问答题什么是PCR，有什么特点，扩增反应有哪几个步骤？
题目
问答题
什么是PCR，有什么特点，扩增反应有哪几个步骤？
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第1题：
什么是PCR，有什么特点，扩增反应有哪几个步骤？
正确答案: PCR即聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)，具有特异、敏感、快速等特点。扩增反应包括3个步骤，变性、退火（复性）、延伸3个步骤。 -
第2题：
简述PCR扩增步骤。
正确答案: 变性；退火；延伸。 -
第3题：
PCR基因扩增仪按照变温方式的不同可分为哪几类？分别有什么特点？
正确答案: （1）水浴式PCR仪变温快、时间准、温度均一，但体积大，自动化程度不高。
（2）变温金属块式PCR仪通过半导体加热和冷却，并由微机控制恒温和冷热处理过程。
（3）变温式气流式PCR仪以空气作为热传播媒介，由大功率风扇及制冷设备提供设备提供外部冷空气而制冷。成本较低；安全程度高。微机配上软件，可灵活编程。 -
第4题：
什么是PCR扩增法，其原理、操作步骤、反应过程和意义？
正确答案: PCR技术是一种用于体外扩增位于两端已知序列之间的DNA区段的分子生物学技术。
PCR原理：PCR技术的实质为体内DNA复制的体外模拟。即使双链DNA热变性而分开成为单链DNA，退火后在低温下，两个与模板互补的引物与单链DNA配对结合，再在中温下利用TAGDNA聚合酶的聚合活性和热稳定性进行聚合（延伸）反应。每经过一次变性、退火和延伸为一个循环，所扩增的特定DNA序列数是按几何指数增长。
PCR技术操作步骤为：
①反复将目的基因片段进行热变性处理，令其双股链解开；
②进行反链杂交、退火、形成单链；
③用TagDNA聚合酶沿DNA链全程合成出两股双链DNA分子；
④然后开始第二个反应周期。每个反应周期，特异性目的基因可扩增一倍。用n代表反应周期数，则特异性DNA目的基因片段便按2^n指数扩增下去，一直扩增至所需数量为止。
PCR反应过程：
①DNA的变性：DNA双链在加热或碱性条件下，双链的氢键断裂为单链DNA，一般解链温度为85-95℃；
②引物与单链DNA退火结合：单链DNA在温度逐渐降低时，重新与其互补的引物或另一条单链结合形成双链，称为退火；
③引物延伸：以目标DNA为模板，以引物为固定起点，以四种脱氧核苷三磷酸为底物在DNA聚合酶的作用下，由5’端向3’端的方向进行DNA复制。
意义：PCR技术能在短时间内大量扩增目的基因DNA片段，且全部操作已实现自动化，这一技术不仅广泛应用于基因重组操作中的基因扩增及其检出，而且在研究火花的致癌基因、等会基因序列变异，以及分子生物学、医学、食品、农业、化工的许多领域中都得到广泛的应用。 -
第5题：
问答题PCR 的基本原理是什么？用 PCR扩增某一基因，必须预先得到什么样的信息？正确答案： （1）DNA半保留复制的原理，在体外进行 DNA的变性、复性和引物延伸。
（2）至少要预先知道足够合成一对引物的靶 DNA序列。解析： 暂无解析 -
第6题：
问答题PCR基因扩增仪按照变温方式的不同可分哪几类？分别有什么特点。正确答案： PCR基因扩增仪按照变温方式通常有以下三类：
（1）水浴式PCR仪：变温快、时间准、温度均一，但体积大，自动化程度不高。
（2）变温金属块式PCR仪：通过半导体加热和冷却，并由微机控制恒温和冷热处理过程。装置比较牢固耐用，温度变换平稳，有利于保持TaqDNA聚合酶的活性。
（3）变温气流式PCR仪：以空气作为热传播媒介，由大功率风扇及制冷设备提供外部冷空气而制冷。成本较低；安全程度高。微机配上软件，可灵活编程。解析： 暂无解析 -
第7题：
问答题什么是生物工艺过程？它包括哪几个步骤？特点？共性？正确答案： 实质是利用生物催化剂从事生物产品生产的过程。
步骤：原料的预处理及培养基的制备。生物催化剂的制备。生物反应器及反应条件的选择。产品的分离纯化。
特点：生产过程通常在常温下进行，操作条件温和，不需考虑防爆；一种设备多种用途，原料以碳水化合物为主不含有毒物质；生产反应过程是以生命体的自动调节方式进行的，数个反应可在一个设备中进行，容易进行复杂的高分子化合物生产；高度选择性地进行复杂化合物在特定部位的反应；生产产物的生物体本身也是产物；生产过程中需要注意防止杂菌的污染；通过改良生物生产性能，可在不增加设备的条件下，使生产能力增加。
共性：要选择培养基成分，并确定含量比例；确定合理发酵级数，各级培养条件，过程控制参数以及种子培养系统与生产过程合理配套，以保证细胞正常生长和产物形成；防止杂菌污染；选择合适的产品提取、分离、纯化工艺。解析： 暂无解析 -
第8题：
问答题PCR基因扩增仪按照变温方式的不同可分为哪几类？分别有什么特点？正确答案： （1）水浴式PCR仪变温快、时间准、温度均一，但体积大，自动化程度不高。
（2）变温金属块式PCR仪通过半导体加热和冷却，并由微机控制恒温和冷热处理过程。
（3）变温式气流式PCR仪以空气作为热传播媒介，由大功率风扇及制冷设备提供设备提供外部冷空气而制冷。成本较低；安全程度高。微机配上软件，可灵活编程。解析： 暂无解析 -
第9题：
问答题在PCR扩增时，PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致，或大或小，或者同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带，为什么？有何对策？正确答案： PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致，或大或小，或者同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带。非特异性条带的出现，其原因：一是引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体。二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低，及PCR循环次数过多有关。其次是酶的质和量，往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶则不出现，酶量过多有时也会出现非特异性扩增。
其对策有：①必要时重新设计引物；
②减低酶量或调换另一来源的酶；
③降低引物量，适当增加模板量，减少循环次数；
④适当提高退火温度或采用二温度点法（93℃变性，65℃左右退火与延伸）。解析： 暂无解析 -
第10题：
问答题简述扩增片段限制长度多态性（PCR-RFLP）三个步骤。正确答案： 1.先用PCR技术扩增含有序列差异的待测DNA片段。
2.根据靶片段序列特点，选用合适的限制序列特点，选用合适的限制酶切PCR产物。
3.运用凝胶电泳分离酶切割产物，根据片段的数量和片段长度判定等位基因和基因型。解析： 暂无解析 -
第11题：
问答题什么是辨证论治？辨证的主要内容是什么？论治有哪几个基本步骤？正确答案： 辨证论治，是运用中医学理论辨析有关疾病的资料以确立证候，确定治则治法及方药，并付诸实施的思维过程。
辨证论治分为辨证和论治两个阶段，辨证的内容包括辨病因、辨病位、辨病性、辨病势四个方面；论治的过程一般分为因证立法、随法选方和处方遣药三个步骤。解析： 暂无解析 -
第12题：
问答题在PCR扩增时，PCR扩增后有时出现涂抹带或片状带，其原因是什么？应该如何改进？正确答案： P.CR扩增有时出现涂抹带或片状带或地毯样带。其原因往往由于酶量过多或酶的质量差，dNTP浓度过高，Mg2+浓度过高，退火温度过低，循环次数过多引起。
其对策有：
①减少酶量，或调换另一来源的酶；
②减少dNTP的浓度；
③适当降低Mg2+浓 度；
④增加模板量，减少循环次数。解析： 暂无解析 -
第13题：
用于PCR的DNA多聚酶，即TaqDNA多聚酶有什么特点：（）
- A、热稳定性
- B、高特异性
- C、适宜较长DNA片段的扩增
- D、以上全是
正确答案:D -
第14题：
PCR的基本原理是什么？用PCR扩增某一基因，必须预先得到什么样的信息？
正确答案: （1）DNA半保留复制的原理，在体外进行DNA的变性、复性和引物延伸。
（2）至少要预先知道足够合成一对引物的靶DNA序列。 -
第15题：
PCR基因扩增仪按照变温方式的不同可分哪几类？分别有什么特点。
正确答案: PCR基因扩增仪按照变温方式通常有以下三类：
（1）水浴式PCR仪：变温快、时间准、温度均一，但体积大，自动化程度不高。
（2）变温金属块式PCR仪：通过半导体加热和冷却，并由微机控制恒温和冷热处理过程。装置比较牢固耐用，温度变换平稳，有利于保持TaqDNA聚合酶的活性。
（3）变温气流式PCR仪：以空气作为热传播媒介，由大功率风扇及制冷设备提供外部冷空气而制冷。成本较低；安全程度高。微机配上软件，可灵活编程。 -
第16题：
什么是生物工艺过程？它包括哪几个步骤？特点？共性？
正确答案: 实质是利用生物催化剂从事生物产品生产的过程。
步骤：原料的预处理及培养基的制备。生物催化剂的制备。生物反应器及反应条件的选择。产品的分离纯化。
特点：生产过程通常在常温下进行，操作条件温和，不需考虑防爆；一种设备多种用途，原料以碳水化合物为主不含有毒物质；生产反应过程是以生命体的自动调节方式进行的，数个反应可在一个设备中进行，容易进行复杂的高分子化合物生产；高度选择性地进行复杂化合物在特定部位的反应；生产产物的生物体本身也是产物；生产过程中需要注意防止杂菌的污染；通过改良生物生产性能，可在不增加设备的条件下，使生产能力增加。
共性：要选择培养基成分，并确定含量比例；确定合理发酵级数，各级培养条件，过程控制参数以及种子培养系统与生产过程合理配套，以保证细胞正常生长和产物形成；防止杂菌污染；选择合适的产品提取、分离、纯化工艺。 -
第17题：
问答题油脂的精制有哪几个步骤，它的作用是什么？正确答案： 1、除杂：作用，除去悬浮于油中的杂质
2、脱胶：作用：除去磷脂
3、脱酸：作用：除去游离态的脂肪酸
4、脱色：作用：脱色素如：胡萝卜素、叶绿素
5、脱臭：作用：除去不良的臭味。解析： 暂无解析 -
第18题：
问答题PCR反应一般分为几个步骤？各步骤有什么特点？正确答案： A.变性：双链DNA变成单链DNA。变性温度的高低由G+C含量决定；变性时间由DNA链长度决定。常规PCR变性条件为94～95度45s。
B.退火，将温度下降至适宜温度，使引物与模板DNA退火结合；退火是使引物和模板DNA复性。复性过程采取的温度（Ta）至关重要。复性温度过高，引物不能与模板很好地复性，扩增效率很低；复性温度太低，引物将产生非特异性复性，导致非特异性的DNA片段的扩增。退火温度通常在比理论计算的引物和模板的熔解温度低3～5℃的条件下进行。
C.延伸：寡核苷酸引物的延长，一般在耐热DNA聚合酶的最适温度下进行。对于Taq酶，为72～78度。
D 循环数：PCR扩增所需的循环数取决于反应体系中起始的模板拷贝数以及引物延伸和扩增的效率。
一般扩展条件：94℃60s 37℃60s 72℃120s，共25-30个循环。解析： 暂无解析 -
第19题：
问答题什么叫PCR技术？有几个操作步骤？正确答案： PCR技术称DNA多聚酶链式反应。是DNA体外扩增的技术。
步骤：
（1）加热变性：将待扩增的DNA置于94~95摄氏度的哥嫂问水浴中加热5分钟，使双键DNA解链为单链DNA，分开的两条单链DNA作为扩增的模板。
（2）退火：将加热变性的单链DNA溶液的温度缓慢下降至55摄氏度后，在这过程中将引物DNA的碱基与单链模板DNA一端碱基互补配对。
（3）延伸：在退火过程中，当温度下降至72摄氏度时，在耐热性TaqDNA多聚酶、适应的pH和一定的离子强度下，寡核苷酸引物碱基和模板DNA结合延伸成双链DNA。经过30~35次循环，扩增倍数达106，可将长达2kb的DNA由原来的1pg扩增到0.5~1μg。若经过60次循环，DNA扩增倍数可达109~1010。解析： 暂无解析 -
第20题：
问答题PCR扩增仪的热盖有什么作用？使用时应注意什么？正确答案： 目前PCR仪通常都配备热盖，可使样品管顶部温度达到150℃左右，避免蒸发的反应液凝集于管盖而改变PCR反应体积。无需加石蜡油，减少了后续实验的麻烦。旋转加压的热盖需注意旋转压力的控制，过松则使热盖没有充分接触反应管而影响结果；过紧则会导致反应管变形，甚至可能造成热盖的机械故障。解析： 暂无解析 -
第21题：
问答题PCR基因扩增仪的工作关键是什么？经历了怎样一个发展过程？正确答案： PCR基因扩增仪工作关键是温度控制。
其发展过程为：水浴锅PCR仪属于第一代PCR基因扩增仪，以不同温度的水浴锅串联成一个控温体系；压缩机PCR仪属于第二代PCR基因扩增仪，由压缩机自动控温，金属导热，控温较第一代PCR基因扩增仪方便；半导体PCR仪属于第三代PCR基因扩增仪，由半导体自动控温，金属导热，控温方便，体积小，相对稳定性好；离心式空气加热PCR仪属于第三代PCR基因扩增仪，由金属线圈加热，采用空气作为导热媒介，温度均一性好，各孔扩增效率高度一致。解析： 暂无解析 -
第22题：
问答题实时荧光定量PCR仪有哪些种类，各有什么特点？正确答案： 目前市场上实时荧光定量PCR仪一般可分三类。
（1）金属板式实时定量PCR仪：可容纳的样本量大，无需特殊耗材，但温度均一性欠佳，有边缘效应，标准曲线的反应条件难以做到与样品完全一致。
（2）离心式实时定量PCR仪：能保障标准曲线和样品之间反应条件的一致性。但可容纳样品量少，有的需用特殊毛细管作样品管，增加了使用成本。
（3）各孔独立控温的定量PCR仪：各孔独立控温，适合多指标快速检测。但是上样不如传统方法方便，而且需要独特的扁平反应管，使用成本较高。解析： 暂无解析 -
第23题：
问答题简述PCR扩增包括3个步骤。正确答案： A.DNA变性：通过加热使靶DNA双链解离成两条单链。
B.引物与靶DNA退火：降低温度至适当水平，促使两个引物根据碱基互补的原理分别结合至靶DNA两条链的3’末端。
C.引物延伸：在DNA聚合酶催化下，引物沿着靶DNA3’末端向5’末端延伸。解析： 暂无解析