说明PCR的基本原理、PCR体系的基本组成及其作用。
题目
说明PCR的基本原理、PCR体系的基本组成及其作用。
相似考题
参考答案和解析
正确答案:该技术是在模板DNA、引物和四种脱氧核糖核苷酸存在下，依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应。DNA聚合酶以单链DNA为模板，借助一小段双链DNA来启动合成，通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链DNA模板中的一段互补序列结合，形成部分双链。在适宜的温度和环境下，DNA聚合酶将脱氧单核苷酸加到引物3´-OH末端，并以此为起始点，沿模板5´→3´方向延伸，合成一条新的DNA互补链。
PCR反应的基本成分包括：模板DNA（待扩增DNA）、引物、4种脱氧核苷酸（dNTPs）、DNA聚合酶和适宜的缓冲液。类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的高温变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的低温退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；③引物的适温延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链重复循环变性-退火-延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
PCR反应的基本成分包括：模板DNA（待扩增DNA）、引物、4种脱氧核苷酸（dNTPs）、DNA聚合酶和适宜的缓冲液。类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的高温变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的低温退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；③引物的适温延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链重复循环变性-退火-延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
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第1题：
简述PCR循环测序的基本原理。
本题答案：PCR技术能够快速、特异性地扩增靶DNA，应用PCR技术测定DNA序列分为两个步骤：先利用PCR扩增靶序列片段，制备测序模板，然后再利用PCR直接测定序列。PCR测序采用了热循环高效合成DNA的特性并结合双脱氧核苷酸终止法，使引物链终止的延伸产物数量在热循环过程中得到增加，因此称为循环测序。
每个测序循环包括：
①PCR扩增制备的模板DNA变性成单链形式;
②标记引物与其中的一条链上的互补序列退火;
③退火后的引物在耐热DNA聚合酶催化下发生链延伸终止反应。
本次循环产生的模板链与延伸终止链形成的双链的产物，在下一轮测序循环中，再次被变性，释放出模板链，作为又一轮引发反应的模板，同时积累下一轮循环产生的链终止产物。
上述循环步骤重复20~40次，使链终止产物以线性方式获得扩增。
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第2题：
下列关于组成PCR反应体系的基本成分的叙述中不正确的是( )A.模板DNA
B.特异性引物
C.
D.四种dNTP答案：C解析：
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第3题：
在固定容积的PCR反应体系中，加入越多的模版，PCR反应的效果就会越好。（）
正确答案:错误 -
第4题：
什么是PCR技术？PCR的基本原理是什么？
正确答案:PCR即聚合酶链式反应，是一种在体外快速扩增特定目的基因或DNA序列的技术，故又称基因的体外扩增技术。它可以在试管中建立反应，经过数小时之后，就能将极微量的目的基因或DNA片断扩增数十万乃至千百万倍，无需经过繁琐费时的基因克隆程序，便可获得足够数到两精确的DNA拷贝。
PCR的基本工作原理：以拟扩增的DNA分子为模板，以一对分别与模板5’末端和3’末端相互补的寡核苷酸片段为引物，在DNA聚合酶的作用下，按照半保留复制的机制沿着模板链延伸直至完成新的DNA合成，重复这一过程，即可使目的DNA片段得到扩增。 -
第5题：
什么叫PCR？它的基本原理和反应过程有哪些？
正确答案:PCR也叫聚合酶链式反应，是DNA片段体外扩增的一种技术。在微量离心管中,加入适量的缓冲液, 微量的模板DNA,四种脱氧单核苷酸,耐热性多聚酶, 一对合成DNA的引物,通过高温变性、低温退火和中温延伸三个阶段为一个循环,每一次循环使特异区段的基因拷贝数放大一倍,一般样品是经过30次循环,最终使基因放大了数百万倍; 扩增了特异区段的DNA带。 -
第6题：
何谓PCR？试述PCR技术的基本原理和影响因素。
正确答案: P.CR是一种体外酶促扩增特异DNA片段的技术，其原理类似DNA的体内扩增。它包括：PCR包括三个基本过程：①变性（denaturation），即在较高温度（93℃～98℃）使双链模板DNA变性解链成单链DNA，以提供复制的模板；
②退火（annealing），即在较低温度（37℃～65℃）使加入的引物与待扩增DNA区域特异性地结合，以提供DNA复制起始的3′―OH；
③延伸（extension），即在适当的温度（70℃～75℃）下，DNA聚合酶从特异性结合到DNA模板上的引物3′-OH端开始，根据碱基互补配对原则，按照待扩增区域的核苷酸序列，进行DNA链的延伸，即合成新的DNA分子。这三个过程组成一个循环周期；每个周期合成的产物又可作为下一个周期的模板，如此循环往复，经过n轮循环后，靶DNA的拷贝数理论上呈2n增长。
影响PCR反应的因素主要有：引物、TaqDNA聚合酶、dNTP、模板和Mg2+离子，此外，pH、温度、循环次数也会影响PCR反应。 -
第7题：
聚合酶链式反应（PCR）的基本原理包括（）。
- A、变性
- B、退火
- C、延伸
- D、杂交
正确答案:A,B,C -
第8题：
问答题概述PCR技术的基本原理及过程。正确答案： PCR技术是一种选择性体外扩增DNA或RNA片段的方法。其特异性是由两条人工合成的引物序列决定的。所谓引物就是指与待扩增DNA片段两翼互补的寡核苷酸(一般20～30个碱基)，其本质是DNA片段。待扩增DNA模板加热变性后，两引物分别与两条DNA的两翼序列特异性结合，此时两引物的3′端相对，5′端相背。在合适的条件下，DNATaq酶催化反应体系中的游离单核苷酸沿着引物的3′端，按照碱基配对的原则延伸形成两条与模板DNA互补的半保留复制链。重复上述变性→退火→延伸的过程可以获得更多的复制链，如此反复进行，DNA可呈2n指数增加。按理论计算，一般DNA链经过20～30次循环放大其拷贝数为百万倍。但每次循环并不是每条DNA链都起到模板作用指导DNA的合成，尽管如此，在短时期内即可合成大量的DNA产物。解析： 暂无解析 -
第9题：
问答题简述PCR引物设计的基本原则及其注意要点正确答案： 原则：首先引物与模板的序列要紧密互补，其次引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构，再次引物不能再模板的非等位点引发DNA聚合反应（即错配）。
注意要点：
1、引物的长度一般为15-30bp，常用的是18-27bp，但不应大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适合于TaqDNA聚合酶进行反应。
2、引物序列在模板内应当没有相似性较高，尤其是3’端相似性较高的序列，否则容易导致错配。引物3’端出现3个以上的连续碱基，如GGG或CCC，也会使错误引发几率增加。
3、引物3’端的末位碱基对Taq酶的DNA合成效率有较大的影响。不同的末位碱基在错配位置导致不同的扩增效率，末位碱基为A的错配效率明显高于其他3个碱基，因此应当避免在引物的3’端使用碱基。另外，引物二聚体或发夹结构也可能导致PCR反应失败。5’端序列对PCR影响不太大，因此常用来引进修饰位点或标记物。
4、引物序列的GC含量一般为40-60%，过高或过低都不利于引发反应。上下游引物的GC含量不能相差太大。
5、引物所对应模板位置序列的Tm值在72℃左右可使复性条件最佳。Tm值的计算有很多种方法，如按公式Tm=4（G+C）+2（A+T），在Oligo软件中使用的是最邻近法（thenearestneighbormethod）。
6、G值是指DNA双链形成所需的自由能，该值反映了双链结构内部碱基对的相对稳定性。应当选用3’端G值较低（绝对值不超过9），而在5’端和中间G值相对较高的引物。引物的3’端的G值过高，容易在错配位点形成双链结构并引发DNA聚合反应。
7、引物二聚体及发夹结构的能值过高（超过4.5kcal/mol）易导致产生引物二聚体带，并且降低引物有效浓度而使PCR反应不能正常进行。
8、对引物的修饰一般是在5’端增加酶切位点，应根据下一步实验中要插入PCR产物的载体的相应序列而确定。解析： 暂无解析 -
第10题：
问答题PCR 的基本原理是什么？用 PCR扩增某一基因，必须预先得到什么样的信息？正确答案： （1）DNA半保留复制的原理，在体外进行 DNA的变性、复性和引物延伸。
（2）至少要预先知道足够合成一对引物的靶 DNA序列。解析： 暂无解析 -
第11题：
问答题何谓PCR？试述PCR技术的基本原理和影响因素。正确答案： P.CR是一种体外酶促扩增特异DNA片段的技术，其原理类似DNA的体内扩增。它包括：PCR包括三个基本过程：①变性（denaturation），即在较高温度（93℃～98℃）使双链模板DNA变性解链成单链DNA，以提供复制的模板；
②退火（annealing），即在较低温度（37℃～65℃）使加入的引物与待扩增DNA区域特异性地结合，以提供DNA复制起始的3′―OH；
③延伸（extension），即在适当的温度（70℃～75℃）下，DNA聚合酶从特异性结合到DNA模板上的引物3′-OH端开始，根据碱基互补配对原则，按照待扩增区域的核苷酸序列，进行DNA链的延伸，即合成新的DNA分子。这三个过程组成一个循环周期；每个周期合成的产物又可作为下一个周期的模板，如此循环往复，经过n轮循环后，靶DNA的拷贝数理论上呈2n增长。
影响PCR反应的因素主要有：引物、TaqDNA聚合酶、dNTP、模板和Mg2+离子，此外，pH、温度、循环次数也会影响PCR反应。解析： 暂无解析 -
第12题：
问答题简述PCR技术的基本原理。正确答案： P.CR技术的基本原理：类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：1）模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；
2）模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；3）引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。（Plateau）。到达平台期所需循环次数取决于样品中模板的拷贝。解析： 暂无解析 -
第13题：
简述PCR基本原理。
本题答案：PCR技术是模拟生物体内DNA的半保留复制，在体外合成DNA链的方法，在模板、DNA、引物、dNTP、Taq酶存在的条件下经过：
“高温变性→低温退火→中温延伸”三步循环，获得大量扩增片段。
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第14题：
PCR聚合酶链式反应体系的基本成分由耐热的DNA聚合酶、引物、 dNTP、 Mg2+、缓冲液、模板组成。
正确答案:正确 -
第15题：
简述PCR原理及其基本反应步骤。
正确答案:PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：
①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；
②模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；
③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板互补的DNA链。 -
第16题：
简述PCR技术的基本原理？
正确答案: PCR反应以待扩增DNA或RNA片段为模板，根据5’和3’端核苷酸顺序合成一对与之互补的寡核苷酸引物，将模板DNA经高温变性，低温退火，中温延伸，并在DNA聚合酶作用下，以四种单核苷酸为原料，单链DNA为模板逐步延伸，合成新链。这样每经过一个循环，DNA拷贝增加一倍，而进行25~35个循环，DNA得以快速扩增，可用于获取目的基因以及检测分析特定的基因缺失、重复、点突变等 -
第17题：
PCR的基本原理是什么？用PCR扩增某一基因，必须预先得到什么样的信息？
正确答案: （1）DNA半保留复制的原理，在体外进行DNA的变性、复性和引物延伸。
（2）至少要预先知道足够合成一对引物的靶DNA序列。 -
第18题：
简述PCR的原理及其应用。
正确答案:PCR技术是模拟体内条件下，应用DNA聚合酶反应特异性扩增某一DNA片段的技术。它根据待扩增区域两端已知序列合成两个与模板DNA互补的核苷酸引物，这一单链引物的序列决定了待扩增片段的特异性和片段长度，当有模板DNA存在时，引物便可在一定的复性温度下特异地与热变性形成单链的DNA模板互补形成“退火”。当有DNA聚合酶和dNTP存在时，便可在一定条件下，按5（→3（方向从引物端合成DNA链，从而可以产生倍增的DNA片段，当经过30～35个周期后便可产生100万倍以上的所需DNA片段。由于PCR扩增技术的快速、简便、准确、可靠，因此，该技术已广泛应用于遗传病的基因诊断，病原体的检测，肿瘤的DNA诊断，法医学亲权鉴定，性别鉴定以及在DNA水平上研究生物进化等。 -
第19题：
简述PCR及其临床应用。
正确答案:聚合酶链反应（PCR）：利用DNA聚合酶（如TagDNA聚合酶）等在体外条件下，催化一对引物间的特异DNA片段合成的基因体外扩增技术。引物：单链DNA片段。过程：变性DNA双链-单链（93～98℃），退火引物与模板结合（37～65℃），延伸双链合成（70～75℃）。常见PCR技术的类型：原位PCR、逆转录PCR（RT-PCR）及定量RT-PCR、反向PCR、PCR-SSCP、PCR-ELISA.固相锚定PCR、mRNA差异显示逆转录PCR。PCR的应用：（1）在感染性疾病中的应用：对传染性疾病进行病原学确证诊断；对病原体进行基因分型和同源性比较；克隆病原体各种蛋白质的基因，用于蛋白表达，制备诊断试剂或疫苗；发现新病原体；克隆病原体各种基因，建立基因表达载体，用于基因治疗。（2）遗传性疾病的基因诊断：发现的遗传病有4000多种；产前诊断PCR-RFLP；PCR-ASO。（3）肿瘤的研究及诊断：癌基因与抑癌基因。（4）在法医学中的应用：个人认识；亲子鉴定。（5）其他应用：DNA克隆；引入点突变、缺失或插入；重组PCR；DNA测序；示差PCR。 -
第20题：
问答题PCR技术的基本原理正确答案： 该技术是在模板DNA、引物和四种脱氧核糖核苷酸存在下，依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应。
DNA聚合酶以单链DNA为模板，借助一小段双链DNA来启动合成，通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链DNA模板中的一段互补序列结合，形成部分双链。
在适宜的温度和环境下，DNA聚合酶将脱氧单核苷酸加到引物3´-OH末端，并以此为起始点，沿模板5´→3´方向延伸，合成一条新的DNA互补链解析： 暂无解析 -
第21题：
问答题简述PCR基本原理。正确答案： PCR技术是模拟生物体内DNA的半保留复制，在体外合成DNA链的方法，在模板、DNA、引物、dNTP、Taq酶存在的条件下经过：
“高温变性→低温退火→中温延伸”三步循环，获得大量扩增片段。解析： 暂无解析 -
第22题：
问答题说明PCR反应的基本原理并列举几种特殊的PCR方法。正确答案： PCR是一种模拟天然DNA复制过程，在有DNA模板、DNA聚合酶（常用TaqDNA聚合酶）、引物和4种dNTP的情况下，通过高温变性一低温退火一中温延伸这样反复循环的过程，在体外扩增特异性DNA片段的分子生物学技术。
特殊的PCR方法有：锚式PCR，可以用来快速分离cDNA末端（RACE）；反向PCR，可扩增引物外侧的DNA片段，对已知DNA片段两侧的未知序列进行扩增和研究；多重PCR，，在同一反应中采用多对引物同时扩增几个不同的DNA片段，如果基因某一区段缺失，则相应的电泳图谱上此区段PCR扩增产物长度减少或消失，从而发现基因异常；反转录PCR，先将mRNA反转录成cDNA，然后再以cDNA为模板，用PCR方法加以扩增。其他还有PCR，荧光PCR等。解析： 暂无解析 -
第23题：
问答题简述PCR循环测序的基本原理。正确答案： PCR技术能够快速、特异性地扩增靶DNA，应用PCR技术测定DNA序列分为两个步骤：先利用PCR扩增靶序列片段，制备测序模板，然后再利用PCR直接测定序列。PCR测序采用了热循环高效合成DNA的特性并结合双脱氧核苷酸终止法，使引物链终止的延伸产物数量在热循环过程中得到增加，因此称为循环测序。
每个测序循环包括：
①PCR扩增制备的模板DNA变性成单链形式；
②标记引物与其中的一条链上的互补序列退火；
③退火后的引物在耐热DNA聚合酶催化下发生链延伸终止反应。
本次循环产生的模板链与延伸终止链形成的双链的产物，在下一轮测序循环中，再次被变性，释放出模板链，作为又一轮引发反应的模板，同时积累下一轮循环产生的链终止产物。
上述循环步骤重复20~40次，使链终止产物以线性方式获得扩增。解析： 暂无解析