少量有机溶剂中，再与熔化了的载体均匀混合，蒸去有机溶剂，冷却固化后即得。本法的制备关键是骤冷及有机溶剂的选择。毒性很小的有机溶剂也可不蒸去，但一般不得超过10%，否则难以形成脆而易碎的固体分散体。本法可用于液态药物或剂量小于50mg的固体药物。 -
第3题：
简述痰涂片制备方法
正确答案: （1）使用一端有磨砂面的无划痕的新玻片，经脱脂干燥、清洁后备用；
（2）用2B铅笔在磨砂面上注明实验序号及标本序号；
（3）确保玻片上的编号与痰盒上的编号相同。
（4）小心打开承载痰标本的容器，防止产生气溶胶或使标本外溢。
（5）仔细观察标本，使用折断的竹签茬端，挑取痰标本中干酪样、脓样或可疑部分约0、05ml，于玻片正面均匀涂抹成10×20mm的卵圆形痰膜。
（6）痰膜朝上静置自然干燥后（一般约需要30分钟）进行染色镜检。
（7）为保证检验人员的安全，严禁在涂抹痰标本的同时对载玻片进行加热。涂抹完毕后的痰标本，在结果报告前应暂时保留。 -
第4题：
在制备抗体酶的方法中的引入法是借助基因工程和蛋白质工程来制备的.
正确答案:正确 -
第5题：
制备蛋白质抗原时破碎组织细胞最简便的方法为（）。
- A、反复冻融法
- B、超声破碎法
- C、表面活性剂处理法
- D、自溶法
- E、酶处理法
正确答案:A -
第6题：
简述固定化酶的制备方法及方法之间的利弊。
正确答案: 方法：吸附法、包埋法、共价键结合法和交联法
利弊：（1）包埋法、共价键结合法和交联法虽结合力强但不能再生回收；（2）吸附法制备简单；成本低；能回收再生但结合差，在受到离子强度，PH变化影响后酶会从载体上游离下来，在使用价格较高的酶与载体时可行；（3）包埋法各方面较好但不适合大分子产物和底物。 -
第7题：
问答题简述蛋白质抗原的外源性提呈途径。正确答案： 即MHC-II类限制的抗原提呈途径，主要涉及抗原提呈细胞对外源性抗原的加工、处理，抗原肽被提呈给CD4+T细胞识别。
（1）APC对外源抗原的摄取和加工
（2）抗原肽-MHC-II类分子复合物的形成和转运
M.HC-II类分子在内质网腔中被合成，经折叠后插在内质网膜上。MHC-II类分子与抗原肽结合区被Ia相关的恒定链（Ii）的II类链短肽（CLIP，或称“榫子”）所封闭，在Ii胞浆端的信号肽引导下进入内吞系统与外源性抗原相遇。
在内吞系统中Ii被降解，但CLIP仍结合在MHC-II类分子上，因此不能与抗原肽结合。
而溶酶体内有HLA-DM可与MHC-II类分子作用，将CLIP从MHC-II类分子上解离，抗原肽随之结合到MHCII类分子上，形成复合体通过胞内转运或胞吐作用表达于APC表面，并被提呈给CD4+T细胞的TCR识别。解析： 暂无解析 -
第8题：
单选题制备蛋白质抗原时破碎组织细胞最简便的方法为（）A反复冻融法
B超声破碎法
C表面活性剂处理法
D自溶法
E酶处理法
正确答案： E解析： 暂无解析 -
第9题：
简述入炉煤粉试样的制备方法。
正确答案: 入炉煤粉的试样不须磨细，但要按要求进行缩分，将煤粉试样倒入方盘内，摊成厚度为2～3mm的薄层，将它分成若干个小方块，再用平底小铲按顺序或一定间隔取样，取样点不得少于9个，每点取样量约为5g，此样充分混匀后作为分析试样。 -
第10题：
简述血浆的制备方法。
正确答案:将采集的抗凝全血1500～3000r/min离心15min，上层即为血浆，吸出置于合适的容器中，备用。 -
第11题：
简述啤酒控制样的制备方法。
正确答案: 选择稳定工艺生产的11度（或10度）青岛啤酒，如果没有青岛啤酒，也可以选择工厂内其他主要类型的产品。为保证指标的稳定性、一致性，要求酒液为单滤（非兑滤），过滤时避开酒头、酒尾且过程稳定，数量应保证控制样制备的需要。过滤后清酒的各项指标均符合公司的内控标准，满罐后至少稳定12小时，确保酒体的均匀性。 控制样使用355mL（或相近规格）听（或瓶）进行包装。在控制样包装过程中装酒机、杀菌机等设备保持运行正常，杀菌后的控制样立即通知生产库单独存放。开始灌装后1小时，在杀菌机入口处将啤酒分段，后面生产的产品作为控制样，间隔固定时间在杀菌机出口（或喷码处）随机抽取一个控制样进行均匀性的评价，用于均匀性评价的样品数量须不少于10个。运行Anton Paar（或SCABA）啤酒分析仪检测所抽取控制样的原麦汁浓度，如实验室未配置相关仪器也可以使用比重瓶法检测样品的外观浓度。所有检测结果应在X±0.02oP范围内（X：控制样原麦汁浓度或外观浓度的平均值），确保控制样的一致性。如检测结果显示较大波动，则此批产品不能作为控制样使用，需重新制备。
包装后的控制样在常温（＞15℃）下存放5-6个星期后转入0-5℃恒温室内进行低温贮存，直至此批控制样使用结束或过期。 -
第12题：
简述单克隆抗体的制备过程及主要原理。针对某一抗原物质A设计一个研究方案，并制备相应的单克隆抗体。
正确答案: 原理：在体液免疫反应中，一个抗原分子上可能含有许多抗原决定簇（即表位），每个淋巴细胞都会产生针对一个抗原决定簇的特异性抗体，若能把此B细胞由脾脏中挑出来，单独培养成细胞株，则可得单一种类的抗体，只会对一种抗原决定簇反应，其专一性极高。大量培养此细胞株，即可有质量一定、纯度均一的抗体，此即为单克隆抗体。基本过程：先免疫动物，分离脾细胞，准备骨髓瘤细胞的准备，细胞融合，筛选与克隆融合细胞，最后大量制备单克隆抗体。
方案：免疫动物：将处理好的抗原多次注射到BALB/c小鼠体内，每隔2天注射一次，第3~5天进行试采血检验血清中的抗体，同时可用脾内注射培养基轻轻挤压使淋巴细胞逸出的方法采集淋巴细胞（大多为B细胞）。
B细胞富集：将抗原包被在培养板或其他基质上，然后与脾细胞结合，那些表面具有特异性抗体的B细胞与抗原结合使得B细胞黏附于培养板或基质上，轻轻洗涤除去不黏附的细胞，留下的细胞为具有特异性抗体的B细胞，骨髓癌细胞的准备：用BALB/c小鼠的653。
细胞融合：用PEG诱导B淋巴细胞与骨髓瘤细胞间进行融合，操作在10min内完成；融合后马上以HAT培养，能活下来的大多为B细胞与骨髓瘤细胞融合形成的杂交瘤细胞。未融合的骨髓瘤及骨髓瘤细胞间相互融合的细胞在HAT中因DNA合成抑制而死亡。未融合的B细胞及B细胞相互融合的细胞在体外培养因无法增殖会渐渐死去。使用抗原结合法对杂交瘤细胞产生的抗体专一性进行筛选采用有限稀释法或软琼脂法对杂交瘤细胞进行细胞克隆化，获得来自单个细胞的克隆；并对单个细胞生长出的群落，再次以ELISA筛选专一性抗体，获得可产生特异性抗体的单克隆细胞株。用体内法大量制备单克隆抗体：可把筛选出来的杂交瘤细胞注入小鼠腹腔，诱导小鼠产生大量腹水，然后以针头收集所产生的腹水，通常每次可取得3～5mL左右。 -
第13题：
简述目的基因的制备方法。
正确答案: （1）采用生物学方法，（2）采用化学合成法，（3）基因文库法，（4）利用PCR扩增法 -
第14题：
抗体酶的制备方法有（）
- A、诱导法
- B、拷贝法
- C、化学修饰法
- D、蛋白质工程技术
- E、共价抗原免疫法
正确答案:A,B,C,D,E -
第15题：
多选题抗体酶的制备方法有（）A诱导法
B拷贝法
C化学修饰法
D蛋白质工程技术
E共价抗原免疫法
正确答案： A,E解析： 抗体酶的制备方法有拷贝法、引入法、诱导法、化学修饰法、基因工程法等。
A选项诱导法是利用反应过渡态类似物为半抗原制作单克隆抗体，筛选出具高催化活性的单抗即抗体酶。
B选项拷贝法主要根据抗体生成过程中抗原-抗体互补性来设计的。
C选项化学修饰法在抗体结合位置或附近引入具有催化功能的基团。
D选项蛋白质工程技术。通过蛋白质工程技术使抗体结合部位的氨基酸残基产生定向改变，既可直接产生酶活性，也可对初步具有酶活性的抗体进行进一步改造，构建高活性抗体。
E选项共价抗原免疫法这是在亲和标记抑制剂基础上发展起来的新抗体酶制备方法。