离子交换层析的基木原理及一般操作

第1题：

第2题：

第3题：

离子交换层析的基木原理及一般操作

正确答案:原理：基于各种带电荷物质与交换剂的亲和力差异，即物质的电荷性、极性、与离子交换基团的交换能力差异，通过控制条件将它们分离。
一般操作：离子交换剂的带电基团吸附溶液中相反电荷的物质，被吸附的物质随后与带相同类电荷的其他离子所置换而洗脱。

第4题：

简述离子交换层析技术及其工作原理。

正确答案:离子交换层析技术是以离子交换纤维素或以离子交换葡聚糖凝胶为固定相，以蛋白质等样品为移动相，分离和提纯蛋白质、核酸、酶、激素和多糖等的一项技术。
原理：利用物质的电荷和层析载体的电荷间的相互作用，进而达到分离纯化的目的。

第5题：

简述凝胶层析、亲和层析、离子交换层析的原理和操作要点？

正确答案:离子交换层析原理：根据待分离物质带电性质不同的分离纯化方法。
操作：a上样：上样体积不十分严格。b洗脱：增加溶液的离子强度c梯度洗脱法：改变溶液的pHd再生：用0.5mol/LNaOH和0.5mol/LNaCl混合溶液或0.5mol/LHCl处理。凝胶层析原理：利用某些凝胶对于不同分子大小的组分阻滞作用的不同。大分子物质不能进入凝胶孔内，在凝胶颗粒之间的空隙向下移动，并最先被洗脱出来；小分子物质可自由出入凝胶孔，流程长而后流出层析柱。
操作：a凝胶的选择和处理，根据相对分子质量范围选择相应型号的凝胶介质。将干胶悬浮于5-10倍的蒸馏水中，充分溶胀，抽气，装柱。b柱的选择：采用L/D比值高的柱子，可提高分辨率，但影响流速。c加样：体积不能过多，不超过凝胶床体积的5％，脱盐时可在10％左右。d洗脱：洗脱液与平衡时用的buffer一致。洗速不可过快，保持恒速。e胶的保存：洗脱完毕后，凝胶柱已恢复到上柱前的状态，不必再生处理。
亲和层析原理：利用生物大分子间特异的亲和力来纯化生物大分子.体通过适当的化学反应共价的连接到载体上，待纯化的物质可被配体吸附，杂质则不被吸附，从层析柱流出，变换洗脱条件，即可将分离的物质洗脱下来，实现分离提纯。

第6题：

离子交换层析的原理是什么？

正确答案:离子交换层析的原理：样品中待分离的溶质离子，与固定相上所结合的离子交换，不同的溶质离子与离子交换剂上离子化的基团的亲和力和结合条件不同，洗脱液流过时，样品中的离子按结合力的弱强先后洗脱，达到分离的目的。 
蛋白质是由氨基酸聚合形成的聚合物，所以蛋白质也存在等电点（pI），蛋白质在溶液中带电状况同氨基酸相同，取决于所处溶液的pH 值。当pIpH时，蛋白质带净正电荷。阴离子交换剂本身带正电荷，阳离子交换剂本身带负电荷，因此蛋白质可以用阳离子交换剂或阴离子交换剂进行离子交换层析。

第7题：

简述离子交换层析分离氨基酸的原理。

正确答案:离子交换层析（Ion Exchange Chromatography简称为IEC）是以离子交换剂为固定相，依据流动相中的组分离子与交换剂上的平衡离子进行可逆交换时的结合力大小的差别而进行分离的一种层析方法。
依据的原理是物质的酸碱性、极性，也就是所带阴阳离子的不同.电荷不同的物质，对管柱上的离子交换剂有不同的亲和力，改变冲洗液的离子强度和pH值，物质就能依次从层析柱中分离出来。离子交换层析法大致分为5个步骤：1.离子扩散到树脂表面.2.离子通过树脂扩散到交换位置.3.在交换位置进行离子交换4.被交换的离子扩散到树脂表面5.冲洗液通过，被交换的离子扩散到外部溶液中。

第8题：

第9题：

第10题：

第11题：

第12题：

第13题：

第14题：

中药的薄层色谱法，按其原理可分为（）。

A吸附层析

B交换层析

C分配层析

D配置层析

E离子交换

A,C,E
薄层色谱法的分类
一、吸附薄层色谱法
二、分配薄层色谱法
三、离子交换薄层色谱法
四、分子排阻薄层色谱法

第15题：

下列利用分子筛原理的技术是（）

• A、凝胶过滤
• B、凝胶电泳
• C、阳离子交换层析
• D、阴离子交换层析
• E、透析

正确答案:A

第16题：

离子交换层析操作前，离子交换剂往往需要进行前处理，请简述其处理步骤。

正确答案: 离子交换剂的处理步骤包括
膨化：将干粉在水中充分溶胀，以使离子交换剂颗粒的孔隙增大，具有交换活性的配基充分暴露出来。
水悬浮：去除杂质和细小颗粒
酸碱浸泡：进一步去除杂质，并使离子交换剂带上需要的平衡离子，一般阳离子交换剂最后用碱NaOH处理，阴离子交换剂最后用酸HCl处理。

第17题：

简述凝胶层析、亲和层析、离子交换层析的原理和操作要点？离子交换层析原理：根据待分离物质带电性质

正确答案:不同的分离纯化方法。
操作：a上样：上样体积不十分严格。
b洗脱：增加溶液的离子强度
c梯度洗脱法：改变溶液的pH
d再生：用0.5mol/LNaOH和0.5mol/LNaCl混合溶液或0.5mol/LHCl处理。
凝胶层析原理：利用某些凝胶对于不同分子大小的组分阻滞作用的不同。大分子物质不能进入凝胶孔内，在凝胶颗粒之间的空隙向下移动，并最先被洗脱出来；小分子物质可自由出入凝胶孔，流程长而后流出层析柱。
操作：
a凝胶的选择和处理，根据相对分子质量范围选择相应型号的凝胶介质。将干胶悬浮于5-10倍的蒸馏水中，充分溶胀，抽气，装柱。
b柱的选择：采用L/D比值高的柱子，可提高分辨率，但影响流速。
c加样：体积不能过多，不超过凝胶床体积的5％，脱盐时可在10％左右。
d洗脱：洗脱液与平衡时用的buffer一致。洗速不可过快，保持恒速。e胶的保存：洗脱完毕后，凝胶柱已恢复到上柱前的状态，不必再生处理。
亲和层析原理：利用生物大分子间特异的亲和力来纯化生物大分子.体通过适当的化学反应共价的连接到载体上，待纯化的物质可被配体吸附，杂质则不被吸附，从层析柱流出，变换洗脱条件，即可将分离的物质洗脱下来，实现分离提纯。

第18题：

简述纸层析法测定食品中胡萝卜素原理及操作步骤。

正确答案:样品经过皂化后，用石油醚提取食品中的胡萝卜素及其他植物色素，以石油醚为展开剂进行纸层析，胡萝卜素极性极小，移动速度最快。
操作步骤：避光。样品处理：皂化：加脱醛乙醇、氢氧化钾溶液，回流30min，然后迅速冷却。样品用石油醚提取至无色。洗涤：将皂化后的样品提取液用水洗涤无色。将提取液盛有无水硫酸钠的小漏斗，漏入球形瓶，用少林石油醚洗净分液漏斗和无水硫酸钠层的色素，并如球形瓶内。浓缩与定溶：在蒸发器上减压近干，再氮气吹干，加石油醚定溶。纸层析：点样：取浓缩液在滤纸下点样。展开，置于饱和石油醚层析缸中。洗脱。测定：在450nm测定。

第19题：

第20题：

第21题：

第22题：

第23题：

第24题：