质粒单酶切点的基因连接如何降低本底和防止自我环化和提高连接效率？

题目

质粒单酶切点的基因连接如何降低本底和防止自我环化和提高连接效率？

相似考题

1.用同一种限制酶切割载体和目的基因后进行连接，连接产物会含大量自身环化载体，采用下列哪种酶处理，可防止载体自身环化( )A、核酸内切酶B、核苷酸激酶C、核酸外切酶D、末端转移酶E、碱性磷酸酶

2.以下关于基因工程的操作工具的说法正确的是（）A、所有的限制性核酸内切酶只能识别一种特定的核苷酸序列B、质粒是基因工程中唯一的载体C、载体必须具备条件之一是：具有一个或多个限制性核酸内切酶切点，以便与外源基因连接D、DNA连接酶使黏性末端的碱基之间形成氢键

3.下列哪项不是质粒被选为基因运载体的理由（）A、能进行自我复制B、DNA为环状C、有多个限制酶切点D、具有标记基因

4.有关理想质粒载体的特点，正确的是A.为线性单链DNA B.含有多种限制酶的单一切点 C.含有同一限制酶的多个切点 D.其复制受宿主控制 E.不含耐药基因

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  • 第1题：

    基因克隆时，用（）处理载体后，可防止载体自身环化，提高重组效率。


    正确答案:碱性磷酸酶

  • 第2题：

    有关理想质粒载体的特点，正确的是（）

    • A、为线性单链DNA
    • B、含有多种限制酶的单一切点
    • C、含有同一限制酶的多个切点
    • D、其复制受宿主控制
    • E、不含耐药基因

    正确答案:A

  • 第3题：

    下列说法正确的是（）

    • A、所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列
    • B、质粒是基因工程中唯一的运载体
    • C、运载体必须具备的条件之一是：具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接
    • D、基因治疗主要是对有缺陷的细胞进行修复

    正确答案:C

  • 第4题：

    以下说法正确的是（）

    • A、所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列
    • B、质粒是基因工程中唯一的运载体
    • C、运载体必须具备的条件之一是：具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接
    • D、DNA连接酶使黏性末端的碱基之间形成氢键

    正确答案:C

  • 第5题：

    采用BamHI单切载体和目的基因后，进行重组连接前要（）

    • A、65℃处理10分钟使BamHI灭活。
    • B、用碱性磷酸酶处理载体防止其自身环化。
    • C、电泳检测酶切结果。
    • D、A、B、C都正确。
    • E、只有A、C正确。

    正确答案:D

  • 第6题：

    在DNA重组连接时，常采用连接头连接（linker ligation），其作用是（）

    • A、引入某些限制酶切位点。
    • B、增加调控元件。
    • C、通过接头引入与目的基因相同的限制酶位点，并对目的基因相应酶切点进行甲基化修饰保护，可保护目的基因不受限制酶破坏。

    正确答案:A,B,C,E

  • 第7题：

    在基因工程中，科学家所用的“剪刀”、“针线”和“运载体”分别是指（）

    • A、大肠杆菌病毒、质粒、DNA连接酶
    • B、噬菌体、质粒、DNA连接酶
    • C、DNA限制酶、RNA连接酶、质粒
    • D、DNA限制酶、DNA连接酶、质粒

    正确答案:D

  • 第8题：

    问答题
    质粒单酶切点的基因连接如何降低本底和防止自我环化和提高连接效率？

    正确答案： 目的基因片断与载体由相同的单一限制性核酸内切酶（如EcoRI）消化酶切后，两者的两端均具有相同的粘性末端，称为单酶切点的粘性末端，又称全同源性粘性末端。
    高背景：载体经单一限制性核酸内切酶切割后，载体分子易于自我环化，既不利于目的基因的重组连接，大大降低阳性克隆效率，又可使非重组性载体造成高背景。为了防止载体的自我环化，通常用碱性磷酸酶去除载体粘性末端的5P以抑制DNA的自我环化。在连接反应中，具有5’-P，的目的基因DNA片断可有效地与去磷酸化质粒DNA载体通过粘性末端发生互补连接，尽管产生的重组DNA分子于连接点含有两个缺口的开环分子，尽管在转化时其转化效率高于线性低于闭和环，但转化大肠杆菌后，在菌体内其缺口可获得修复。
    双向插入：经单一限制核酸内切酶（如EcoRI）切割的目的基因和载体，因二者的性末端是相同的，因此在连接反应中，目的基因可发生双向插入，载体对目的基因表达是有方向的，而目的基因可双向与之相连，这种连接若以克隆目的基因片段为目的没有影响，若以表达为目的，我们就要对插入的片段进行方向鉴定，因目的基因由起始密码子向终止密码子方向表达是定向转录的，一旦启动子与目的基因编码顺序方向相反就不能正确转录目的基因的mRNA。若构建表达DNA重组体选用双酶切切割目的基因和载体，可使目的基因与载体的连接发生定向连接重组，以便定向克隆。
    解析： 暂无解析

  • 第9题：

    问答题
    在质粒中如何增减酶切点？

    正确答案： （1）削减酶切点
    可以用完全酶切或部分酶切。
    （2）增加酶切点
    增加切点有两种方法：一是利用人工合成的接头，或是利用天然的接头。
    解析： 暂无解析

  • 第10题：

    单选题
    关于理想质粒载体的特点的叙述，正确的是（　　）。
    A

    含有同一限制酶的多个切点

    B

    含有多种限制酶的单一切点

    C

    为线性单链DNA

    D

    其复制受宿主控制

    E

    不含耐药基因


    正确答案： D
    解析： 暂无解析

  • 第11题：

    单选题
    有关理想质粒载体的特点，正确的是
    A

    为线性单链DNA

    B

    含有多种限制酶的单一切点

    C

    含有同一限制酶的多个切点

    D

    其复制受宿主控制

    E

    不含耐药基因


    正确答案： E
    解析： 暂无解析

  • 第12题：

    单选题
    黏性末端连接法，不仅操作方便，而且（）。
    A

    产生新切点

    B

    易于回收外源片段

    C

    载体不易环化

    D

    影响外源基因的表达


    正确答案： D
    解析： 暂无解析

  • 第13题：

    下列有关基因工程的叙述，不正确的是（）。

    • A、转基因植物操作时，受体细胞用植物的受精卵或者体细胞均可
    • B、限制酶一般不切割自身的DNA分子，只切割外源DNA
    • C、DNA连接酶连接的是黏性末端两条主链上的磷酸和脱氧核糖
    • D、作为基因工程的载体质粒，其具有能自我复制，含有标记基因，为单链DNA等特点

    正确答案:D

  • 第14题：

    在基因工程中，科学家所用的“剪刀”、“针线”和“载体”分别是指（）

    • A、大肠杆菌病毒、质粒、DNA连接酶
    • B、噬菌体、质粒、DNA连接酶
    • C、限制酶、RNA连接酶、质粒
    • D、限制酶、DNA连接酶、质粒

    正确答案:D

  • 第15题：

    下列有关基因工程技术的叙述，正确的是（）

    • A、重组DNA技术最基本的工具是限制酶、DNA连接酶和运载体
    • B、所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列
    • C、DNA连接酶连接的是氢键
    • D、常用不同种的限制性核酸内切酶处理目的基因和质粒

    正确答案:A

  • 第16题：

    黏性末端连接法，不仅操作方便，而且（）

    • A、产生新切点 
    • B、易于回收外源片段 
    • C、载体不易环化 
    • D、影响外源基因的表达

    正确答案:B

  • 第17题：

    用同一种酶切割载体和目的基因后进行连接，连接产物会含大量自身环化载体，采用下列哪种酶处理，可防止自身环化（）

    • A、核酸内切酶
    • B、核苷酸激酶
    • C、核酸外切酶
    • D、末端转移酶
    • E、碱性磷酸酶

    正确答案:E

  • 第18题：

    构建载体时，使用双酶切相对于单酶切的优点在于（）

    • A、避免载体自身环化
    • B、提高连接效率
    • C、控制外源基因的插入方向
    • D、便于转化后的筛选
    • E、便于修改阅读框

    正确答案:A,B,C,D

  • 第19题：

    基因克隆时，用末端脱氧核苷酰转移酶处理载体后，可防止载体自身环化，提高重组效率。


    正确答案:错误

  • 第20题：

    问答题
    有人用限制性内切核酸酶 EcoRl 分别切割松弛型质粒 ColEl 和严紧型质粒 pSCl01（各有一个切点），然后重组连接形成一个杂种质粒 pSCl34，请推测这种质粒有什么特性和用途。

    正确答案： 由于ColEl不能在缺失DNA聚合酶I的细菌中复制，所以在这种细胞中就使用pSCl01的复制起点。而质粒pSCl01不能在不合成蛋白质的细胞中复制，在这种情况下则使用ColEl的复制起点。一般情况下优先使用ColEl的复制起点。这种质粒由于具有两个复制起点，可以根据需要，选用不同的宿主菌，表达特定的外源基因。
    解析： 暂无解析

  • 第21题：

    单选题
    在基因工程中，科学家所用的“剪刀”、“针线”和“运载体”分别是指（）
    A

    大肠杆菌病毒、质粒、DNA连接酶

    B

    噬菌体、质粒、DNA连接酶

    C

    DNA限制酶、RNA连接酶、质粒

    D

    DNA限制酶、DNA连接酶、质粒


    正确答案： D
    解析： 暂无解析

  • 第22题：

    单选题
    下列有关基因工程的叙述，不正确的是（）。
    A

    转基因植物操作时，受体细胞用植物的受精卵或者体细胞均可

    B

    限制酶一般不切割自身的DNA分子，只切割外源DNA

    C

    DNA连接酶连接的是黏性末端两条主链上的磷酸和脱氧核糖

    D

    作为基因工程的载体质粒，其具有能自我复制，含有标记基因，为单链DNA等特点


    正确答案： C
    解析： 植物细胞具有全能性，受体细胞用植物的受精卵或者体细胞均可，A正确；限制酶对自身细胞具有保护作用，一般不切割自身的DNA分子，只切割外源DNA，B正确；DNA连接酶连接的是黏性末端两条主链上的磷酸和脱氧核糖，C正确；质粒是双链DNA，D错误。

  • 第23题：

    判断题
    基因克隆时，用末端脱氧核苷酰转移酶处理载体后，可防止载体自身环化，提高重组效率。
    A

    对

    B

    错


    正确答案： 错
    解析： 暂无解析

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