简单说明DNA重组技术中的蓝白斑筛选原理。
题目
简单说明DNA重组技术中的蓝白斑筛选原理。
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第1题：
蓝白斑筛选标记基因实验中，蓝色斑表示是插入了外源片段重组质粒的菌落。
正确答案:错误 -
第2题：
重组DNA技术大致可以用以下几个字简单概括：分（目的基因的分离）、切（限制性内切酶切割目的基因和载体）、接（目的基因和载体连接）、转（连接产物导入受体细胞）、筛（筛选阳性重组子）。重组DNA技术中最常用的筛选方法是（）
- A、标志补救筛选
- B、插入表达筛选
- C、抗性筛选
- D、限制性内切酶酶切图谱分析
- E、核酸分子杂交筛选
正确答案:C -
第3题：
蓝-白斑筛选
正确答案: 含LacZ基因（编码β半乳糖苷酶）该酶能分解生色底物X-gal（5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷）产生蓝色，从而使菌株变蓝。当外源DNA插入后，LacZ基因不能表达，菌株呈白色，以此来筛选重组细菌。称之为蓝-白斑筛选。 -
第4题：
简述利用蓝白斑筛选重组子的原理。
正确答案:β—半乳糖苷酶基因编码1021个氨基酸，基因产物装配为四聚体后才有酶活性。该蛋白质可分为两部分：α肽段和β肽段。前者负责四聚体装配，后者具β—半乳糖苷酶活性；只有当两者都存在时，才会表现出酶活性，可催化X-Gal水解为兰色产物，该作用称之为α-互补作用。这两个部分可独立存在， 分别由两个基因编码。为α肽段编码的基因称之为lacZα（编码145 AAs），lacZα编码区5‘-端可容许很大的变化（如加入多克隆位点）而不影响酶活性。当外源DNA分子插入多克隆位点后，会破坏α肽段的编码。所以重组DNA转化α肽段编码区缺失的E.coli，涂布在含X-Gal的平板上会产生白色菌落，而非重组子产生蓝色菌落。 -
第5题：
什么是蓝白斑筛选？其原理是什么？
正确答案:概念：根据β-半乳糖苷酶显色反应筛选含有外源DNA插入序列的重组体克隆。原理：当外源DNA插入到载体lacZ标记基因上，导致β-半乳糖苷酶基因失活，因此通过大肠杆菌转化子菌落在添加有X-gal-IPTG培养基中的颜色由蓝色变成白色菌落这一颜色变化直接观察出来。 -
第6题：
DNA重组的顺序是（）①用连接酶将外源DNA与载体连接。②培养细胞以扩增重组DNA。③通过转化将重组DNA引入受体细胞。④筛选出含有重组体的克隆。
- A、①②③④
- B、①④②③
- C、①③②④
- D、④①③②
正确答案:C -
第7题：
何为转化、转导、DNA体外重组技术？举例说明在发酵工业中的应用。
正确答案: 转化（transformation）：（游离DNA分子+感受态细胞）
从供体（提供DNA的细胞）细胞中取出遗传物质，通过对受体（获得DNA的细胞）细胞的培养处理，使供体的DNA片段进入受体细胞内，与受体细胞的DNA重新组合而获得变种的一种育种方法。
转导（transduction）：（由噬菌体介导）
由噬菌体作媒介，将一个细胞的遗传物质传递给另一个细胞，从而获得高产变种的一种育种方法。
DNA体外重组技术（invitrorecombinationDNAtechnology）根据需要用人工方法取得供体DNA上的基因，在体外重组于载体DNA上，再转移入受体细胞，使其复制、转录和翻译，表达出供体原有的遗传性状。 -
第8题：
问答题简单说明DNA重组技术中的蓝白斑筛选原理。正确答案： 蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法：是根据载体的遗传特征筛选重组子，如α-互补、抗生素基因等。现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段，其中有β-半乳糖苷酶基因（lacZ）的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。在这个编码区中插入了一个多克隆位点（MCS），它并不破坏读框，但可使少数几个氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影响功能，这种载体适用于可编码β-半乳糖苷酶C端部分序列的宿主细胞。因此，宿主和质粒编码的片段虽都没有酶活性，但它们同时存在时，可形成具有酶学活性的蛋白质。这样，lacZ基因在缺少近操纵基因区段的宿主细胞与带有完整近操纵基因区段的质粒之间实现了互补，称为α-互补。
由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG的作用下，在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落，因而易于识别。然而，当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地导致无α-互补能力的氨基端片段，使得带有重组质粒的细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选，又称为蓝白斑筛选。如用蓝白斑筛选则经连接产物转化的钙化菌平板37℃温箱倒置培养12-16hr后，有重组质粒的细菌形成白色菌落。解析： 暂无解析 -
第9题：
问答题基因工程中常用α一互补来筛选重组质粒，请说明其原理。正确答案： 很多载体都携带一段细菌的lacZ基因，它编码β一半乳糖苷酶N一端的146个氨基酸，称为α一肽，载体转化的宿主细胞为lacZ△15基因型，它表达β一半乳糖苷酶的C一端肽链。当载体与宿主细胞同时表达两个片段时，宿主细胞才有β一半乳糖苷酶活性，使特异的底物X一gal变为蓝色化合物，这就是所谓的α一互补，而重组子由于基因插入使α一肽基因失活，不能形成α一互补，在含X一gal的平板上，含阳性重组子的细菌为无色菌落或噬菌斑。解析： 暂无解析 -
第10题：
多选题DNA重组中用来筛选的方法有（）.APCR法
B平板筛选法
C原位杂交技术
D人工检验法
正确答案： A,C解析： 暂无解析 -
第11题：
单选题重组DNA技术大致可以用以下几个字简单概括：分（目的基因的分离）、切（限制性内切酶切割目的基因和载体）、接（目的基因和载体连接）、转（连接产物导入受体细胞）、筛（筛选阳性重组子）。重组DNA技术中最常用的筛选方法是（）A标志补救筛选
B插入表达筛选
C抗性筛选
D限制性内切酶酶切图谱分析
E核酸分子杂交筛选
正确答案： E解析： 暂无解析 -
第12题：
问答题简述重组DNA技术的原理及技术。正确答案： 重组DNA是在体外利用限制性内切酶，将不同来源的DNA分子进行特异的切割，获得的目的基因或DNA片段与载体连接，从而组成一个新的DNA分子。重组的DNA分子能够通过一定的方式进入相应的宿主细胞，并在宿主细胞中进行无性繁殖，获得大量的目的基因或DNA片段。经重组的DNA分子能在宿主细胞中进行表达，获得相应的蛋白质。
大致步骤包括：①目的基因的获取；②载体的选择；③目的基因与运载体连接成重组 DNA；④重组DNA导入受种细胞；⑤重组体的筛选。解析： 暂无解析 -
第13题：
蓝-白筛选的原理。
正确答案:有些载体含有β-半乳糖苷酶基因（lacZ）的调控序列和氨基端145个氨基酸的编码序列，这个编码区中插入了一个多克隆位点，这种载体适用于可编码β-半乳糖苷酶羧基端部分序列的宿主细胞。宿主和载体编码的β-半乳糖苷酶片段各自均无酶活性，但它们可以互补形成具有酶学活性的蛋白质，使X-gal转化成蓝色的代谢产物，出现蓝色的菌落（菌斑）。如果在多克隆位点上插入外源DNA片段，将使载体的lac Z基因灭活，不能互补形成有活性的β-半乳糖苷酶，结果菌落（菌斑）呈现白色。由于这种颜色标志，重组克隆和非重组克隆的区分一目了然，这种筛选方法称为“蓝-白筛选”。 -
第14题：
重组DNA技术包括（）
- A、制备目的基因DNA片段
- B、将目的基因与载体相连
- C、将重组DNA导入受体细胞
- D、筛选和鉴定DNA重组体
- E、去除载体
正确答案:A,B,C,D -
第15题：
简述重组DNA技术的原理及技术。
正确答案: 重组DNA是在体外利用限制性内切酶，将不同来源的DNA分子进行特异的切割，获得的目的基因或DNA片段与载体连接，从而组成一个新的DNA分子。重组的DNA分子能够通过一定的方式进入相应的宿主细胞，并在宿主细胞中进行无性繁殖，获得大量的目的基因或DNA片段。经重组的DNA分子能在宿主细胞中进行表达，获得相应的蛋白质。
大致步骤包括：①目的基因的获取；②载体的选择；③目的基因与运载体连接成重组 DNA；④重组DNA导入受种细胞；⑤重组体的筛选。 -
第16题：
用免疫化学法筛选重组体的原理是（）
- A、根据外源基因的表达
- B、根据载体基因的表达
- C、根据mRNA同DNA的杂交
- D、根据DNA同DNA的杂交
正确答案:A -
第17题：
什么是蓝白斑筛选法？
正确答案: 这种方法是根据组织化学的原理来筛选重组体。主要是在载体的非必要区插入一个带有大肠杆菌—半乳糖苷酶的基因片段，携带有lac基因片段的载体转入lac的宿主菌后，在含有5—溴—4—氯—3—引哚——D—半乳糖苷（X-gal）平板上形成浅蓝色的噬菌斑。外源基因插人lac（或lac基因部分被取代）后，重组的噬菌体将丧失分解X-gal的能力，转入lac-宿主菌后，在含有5—溴—4—氯—3—引哚——D—半乳糖苷（X-gal）平板上形成白色的噬菌斑，非重组的噬菌体则为蓝色噬菌斑。 -
第18题：
DNA重组中用来筛选的方法有（）.
- A、PCR法
- B、平板筛选法
- C、原位杂交技术
- D、人工检验法
正确答案:A,B,C -
第19题：
简述重组DNA的筛选与鉴定中蓝-白斑筛选的原理。
正确答案:它是一种利用蓝色化合物的形成作为指示剂的筛选方法，筛选含有编码β-半乳糖苷酶的基因。当在质粒中插入外源DNA→β-半乳糖苷酶的N端基因失活→不能与宿主β-半乳糖苷酶的C端进行α-互补→产生白色菌落。 -
第20题：
问答题以 pBR322 DNA作为载体，从四环素抗性基因区克隆外源 DNA 时，可采用环丝氨酸富集法筛选重组体，说明其基本原理和基本操作过程。正确答案： 原理：由于四环素的作用只是抑制细菌蛋白质的合成，而不是杀死细菌；而氨基酸类似物环丝氨酸如果掺人蛋白质，则是致命的。因此在有四环素的条件下，环丝氨酸能够杀死tetr而不杀死 tets的细菌。经过环丝氨酸处理后，存活的细胞中 tets型得到很大富集，而经过若干次连续处理，即能获得在 tetr基因内含有插人物的质粒的细胞。
基本操作：
（1）转化后有三种表型的细菌，其中只有一种是重组体：AprTcs；
（2）用重组 DNA转化受体菌后，将受体菌培养在加有四环素和环丝氨酸的培养液中培养；此时只有非重组的双抗性菌可以生长，其他都被抑制；
（3）由于有环丝氨酸的存在，AprTcs表型的菌生长到一定程度就会死亡；
（4）由于四环素只有抑菌而无杀菌作用，此时若解除四环素（离心洗涤），加入氨基苄青霉素继续培养，则可使重组体大量生长。解析： 暂无解析 -
第21题：
多选题重组DNA技术包括（）A制备目的基因DNA片段
B将目的基因与载体相连
C将重组DNA导入受体细胞
D筛选和鉴定DNA重组体
E去除载体
正确答案： D,E解析： 暂无解析 -
第22题：
问答题何为转化、转导、DNA体外重组技术？举例说明在发酵工业中的应用。正确答案： 转化（transformation）：（游离DNA分子+感受态细胞）
从供体（提供DNA的细胞）细胞中取出遗传物质，通过对受体（获得DNA的细胞）细胞的培养处理，使供体的DNA片段进入受体细胞内，与受体细胞的DNA重新组合而获得变种的一种育种方法。
转导（transduction）：（由噬菌体介导）
由噬菌体作媒介，将一个细胞的遗传物质传递给另一个细胞，从而获得高产变种的一种育种方法。
DNA体外重组技术（invitrorecombinationDNAtechnology）根据需要用人工方法取得供体DNA上的基因，在体外重组于载体DNA上，再转移入受体细胞，使其复制、转录和翻译，表达出供体原有的遗传性状。解析： 暂无解析 -
第23题：
名词解释题Blue-whitescreening蓝白斑筛选正确答案： 指利用携带半乳糖苷酶α段重组质粒转化对应缺陷型大肠杆菌，产生β-半乳糖苷酶可将无色化合物X-gal切割出深蓝色的物质，使菌落产生颜色变化，从而根据颜色变化鉴定和筛选重组子的方法。解析： 暂无解析