问答题简述PCR及其临床应用。
题目
问答题
简述PCR及其临床应用。
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第1题：
简述PCR原理及其基本反应步骤。
正确答案:PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：
①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；
②模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；
③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板互补的DNA链。 -
第2题：
简述PCR基因扩增仪的实际应用。
正确答案:PCR基因扩增仪广泛应用于医学领域，主要包括：感染性疾病的分子诊断和研究;遗传性疾病的分子诊断和研究;恶性肿瘤的分子诊断和研究; PCR扩增仪在移植配型上的应用;PCR扩增仪在法医学上的应用;PCR扩增仪在分子生物学中其他领域的应用。 -
第3题：
简述HLA分型方法的种类及其临床应用。
正确答案:分型方法：
①血清学分型法（方法名称，检测对象）；
②细胞学分型法（名称及检测对象）；
③分子生物学分型方法（名称、特点）。
临床应用：
①器官移植时组织配型；
②监测排斥反应；
③发现新的HLA型别或等位基因，研究HLA的多态性；
④研究HLA与某些疾病发生的关系等。 -
第4题：
问答题简述PCR相关技术及应用。正确答案： 聚合酶链反应，是一种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的的方法，因此也称为基因的体外扩增法。是20世纪80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点。其应用主要是以下几个方面：
（1）科学研究：
基因克隆；DNA测序；分析突变；基因重组与融合；检测基因的修饰；鉴定与调控蛋白质结构的DNA序列；转座子插入位点的绘图；合成基因的构建；构建克隆或表达载体；检测某基因的内切酶多态性等。
（2）临床诊断：
细菌、病毒、螺旋体、支原体、衣原体、立克次氏体、分枝杆菌等病原体的鉴定；人类遗传病的鉴定；诊断遗传疾患；临测临床标本中病原体的核酸序列；对法医学标本做遗传学鉴定；分析激活癌基因中的突变情况；生成克隆化双链DNA中的特异序列作为探针。解析： 暂无解析 -
第5题：
问答题简述合谷的主治及其常见的临床配伍应用。正确答案： 合谷具有解表散寒、疏经活络等作用。与复溜配伍，可治疗多汗及无汗；与三阴交配合，可固护胎气或堕胎；与太冲配合，可治疗周身疼痛。解析： 暂无解析 -
第6题：
问答题简述HLA分型方法的种类及其临床应用。正确答案： 分型方法：
①血清学分型法（方法名称，检测对象）；
②细胞学分型法（名称及检测对象）；
③分子生物学分型方法（名称、特点）。
临床应用：
①器官移植时组织配型；
②监测排斥反应；
③发现新的HLA型别或等位基因，研究HLA的多态性；
④研究HLA与某些疾病发生的关系等。解析： 暂无解析 -
第7题：
问答题PCR检测技术有何临床应用。正确答案： （1）PCR在病原微生物的检测中的应用；（2）PCR在遗传病中的应用；（3）PCR在肿瘤中的应用；（4）其它方面的应用：PCR技术除用于临床诊断和治疗外，还可用于DNA指纹、个体识别、亲子关系识别、法医物证等。解析： 暂无解析 -
第8题：
问答题简述磁共振成像（MRI）及其临床应用价值。正确答案： 磷共振成像（MRI）是利用原子核在磁场内所产生的信号经计算机重建图像的新一代成像技术，可使某些CT扫描不能显示的病变成像显影。MRI的临床应用日益广泛，其主要用途如下：
（1）颅内疾病特别是鞍区、颅后窝和脊髓病变的显像明显优于CT。
（2）直接显示心脏大血管内腔，观察其形态学变化，可在无创伤条件下进行。
（3）骨关节和肌肉系统疾病的显像比CT清楚。
（4）对纵隔、腹部和盆腔疾病有一定的诊断价值，但对肺部和胃肠道疾病的诊断作用有限。
（5）增强MRI能进一步提高其敏感性，造影剂可采用Gd-DTPA。解析： 暂无解析 -
第9题：
问答题简述PCR方法在食品检测中的应用。正确答案： 转基因食品的检测；病原菌、病毒的检测（RT-PCR）、过敏源的检测解析： 暂无解析 -
第10题：
简述磁共振成像（MRI）及其临床应用价值。
正确答案: MRI是利用原子核在磁场内所产生的信号经计算机重建图像的新一代成像技术，可使某些CT扫描不能显示的病变成像显影，当前MRI的临床应用日益广泛，其主要用途如下。
（1）颅内疾病特别是鞍区、后颅窝和脊髓病变的显像明显优于CT。
（2）直接显示心脏大血管内腔，观察其形态学变化，可在无创伤条件下进行。
（3）骨关节和肌肉系统疾病的显像比CT清楚。
（4）对纵隔、腹部和盆腔疾病有一定的诊断价值，但对肺部和胃肠道疾病的诊断作用有限。
（5）增强MRI能进一步提高其敏感性.造影剂可采用GdBDTPA。 -
第11题：
简述PCR的原理及其应用。
正确答案:PCR技术是模拟体内条件下，应用DNA聚合酶反应特异性扩增某一DNA片段的技术。它根据待扩增区域两端已知序列合成两个与模板DNA互补的核苷酸引物，这一单链引物的序列决定了待扩增片段的特异性和片段长度，当有模板DNA存在时，引物便可在一定的复性温度下特异地与热变性形成单链的DNA模板互补形成“退火”。当有DNA聚合酶和dNTP存在时，便可在一定条件下，按5（→3（方向从引物端合成DNA链，从而可以产生倍增的DNA片段，当经过30～35个周期后便可产生100万倍以上的所需DNA片段。由于PCR扩增技术的快速、简便、准确、可靠，因此，该技术已广泛应用于遗传病的基因诊断，病原体的检测，肿瘤的DNA诊断，法医学亲权鉴定，性别鉴定以及在DNA水平上研究生物进化等。 -
第12题：
简述PCR及其临床应用。
正确答案:聚合酶链反应（PCR）：利用DNA聚合酶（如TagDNA聚合酶）等在体外条件下，催化一对引物间的特异DNA片段合成的基因体外扩增技术。引物：单链DNA片段。过程：变性DNA双链-单链（93～98℃），退火引物与模板结合（37～65℃），延伸双链合成（70～75℃）。常见PCR技术的类型：原位PCR、逆转录PCR（RT-PCR）及定量RT-PCR、反向PCR、PCR-SSCP、PCR-ELISA.固相锚定PCR、mRNA差异显示逆转录PCR。PCR的应用：（1）在感染性疾病中的应用：对传染性疾病进行病原学确证诊断；对病原体进行基因分型和同源性比较；克隆病原体各种蛋白质的基因，用于蛋白表达，制备诊断试剂或疫苗；发现新病原体；克隆病原体各种基因，建立基因表达载体，用于基因治疗。（2）遗传性疾病的基因诊断：发现的遗传病有4000多种；产前诊断PCR-RFLP；PCR-ASO。（3）肿瘤的研究及诊断：癌基因与抑癌基因。（4）在法医学中的应用：个人认识；亲子鉴定。（5）其他应用：DNA克隆；引入点突变、缺失或插入；重组PCR；DNA测序；示差PCR。 -
第13题：
问答题简述关节松动术的四级手法及其临床应用。正确答案： Ⅰ级：治疗者在关节活动的起始端，小范围、节律性的来回推动关节。
Ⅱ级：治疗者在关节活动允许范围内，大范围、节律性的来回推动关节，但不接触关节活动的起始端和终末端。
Ⅲ级：治疗者在关节活动允许范围内，大范围、节律性的来回推动关节，每次均接触关节活动的终末端，并能感觉到关节周围软组织的紧张。
Ⅳ级：治疗者在关节活动的终末端，小范围、节律性的来回推动关节，每次均接触关节活动的终末端，并能感觉到关节周围软组织的紧张。
临床应用：Ⅰ、Ⅱ级：用于治疗因疼痛引起的关节活动受限。Ⅲ级用于治疗关节疼痛伴有僵硬。Ⅳ级用于治疗关节周围组织粘连、挛缩而引起的活动受限。解析： 暂无解析 -
第14题：
问答题简述PCR引物设计的基本原则及其注意要点正确答案： 原则：首先引物与模板的序列要紧密互补，其次引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构，再次引物不能再模板的非等位点引发DNA聚合反应（即错配）。
注意要点：
1、引物的长度一般为15-30bp，常用的是18-27bp，但不应大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适合于TaqDNA聚合酶进行反应。
2、引物序列在模板内应当没有相似性较高，尤其是3’端相似性较高的序列，否则容易导致错配。引物3’端出现3个以上的连续碱基，如GGG或CCC，也会使错误引发几率增加。
3、引物3’端的末位碱基对Taq酶的DNA合成效率有较大的影响。不同的末位碱基在错配位置导致不同的扩增效率，末位碱基为A的错配效率明显高于其他3个碱基，因此应当避免在引物的3’端使用碱基。另外，引物二聚体或发夹结构也可能导致PCR反应失败。5’端序列对PCR影响不太大，因此常用来引进修饰位点或标记物。
4、引物序列的GC含量一般为40-60%，过高或过低都不利于引发反应。上下游引物的GC含量不能相差太大。
5、引物所对应模板位置序列的Tm值在72℃左右可使复性条件最佳。Tm值的计算有很多种方法，如按公式Tm=4（G+C）+2（A+T），在Oligo软件中使用的是最邻近法（thenearestneighbormethod）。
6、G值是指DNA双链形成所需的自由能，该值反映了双链结构内部碱基对的相对稳定性。应当选用3’端G值较低（绝对值不超过9），而在5’端和中间G值相对较高的引物。引物的3’端的G值过高，容易在错配位点形成双链结构并引发DNA聚合反应。
7、引物二聚体及发夹结构的能值过高（超过4.5kcal/mol）易导致产生引物二聚体带，并且降低引物有效浓度而使PCR反应不能正常进行。
8、对引物的修饰一般是在5’端增加酶切位点，应根据下一步实验中要插入PCR产物的载体的相应序列而确定。解析： 暂无解析 -
第15题：
问答题简述PCR的原理及其应用。正确答案： PCR技术是模拟体内条件下，应用DNA聚合酶反应特异性扩增某一DNA片段的技术。它根据待扩增区域两端已知序列合成两个与模板DNA互补的核苷酸引物，这一单链引物的序列决定了待扩增片段的特异性和片段长度，当有模板DNA存在时，引物便可在一定的复性温度下特异地与热变性形成单链的DNA模板互补形成“退火”。当有DNA聚合酶和dNTP存在时，便可在一定条件下，按5（→3（方向从引物端合成DNA链，从而可以产生倍增的DNA片段，当经过30～35个周期后便可产生100万倍以上的所需DNA片段。由于PCR扩增技术的快速、简便、准确、可靠，因此，该技术已广泛应用于遗传病的基因诊断，病原体的检测，肿瘤的DNA诊断，法医学亲权鉴定，性别鉴定以及在DNA水平上研究生物进化等。解析： 暂无解析 -
第16题：
问答题简述PCR在动物医学上的应用。正确答案： （1）用于疾病的诊断。
（2）扩增某些核酸的片段用于制备探针。
（3）研究病毒突变的规律及突变位点，迅速鉴定突变株。
（4）用于食品检验。
（5）用于病原研究。
（6）用于种群分类。解析： 暂无解析 -
第17题：
问答题简述PCR基因扩增仪的实际应用。正确答案： PCR基因扩增仪广泛应用于医学领域，主要包括：感染性疾病的分子诊断和研究；遗传性疾病的分子诊断和研究；恶性肿瘤的分子诊断和研究；PCR扩增仪在移植配型上的应用；PCR扩增仪在法医学上的应用；PCR扩增仪在分子生物学中其他领域的应用。解析： 暂无解析