简述mRNA差异显示筛选差异表达基因的基本原理及其优、缺点。
题目
简述mRNA差异显示筛选差异表达基因的基本原理及其优、缺点。
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第1题：
列举常用5种不同基因诊断技术，简述其原理及优、缺点。
正确答案: 核酸分子杂交：错配时杂交信号减弱或消失，可用于基因结构和表达检测，须制备合适的探针。
PCR：变异引起扩增产物不同，灵敏度高，须选择合适引物，有假阴性或假阳性结果。
SSCP：突变引起核酸二级结构改变，可检测已知或未知突变，检测的灵敏度被片段长度稀释。
RFLP：基因变异改变酶切图谱，须选择合适的限制性核酸内切酶；当变异没有引起任何酶切结果的改变时，则无法使用。
DNA序列测定：直接检测核酸序列比较差异，最准确的一种诊断方法。
基因芯片：多元杂交分析杂交差异，一次杂交可检测一个样品的多个基因不同突变或表达变化。 -
第2题：
简述化学切割错配检测基因突变的基本原理及其优、缺点。
正确答案: 化学切割错配（chemical cleavage of mismatch，CCM）通过在DNA：DNA或DNA：RNA异源杂合双链核酸分子中发生C错配（如A-C、T-C、C-C配对）处，能被羟胺和哌啶切割，如系T错配，能被四氧化锇切割的特点，先将野生型探针与待检样品杂交，再分别用羟胺、哌啶和四氧化锇处理；根据凝胶电泳中DNA片段数量和大小判断样品中有无突变、突变位置及类型等。
优点：准确率高，无非特异性切割，检出率高，达100%，结合荧光检测系统还可提高其灵敏度达1突变/10个细胞，可用于长达2kb片段。
缺点：步骤多，费时，使用有毒化学物质。 -
第3题：
基因的差异表达（genedifferentialexpression）
正确答案: 在胚胎发育和分化过程中相继出现各种不同的细胞类型，这是由于有关的奢侈基因按一定的顺序相继活化的结果，这种现象称基因的差异表达。 -
第4题：
简述真空冷冻干燥的基本原理及其优缺点？
正确答案: 1、利用天然和人工低温，使物料组织中水分冻结后再解冻从组织中流出，达到脱水的目的。缺点：制品中的水溶性物质和水分一起流失，制品成为多孔性物质
2、真空冷冻干燥法：是将材料冻结后，先冷却到冻结温度以下，再在低温和真空条件下使材料中冻结成冰的水分直接蒸发成水汽（升华），并冷凝除水的食品干燥方法 -
第5题：
简述酶促切割错配检测基因突变的原理及其优、缺点。
正确答案: 酶促切割错配（enzyme mismatch cleavage，EMC）利用T4内切核酸酶VII识别12种错配碱基并在附近进行酶切的特性，将核酸探针与待检分子杂交，有点突变时杂交分子中有错配出现，为T4内切核酸酶VII识别切割，根据凝胶电泳中片段数量和大小判断有无突变。
优点：能对DNA：RNA异源杂合分子进行分析，最长检测片段达1.5kb。
缺点：产生非特异性切割，检出效率不能保证100%，必须设立内对照。 -
第6题：
问答题细胞分化是基因差异性表达的结果，试述差异性基因表达产生的原因主要来自于哪几个方面？正确答案： 细胞内环境差异影响控基因的表达，在早期胚胎发育的卵裂阶段，由于卵质的不均匀分布，卵裂的结果所产生的分裂球存在不同的细胞内环境引起胚胎细胞控基因的差异性表达。
细胞外环境的影响，在胚胎发育早期不同的胚胎细胞位于布同的区域，受到不同的外界环境影响，接受不同的信息。特别是邻近细胞的相互联系，如胚胎诱导对于胚胎细胞分化具有重要意义。各种细胞外信号分子包括远离细胞的产物，通过细胞间的通讯特别是信号转导间接影响细胞控基因的表达。解析： 暂无解析 -
第7题：
问答题简述化学切割错配检测基因突变的基本原理及其优、缺点。正确答案： 化学切割错配（chemical cleavage of mismatch，CCM）通过在DNA：DNA或DNA：RNA异源杂合双链核酸分子中发生C错配（如A-C、T-C、C-C配对）处，能被羟胺和哌啶切割，如系T错配，能被四氧化锇切割的特点，先将野生型探针与待检样品杂交，再分别用羟胺、哌啶和四氧化锇处理；根据凝胶电泳中DNA片段数量和大小判断样品中有无突变、突变位置及类型等。
优点：准确率高，无非特异性切割，检出率高，达100%，结合荧光检测系统还可提高其灵敏度达1突变/10个细胞，可用于长达2kb片段。
缺点：步骤多，费时，使用有毒化学物质。解析： 暂无解析 -
第8题：
填空题远缘杂交不相容性的主要原因有核型差异、基因位点及基因表达的差异、（）。正确答案： 核质不相容解析： 暂无解析 -
第9题：
问答题简述杂合双链分析检测基因突变的基本原理及其优、缺点。正确答案： 杂合双链分析（heteroduplex analysis，HA）原理在于有缺失突变的待检DNA与野生型DNA探针杂交后，形成的异源杂合双链DNA在错配处会产生单链的环形突起，无突变则无此结构，这两种杂交后形成的双链DNA在凝胶电泳时会产生不同的迁移率，据此可以判断待检DNA样品中有无缺失突变。
优点：简单、快速。
缺点：适用范围较小，限于200-300bp片段，且不能确定突变位置，检出率一般为80%。解析： 暂无解析 -
第10题：
问答题简述mRNA差异显示筛选差异表达基因的基本原理及其优、缺点。正确答案： M.RNA差异显示技术基于逆转录PCR（RT-PCR）而建立：抽提配对样品如正常和疾病细胞内mRNA（或总RNA），分别逆转录成为cDNA，然后行PCR随机扩增；一条引物为oligo（dA），能与单链cDNA5’端oligo（dT）结合，另一条为随机引物，能与3’端互补核苷酸序列结合，因此经过RT-PCR扩增后，能将mRNA逆转录为cDNA、扩增获得双链cDNA及其不同PCR产物；扩增产物经过凝胶电泳分析，比较组间扩增产物异同，回收差异片段为探针在cDNA文库或基因组文库中筛选相关基因，从而确定这些基因在疾病过程中的参与情况。
优点：简单易行；灵敏度高；重复性好；多能性；快速。
缺点：假阳性率高，达70%以上；逆转录产物仅为mRNA3’非翻译区，需要进一步的文库筛选确定有关基因。解析： 暂无解析 -
第11题：
问答题简述酶促切割错配检测基因突变的原理及其优、缺点。正确答案： 酶促切割错配（enzyme mismatch cleavage，EMC）利用T4内切核酸酶VII识别12种错配碱基并在附近进行酶切的特性，将核酸探针与待检分子杂交，有点突变时杂交分子中有错配出现，为T4内切核酸酶VII识别切割，根据凝胶电泳中片段数量和大小判断有无突变。
优点：能对DNA：RNA异源杂合分子进行分析，最长检测片段达1.5kb。
缺点：产生非特异性切割，检出效率不能保证100%，必须设立内对照。解析： 暂无解析 -
第12题：
名词解释题mRNA差异显示正确答案： 通过分离表型相区分（如特定疾病的病例和对照）样本总RNA（或mRNA）、逆转录为cDNA后进行PCR随机扩增，凝胶电泳后比较扩增产物条带，其中的差异片段可视为引起表型差异（如疾病发生相关）候选基因。解析： 暂无解析 -
第13题：
生物芯片技术是在哪一方面应用技术基础上发展起来的（）。
- A、核酸的测序
- B、基因诊断
- C、基因表达差异分析
- D、外源微生物的鉴定
- E、药物的筛选
正确答案:A -
第14题：
简述mRNA差异显示筛选差异表达基因的基本原理及其优、缺点。
正确答案: M.RNA差异显示技术基于逆转录PCR（RT-PCR）而建立：抽提配对样品如正常和疾病细胞内mRNA（或总RNA），分别逆转录成为cDNA，然后行PCR随机扩增；一条引物为oligo（dA），能与单链cDNA5’端oligo（dT）结合，另一条为随机引物，能与3’端互补核苷酸序列结合，因此经过RT-PCR扩增后，能将mRNA逆转录为cDNA、扩增获得双链cDNA及其不同PCR产物；扩增产物经过凝胶电泳分析，比较组间扩增产物异同，回收差异片段为探针在cDNA文库或基因组文库中筛选相关基因，从而确定这些基因在疾病过程中的参与情况。
优点：简单易行；灵敏度高；重复性好；多能性；快速。
缺点：假阳性率高，达70%以上；逆转录产物仅为mRNA3’非翻译区，需要进一步的文库筛选确定有关基因。 -
第15题：
下列数据是人体部分器官或细胞中所表达基因的估计数目，下列有关叙述不正确的是（）
- A、人体各器官表达的基因数目有差异是细胞内基因选择性表达形成的
- B、血细胞所表达的基因的数目最多说明其遗传物质相对含量较高
- C、人体各器官基因表达数目有差异说明细胞中所含蛋白质有差异
- D、不同功能的细胞表达的基因不相同，这是与细胞具有不同功能相适应的
正确答案:B -
第16题：
用免疫化学法筛选重组体的原理是（）
- A、根据外源基因的表达
- B、根据载体基因的表达
- C、根据mRNA同DNA的杂交
- D、根据DNA同DNA的杂交
正确答案:A -
第17题：
简述杂合双链分析检测基因突变的基本原理及其优、缺点。
正确答案: 杂合双链分析（heteroduplex analysis，HA）原理在于有缺失突变的待检DNA与野生型DNA探针杂交后，形成的异源杂合双链DNA在错配处会产生单链的环形突起，无突变则无此结构，这两种杂交后形成的双链DNA在凝胶电泳时会产生不同的迁移率，据此可以判断待检DNA样品中有无缺失突变。
优点：简单、快速。
缺点：适用范围较小，限于200-300bp片段，且不能确定突变位置，检出率一般为80%。 -
第18题：
问答题简述核糖核酸酶切技术分析基因突变的基本原理及其优、缺点。正确答案： 核糖核酸酶切分析（RNase cleavage）的基本原理是在一定条件下，异源双链核酸分子RNA：RNA或RNA：DNA中的错配碱基可被核糖核酸酶RNase识别并切割；利用含SP6或T7噬菌体启动子的质粒，在体外合成与野生型DNA或RNA互补的标记RNA探针，将其与待检核酸样品杂交后再用RNase处理，形成的异源双链核酸分子如有单碱基错配，会被RNase识别切割，通过分析酶切片段数量及大小可检出有无突变及点突变位置。
优点：一步反应确定突变在片段中的位置，不使用有害化学试剂。
缺点：突变检出率不高，因为错配为嘌呤碱基时RNase的切割效率低下，即使同时检测正、反义两条链，检出率也只能达到70%，且需要制备特异性RNA探针。解析： 暂无解析 -
第19题：
问答题说明mRNA差别显示分离产物未知基因的基本原理并评述其优缺点。正确答案： 原理：
①几乎所有的真核基因mRNA分子的3´-末端都有一段poly（A）尾巴。因此，在RNA聚合酶作用下，可按mRNA为模板，以oligo（dT）为引物合成出cDNA拷贝；
②根据mRNA分子3´-端序列结构分析，在这段poly（A）序列起点碱基之前的两个碱基，除了倒二位的碱基为A的情况之外，只能有12种可能的排列组合；
③根据上述mRNA分子结构特征设计的，用以反转录mRNA合成第一链cDNA的下游引物，共12种，其通式为：5´-T11MN或5´-T12MN。每一种此类人工合成的3´-端锚定引物，都能够把总mRNA群体的1/12分子反转录成mRNA-cDNA杂种分子。因此，用5´-T11MN引物或5´-T12MN引物，可以将整个mRNA群体在cDNA水平上，分成大致相等的位序列结构不同的12个分亚群体。
④由于3´-端锚定引物合成的第一链cDNA群体中，代表某一特定细胞类型或发育阶段的mRNA种的含量是相当低的，所以要把一种只在某一发育阶段或某种细胞类型中表达、而在另一发育阶段或某种细胞类型中不表达的目的基因分离出来，就需要进行PCR扩增，因此在DDRT-PCR反应中还需5´-端随机引物。
优点：
①可以同时比较多个样品间基因表达的差异；
②可以同时检测到“上游”及“下游”基因；
③检测的灵敏度高，所需样品少，一些低丰度的mRNA亦可被检测出来；
④结合使用PCR和序列胶电泳分析两项技术，使本法更加简单方便。
缺点：
①假阳性比较高，通常可高达50%-70%；
②扩增条带的分子长度比较短小；
③工作量大。解析： 暂无解析 -
第20题：
单选题在发育过程中，胚胎细胞分化的最根本原因是胚胎细胞中（）。A基因差异的表达
B基因差异的转录
CRNA差异的加工
D蛋白质差异的合成
正确答案： A解析： 暂无解析 -
第21题：
名词解释题基因的差异表达（genedifferentialexpression）正确答案： 在胚胎发育和分化过程中相继出现各种不同的细胞类型，这是由于有关的奢侈基因按一定的顺序相继活化的结果，这种现象称基因的差异表达。解析： 暂无解析 -
第22题：
问答题简述基因表达差异的分子机制。正确答案： a.细胞内环境的差异分子机制：染色体水平基因活性的调控，转录水平的调控，RNA加工水平的调控，翻译和翻译后的调控。
b.细胞外环境的分子机制：信号转导，各种信号通路的网络调控。解析： 暂无解析 -
第23题：
多选题基因表达谱芯片技术简述如下：在一张1.6cm2的芯片上排布几十万个探针组成微方阵，探针分子是30～40bp的cDNA。从不同的人体组织或细胞中提取所有DNA的mRNA，标记荧光染料，将其与cDNA方阵杂交。根据荧光信号强弱，确定表达的基因及其表达水平。根据以上叙述判断，以下正确的有（）A探针与cDNA方阵杂交，原理是碱基互补配对
B探针分子通过PCR技术制备
C检测样品也可以直接用DNA
D检测结果可用于研究正常细胞和肿瘤细胞基因表达的差异
正确答案： D,B解析： 暂无解析 -
第24题：
单选题发育过程中胚胎细胞的分化是由于以下哪一项引起的？（）A基因的差异转录；
B基因的差异表达；
C核RNA的差异加工；
D以mRNA为模板合成蛋白的差异。
正确答案： D解析： 暂无解析