什么叫PCR的引物？什么叫特异性引物？什么叫简并性引物？

第1题：

第2题：

以下关于PCR的说法错误的是（）

• A、PCR反应必须要有模板、引物、dNTP和DNA聚合酶
• B、应用PCR技术可以进行定点突变
• C、PCR的引物必须完全和模板互补配对
• D、PCR反应中，仅介于两引物间的DNA片段得到大量扩增

正确答案:C

第3题：

随机引物标记探针的特异性较PCR掺入法高。

正确答案:错误

第4题：

PCR引物设计的基本要求是什么？

正确答案: 1、引物长度一般为15～30个核苷酸。过短影响PCR的特异性，过长会提高相应退火温度，使延伸温度超过TaqDNA聚合酶最适温度74℃，影响产物的生成。
2、引物的碱基尽可能随机，避免出现嘌呤、嘧啶碱基堆积现象。3’端不应有连续3个G和C。否则会使引物和模板错误配对。G+C含量一般占45％-55％。3’端和5’端引物具有相似的Tm值，Tm值计算公式：Tm＝4（G+C.+2（A+T）
3、引物自身不应存在互补序列以避免折叠成发夹结构。引物的连续互补序列，一般不超过3bp。
4、两个引物之间不应存在互补序列，尤其应避免3’端的互补重叠。
5、引物与非特异扩增区的序列的同源性不超过70％，引物3’末端连续8个碱基在待扩增区以外不能有完全互补序列，否则易导致非特异性扩增。
6、引物3’端碱基是引发延伸的起点，因此一定要与模板DNA配对。引物3’端最佳碱基选择是G和C，形成的碱基配对比较稳定。
7、引物与模板结合时，引物的5’端最多可以游离十几个碱基而不影响PCR反应的进行。
8、引物的5’端可以修饰，如附加限制酶位点，引入突变位点，用生物素、荧光物质、地高辛标记其它短序列包括起始密码子、终止密码子等。

第5题：

什么叫免疫PCR？

正确答案:免疫PCR是将免疫反应的特异性与聚合酶链反应(PCR)的敏感性相结合的一种免疫学检测技术。其原理是用一段已知的DNA分子作为标记物结合一抗或二抗后去检测相应抗原或抗体，再用PCR法扩增此段DNA分子，琼脂糖电泳定性，根据该DNA分子的存在与否，确定检测结果。该法与ELISA基本相似，不同的是以一段可扩增的DNA标记代替了酶标记，以观察PCR扩增后的产物代替了酶催化底物的显色反应来判定结果。

第6题：

简并引物

正确答案: 由于一个氨基酸可以对应一个到多个密码子，因此一段氨基酸序列可以有多个可能的编码序列，称之为简并序列。相应合成这一段序列作PCR扩增体系的引物即为简并引物。

第7题：

关于重组PCR定点突变和大引物突变法的叙述正确的是（）

• A、只能在DNA片段的特定部位产生突变
• B、不需要测序确定突变结果
• C、重组PCR定点突变法需要4种扩增，3轮PCR反应
• D、大引物法需要3种扩增引物，3轮PCR反应
• E、重组PCR定点突变法操作较大引物法简单

正确答案:C

第8题：

第9题：

第10题：

第11题：

第12题：

第13题：

PCR-SSP序列特异性引物PCR

正确答案: 是根据等位基因的序列，设计具有序列特异性的引物，对样本进行DNA分型。该方法是以引物决定分型特异性。有以下优点：特异性强、重复性好、结果易于判定。

第14题：

什么是随机引物（randomprimer）？如何标记DNA？

正确答案: 随机引物是人工合成的长度为6个核苷酸的寡聚核苷酸片段群体，含有各种可能的排列顺序（4⁶=4096）；或是用DNase处理小牛胸腺DNA后获得的6～12个碱基的片段。将待标记的DNA片段同随机引物一起进行杂交，并以杂交体上的寡聚核苷酸为引物，在Klenow酶的作用下合成互补DNA链，当反应底物中有放射性的dNTP时，新合成的DNA就带上了标记。

第15题：

有关PCR引物描述错误的是（）。

• A、为一段核酸序列
• B、限定了产物的长度
• C、与反应的特异性无关
• D、不能太长
• E、引物之间不应有互补

正确答案:C

第16题：

什么叫PCR？

正确答案:聚合酶链反应是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。
它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点。

第17题：

目的酶基因的DNA区段一侧含有一酶切位点，可用什么方法对酶分子进行改造（）

• A、寡核苷酸引物突变法
• B、盒式突变
• C、PCR定点突变法
• D、大引物突变法

正确答案:A,C,D

第18题：

PCR引物

正确答案: 在PCR反应中，与待扩增的DNA两侧碱基互补的寡核苷酸片段，其本质是单链DNA。

第19题：

引物酶和引发体的作用是什么？

正确答案:引物酶的作用是催化引物的合成，它能在复制起始位点按照与模板碱基互补的原则合成短片段RNA。引物酶与DnaB蛋白及单链模板结合，构成引发体，随着RNA引物的合成和DNA聚合酶Ⅲ的加入，在复制起始部位两侧形成两个制叉，复制进入延长阶段。

第20题：

第21题：

第22题：

第23题：