DNA重组技术中,用来筛选重组体的方法有 A.标志补救 B.分子杂交 C.特异性抗体与产物结合 D.紫外分光光度计分析

题目
DNA重组技术中,用来筛选重组体的方法有

A.标志补救 B.分子杂交 C.特异性抗体与产物结合 D.紫外分光光度计分析

相似考题

1.DNA重组技术中，用来筛选重组体的方法有A．标志补救B．分子杂交C．特异性抗体与产物结合D．紫外分光光度计分析

2.重组DNA技术大致可以用以下几个字简单概括：分（目的基因的分离）、切（限制性内切酶切割目的基因和载体）、接（目的基因和载体连接）、转（连接产物导入受体细胞）、筛（筛选阳性重组子）。将重组DNA导入大肠埃希菌最常用方法是A、磷酸钙共沉淀法B、脂质体法C、显微注射法D、噬菌体感染E、氯化钙法重组DNA技术中最常用的筛选方法是A、标志补救筛选B、插入表达筛选C、抗性筛选D、限制性内切酶酶切图谱分析E、核酸分子杂交筛选

3.遗传基因工程的主要内容包括A．载体和目的基因的分离B．限制性内切酶的切割，并把载体和目的基因合成重组C．DNA重组体的转化表达D．DNA重组体的扩增、筛选与鉴定

4.常用于从转化菌中筛选DNA重组体的方法不包括A、α互补筛选B、插入失活筛选C、杂交筛选D、质粒的小量快速提取E、DNA序列测定筛选

更多“DNA重组技术中,用来筛选重组体的方法有 ”相关问题

  • 第1题：

    遗传工程的主要内容包括( )

    A.载体和目的基因的制备
    B.限制性内切酶的切割，并把载体和目的基因合成重组体
    C.DNA重组体的转化和表达
    D.DNA重组体的扩增、筛选与鉴定

    答案：A,B,C,D
    解析：

  • 第2题：

    重组DNA技术大致可以用以下几个字简单概括：分（目的基因的分离）、切（限制性内切酶切割目的基因和载体）、接（目的基因和载体连接）、转（连接产物导入受体细胞）、筛（筛选阳性重组子）。重组DNA技术中最常用的筛选方法是（）

    • A、标志补救筛选
    • B、插入表达筛选
    • C、抗性筛选
    • D、限制性内切酶酶切图谱分析
    • E、核酸分子杂交筛选

    正确答案:C

  • 第3题：

    重组DNA技术的定义及方法？


    正确答案:定义：重组DNA技术又称遗传工程，在体外重新组合脱氧核糖核酸（DNA.分子，并使它们在适当的细胞中增殖的遗传操作。这种操作可把特定的基因组合到载体上，并使之在受体细胞中增殖和表达。因此它不受亲缘关系限制，为遗传育种和分子遗传学研究开辟了崭新的途径。
    方法：重组DNA技术一般包括四步：
    ①获得目的基因；
    ②与克隆载体连接，形成新的重组DNA分子；
    ③用重组DNA分子转化受体细胞，并能在受体细胞中复制和遗传；
    ④对转化子筛选和鉴定。在具体工作中选择哪条技术路线；
    ⑤对获得外源基因的细胞或生物体通过培养，获得所需的遗传性状或表达出所需要的产物。主要取决于基因的来源、基因本身的性质和该项遗传工程的目的。

  • 第4题：

    基因克隆主要分为以下几个步骤（）。

    • A、制备目的基因和相关载体
    • B、将目的基因和有关载体进行连接
    • C、将重组的DNA导入受体细胞
    • D、DNA重组体的筛选和鉴定
    • E、DNA重组体的扩增和表达

    正确答案:A,B,C,D,E

  • 第5题：

    筛选重组转化体的方法有哪些？


    正确答案:利用表型特征进行筛选和物理筛选鉴定法

  • 第6题：

    概述筛选和鉴定DNA重组体的常用方法。


    正确答案:在转基因操作以后，载体只能进入部分宿主细胞，即使含有载体的细胞，也并非都含有目的基因，有些宿主细胞可能含有自身连接成环的载体分子或非目的基因与载体形成的重组体。因此，须在不同层次不同水平上进行筛选和鉴定，以确定哪一菌落所含的重组DNA分子确实带有目的基因，这一过程为筛选。根据载体体系、宿主细胞特性及外源基因在受体细胞表达情况的不同，可采用：
    （1）直接选择法：针对载体携带某种或某些标志基因和目的基因，直接测定该基因或基因表型的方法。a.抗药标志的筛选：载体具有某种抗生素的抗性基因，在转化后只有含载体的细菌才能在含该抗生素的培养平板上生长并形成单菌落，而未转化细胞则不能生长，这样即可将转化菌与非转化菌区别开来。b.插入失活法：将目的基因插入载体某一耐药基因内使该基因失活，可区分单纯载体或重组载体（含目的基因）的转化菌落。如pBR322含ampr、Tetr双抗药基因，若将目的基因插入载体的Tetr基因中，则含目的基因的转化细胞只能在含Amp的培养液中生长，而不能在含Tet的培养液中生长。c.标志补救：若克隆的基因能在宿主菌表达，且表达产物与宿主菌的营养缺陷互补，那么就可以利用营养突变菌株进行筛选，这称为标志补救。如重组体为亮氨酸自养型（Leu+），将重组子导入亮氨酸异养型（Leu-）的宿主细胞后，在不含Leu的培养液中可生长，而不含重组体的细胞则不能生长。 -互补法筛选（见43题）也是一种标志补救选择方法。d.酶切图谱筛选：分别挑取独立的菌落，培养后快速提取重组体DNA，用重组时所采用的限制酶切割后，进行琼脂糖凝胶电泳，可以从DNA片段的大小和有无判断所选的菌落是否为阳性克隆。e.核酸杂交筛选：将转化子DNA或克隆的DNA分子片段转移至合适的膜上，利用标记探针进行杂交，直接选择并鉴定目的基因。f.原位杂交筛选：是将待选菌在平板上培养成菌落，按相应位置（原位）转移至合适的膜上，经变性使膜上的DNA成单链，再与标记的探针（与目的基因互补）杂交，找出平板上的菌落位置，即为重组的阳性菌落。
    （2）免疫学方法筛选：利用特异抗体与目的基因表达产物的特异相互作用进行筛选。这种方法不直接鉴定基因，属非直接筛选法。分为免疫化学方法及酶联免疫检测分析等。基本的工作原理是将琼脂培养板上的转化子菌落经氯仿蒸汽裂解、释放抗原，再将固定有抗血清的膜覆盖在裂解菌落上，在膜上得到抗原抗体复合物，最后用合适的方法检出阳性反应菌落。

  • 第7题：

    DNA重组中用来筛选的方法有（）.

    • A、PCR法
    • B、平板筛选法
    • C、原位杂交技术
    • D、人工检验法

    正确答案:A,B,C

  • 第8题：

    问答题
    简单说明DNA重组技术中的蓝白斑筛选原理。

    正确答案： 蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法：是根据载体的遗传特征筛选重组子，如α-互补、抗生素基因等。现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段，其中有β-半乳糖苷酶基因（lacZ）的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。在这个编码区中插入了一个多克隆位点（MCS），它并不破坏读框，但可使少数几个氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影响功能，这种载体适用于可编码β-半乳糖苷酶C端部分序列的宿主细胞。因此，宿主和质粒编码的片段虽都没有酶活性，但它们同时存在时，可形成具有酶学活性的蛋白质。这样，lacZ基因在缺少近操纵基因区段的宿主细胞与带有完整近操纵基因区段的质粒之间实现了互补，称为α-互补。
    由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG的作用下，在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落，因而易于识别。然而，当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地导致无α-互补能力的氨基端片段，使得带有重组质粒的细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选，又称为蓝白斑筛选。如用蓝白斑筛选则经连接产物转化的钙化菌平板37℃温箱倒置培养12-16hr后，有重组质粒的细菌形成白色菌落。
    解析： 暂无解析

  • 第9题：

    多选题
    重组DNA技术包括（）
    A

    制备目的基因DNA片段

    B

    将目的基因与载体相连

    C

    将重组DNA导入受体细胞

    D

    筛选和鉴定DNA重组体

    E

    去除载体


    正确答案： B,A
    解析： 暂无解析

  • 第10题：

    单选题
    外源基因与载体构成的重组DNA分子性质不同、宿主细胞不同，其重组DNA导入宿主细胞的具体方法也不同，而将外源基因与报告基因共同导入感受态宿主细胞的方法，称作（）。
    A

    电转化重组DNA技术

    B

    共转化重组DNA技术

    C

    体外包装转染重组DNA技术

    D

    脂质体导入重组DNA技术


    正确答案： A
    解析： 暂无解析

  • 第11题：

    单选题
    重组DNA技术大致可以用以下几个字简单概括：分（目的基因的分离）、切（限制性内切酶切割目的基因和载体）、接（目的基因和载体连接）、转（连接产物导入受体细胞）、筛（筛选阳性重组子）。重组DNA技术中最常用的筛选方法是（）
    A

    标志补救筛选

    B

    插入表达筛选

    C

    抗性筛选

    D

    限制性内切酶酶切图谱分析

    E

    核酸分子杂交筛选


    正确答案： E
    解析： 暂无解析

  • 第12题：

    判断题
    对于重组体的筛选工作来说，DNA测序属于直接筛选法。
    A

    对

    B

    错


    正确答案： 对
    解析： 暂无解析

  • 第13题：

    重组DNA技术中，目的基因的获取方法有化学合成法、（）、（）、（）。


    正确答案:从基因组DNA文库获取目的基因；从cDNA文库获取目的基因；聚合酶链反应法

  • 第14题：

    重组DNA技术包括（）

    • A、制备目的基因DNA片段
    • B、将目的基因与载体相连
    • C、将重组DNA导入受体细胞
    • D、筛选和鉴定DNA重组体
    • E、去除载体

    正确答案:A,B,C,D

  • 第15题：

    简单说明DNA重组技术中的蓝白斑筛选原理。


    正确答案: 蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法：是根据载体的遗传特征筛选重组子，如α-互补、抗生素基因等。现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段，其中有β-半乳糖苷酶基因（lacZ）的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。在这个编码区中插入了一个多克隆位点（MCS），它并不破坏读框，但可使少数几个氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影响功能，这种载体适用于可编码β-半乳糖苷酶C端部分序列的宿主细胞。因此，宿主和质粒编码的片段虽都没有酶活性，但它们同时存在时，可形成具有酶学活性的蛋白质。这样，lacZ基因在缺少近操纵基因区段的宿主细胞与带有完整近操纵基因区段的质粒之间实现了互补，称为α-互补。
    由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG的作用下，在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落，因而易于识别。然而，当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地导致无α-互补能力的氨基端片段，使得带有重组质粒的细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选，又称为蓝白斑筛选。如用蓝白斑筛选则经连接产物转化的钙化菌平板37℃温箱倒置培养12-16hr后，有重组质粒的细菌形成白色菌落。

  • 第16题：

    重组DNA的筛选与鉴定一般有哪四种方法？


    正确答案: ①平板筛选法。是指利用载体的遗传性标记在平板上直接筛选的方法。插入失活：当外源DNA序列插入质粒中某一抗药基因内，使该基因失活，转化细胞就不能生长在含相应抗生素的培养平板上.蓝-白筛选：利用蓝色化合物的形成作为指示剂，筛选带重组质粒的细菌。
    ②限制酶切图谱筛选。对载体上插入的外源DNA片段进行酶切图谱分析，并以此与目的基因的已知图谱对比，因此利用这种方法不仅能区分重组子与非重组子，而且还能鉴定目的重组子。
    ③PCR筛选重组体。抽取少量重组DNA→PCR扩增→电泳鉴定→序列分析
    ④原位杂交技术。1，获取DNA重组2，重组3，转化体4，筛选5，克隆6，表达7.表达产物分离纯化。

  • 第17题：

    DNA重组的顺序是（）①用连接酶将外源DNA与载体连接。②培养细胞以扩增重组DNA。③通过转化将重组DNA引入受体细胞。④筛选出含有重组体的克隆。

    • A、①②③④
    • B、①④②③
    • C、①③②④
    • D、④①③②

    正确答案:C

  • 第18题：

    外源基因与载体构成的重组DNA分子性质不同、宿主细胞不同，其重组DNA导入宿主细胞的具体方法也不同，而将外源基因与报告基因共同导入感受态宿主细胞的方法，称作（）。

    • A、电转化重组DNA技术
    • B、共转化重组DNA技术
    • C、体外包装转染重组DNA技术
    • D、脂质体导入重组DNA技术

    正确答案:B

  • 第19题：

    简述重组DNA的筛选与鉴定中蓝-白斑筛选的原理。


    正确答案:它是一种利用蓝色化合物的形成作为指示剂的筛选方法，筛选含有编码β-半乳糖苷酶的基因。当在质粒中插入外源DNA→β-半乳糖苷酶的N端基因失活→不能与宿主β-半乳糖苷酶的C端进行α-互补→产生白色菌落。

  • 第20题：

    问答题
    重组DNA的筛选与鉴定一般有哪四种方法？

    正确答案： ①平板筛选法。是指利用载体的遗传性标记在平板上直接筛选的方法。插入失活：当外源DNA序列插入质粒中某一抗药基因内，使该基因失活，转化细胞就不能生长在含相应抗生素的培养平板上.蓝-白筛选：利用蓝色化合物的形成作为指示剂，筛选带重组质粒的细菌。
    ②限制酶切图谱筛选。对载体上插入的外源DNA片段进行酶切图谱分析，并以此与目的基因的已知图谱对比，因此利用这种方法不仅能区分重组子与非重组子，而且还能鉴定目的重组子。
    ③PCR筛选重组体。抽取少量重组DNA→PCR扩增→电泳鉴定→序列分析
    ④原位杂交技术。1，获取DNA重组2，重组3，转化体4，筛选5，克隆6，表达7.表达产物分离纯化。
    解析： 暂无解析

  • 第21题：

    填空题
    重组DNA技术中，目的基因的获取方法有化学合成法、（）、（）、（）。

    正确答案： 从基因组DNA文库获取目的基因,从cDNA文库获取目的基因,聚合酶链反应法
    解析： 暂无解析

  • 第22题：

    多选题
    DNA重组中用来筛选的方法有（）.
    A

    PCR法

    B

    平板筛选法

    C

    原位杂交技术

    D

    人工检验法


    正确答案： A,C
    解析： 暂无解析

  • 第23题：

    问答题
    概述筛选和鉴定DNA重组体的常用方法。

    正确答案： 在转基因操作以后，载体只能进入部分宿主细胞，即使含有载体的细胞，也并非都含有目的基因，有些宿主细胞可能含有自身连接成环的载体分子或非目的基因与载体形成的重组体。因此，须在不同层次不同水平上进行筛选和鉴定，以确定哪一菌落所含的重组DNA分子确实带有目的基因，这一过程为筛选。根据载体体系、宿主细胞特性及外源基因在受体细胞表达情况的不同，可采用：
    （1）直接选择法：针对载体携带某种或某些标志基因和目的基因，直接测定该基因或基因表型的方法。a.抗药标志的筛选：载体具有某种抗生素的抗性基因，在转化后只有含载体的细菌才能在含该抗生素的培养平板上生长并形成单菌落，而未转化细胞则不能生长，这样即可将转化菌与非转化菌区别开来。b.插入失活法：将目的基因插入载体某一耐药基因内使该基因失活，可区分单纯载体或重组载体（含目的基因）的转化菌落。如pBR322含ampr、Tetr双抗药基因，若将目的基因插入载体的Tetr基因中，则含目的基因的转化细胞只能在含Amp的培养液中生长，而不能在含Tet的培养液中生长。c.标志补救：若克隆的基因能在宿主菌表达，且表达产物与宿主菌的营养缺陷互补，那么就可以利用营养突变菌株进行筛选，这称为标志补救。如重组体为亮氨酸自养型（Leu+），将重组子导入亮氨酸异养型（Leu-）的宿主细胞后，在不含Leu的培养液中可生长，而不含重组体的细胞则不能生长。 -互补法筛选（见43题）也是一种标志补救选择方法。d.酶切图谱筛选：分别挑取独立的菌落，培养后快速提取重组体DNA，用重组时所采用的限制酶切割后，进行琼脂糖凝胶电泳，可以从DNA片段的大小和有无判断所选的菌落是否为阳性克隆。e.核酸杂交筛选：将转化子DNA或克隆的DNA分子片段转移至合适的膜上，利用标记探针进行杂交，直接选择并鉴定目的基因。f.原位杂交筛选：是将待选菌在平板上培养成菌落，按相应位置（原位）转移至合适的膜上，经变性使膜上的DNA成单链，再与标记的探针（与目的基因互补）杂交，找出平板上的菌落位置，即为重组的阳性菌落。
    （2）免疫学方法筛选：利用特异抗体与目的基因表达产物的特异相互作用进行筛选。这种方法不直接鉴定基因，属非直接筛选法。分为免疫化学方法及酶联免疫检测分析等。基本的工作原理是将琼脂培养板上的转化子菌落经氯仿蒸汽裂解、释放抗原，再将固定有抗血清的膜覆盖在裂解菌落上，在膜上得到抗原抗体复合物，最后用合适的方法检出阳性反应菌落。
    解析： 暂无解析

  • 第24题：

    单选题
    DNA重组的顺序是（）①用连接酶将外源DNA与载体连接。②培养细胞以扩增重组DNA。③通过转化将重组DNA引入受体细胞。④筛选出含有重组体的克隆。
    A

    ①②③④

    B

    ①④②③

    C

    ①③②④

    D

    ④①③②


    正确答案： C
    解析： 暂无解析

相关内容