获得动物目的基因的方法有哪些？
题目
获得动物目的基因的方法有哪些？
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第1题：
获得目的基因的手段有哪些？并简述其工作原理.
正确答案: 目的基因的获取方法有：从基因文库中提取目的基因，使用PCR扩增技术获得目的基因，人工合成。
①从基因文库中获取：用限制性内切酶直接获取
②鸟枪法：用限制酶将供体细胞中的DNA切成许多片段，将这些片段分别载入运载体，然后通过运载体分别转入不同的受体细胞，让供体细胞所提供的DNA（外源DNA）的所有片段分别在各个受体细胞中大量复制（在遗传学中叫做扩增），从中找出含有目的基因的细胞，再用一定的方法把带有目的基因的DNA片段分离出来。
③mRNA逆转录成DNA，“RT-PCR法”
真核生物的基因含有不表达的内含子，而有时内含子序列很长，因此这种基因难以和载体DNA结合。这种方法是将含有目的基因的mRNA提取出来，然后以mRNA为模板用，用逆转录酶合成cDNA，利用特异性引物PCR钓取目的基因，最后测序验证。
④人工合成：根据已知氨基酸序列合成DNA
根据基因表达产物的氨基酸顺序，搞清楚基因的核苷酸序列，然后先合成一个个含少量核苷酸的DNA片段，再利用碱基对互补关系使它们形成双链DNA片段，再用连接酶把小的双链DNA片段逐个按顺序连接起来，使双链逐渐加长，最后得到一个完整基因。 -
第2题：
目的基因克隆的基本方法有哪些？
正确答案: （1）直接从染色体DNA中分离：
仅适用于原核生物、叶绿体和线粒体基因的分离，较少采用。
（2）人工合成：
根据已知多肽链的氨基酸顺序，利用遗传密码表推定其核苷酸顺序再进行人工合成。适应于编码小分子多肽的基因。
（3）从mRNA合成cDNA：
采用一定的方法钓取特定基因的mRNA，再通过逆转录酶催化合成其互补DNA（cDNA），除去RNA链后，再用DNA聚合酶合成其互补DNA链，从而得到双链DNA。这一方法通常可得到可表达的完整基因。
（4）利用PCR合成：
如已知目的基因两端的序列，则可采用聚合酶链反应（polymerase chainreaction，PCR）技术，在体外合成目的基因。
（5）从基因文库中筛选：
首先建立基因组或cDNA文库，利用探针从文库中筛选目的克隆。 -
第3题：
常用的目的基因的获取方法有哪些？
正确答案: 制备基因组文库、构建cDNA文库、PCR扩增目的基因、人工合成DNA技术 -
第4题：
连接目的基因与载体的方法有哪些？
正确答案:亚克隆、黏性末端连接、平端连接、人工接头连接、同聚物加尾连接等。 -
第5题：
根据遗传基因调控原理，采用近交方法，使动物基因纯化而获得的遗传基因高度均一的实验动物是（）。
- A、封闭群动物
- B、基因纯化动物
- C、近交系动物
- D、远交系动物
正确答案:C -
第6题：
目的基因获取的方法有哪些？
正确答案: 直接获取
1.从基因文库中获取这个没什么就是现成的基因储存在受体菌上你用的时候提取出来就好了（用限制性内切酶直接获取。）
2.cDNA文库法（逆转录法）。
3.直接分离基因最常用的方法是“鸟枪法”，又叫“散弹射击法”。
人工合成
1.（主要是序列已知的基因）。通过DNA自动合成仪，通过固相亚磷酸酰胺法合成，按照已知序列将核苷酸一个一个连接上去成为核苷酸序列，一般适于分子较小而不易获得的基因。对于大的基因一般是先用化学合成法合成引物，再利用引物获得目的基因。
2.聚合酶链反应 -
第7题：
目前常用的获得目的基因的方法有（）、（）、（）
正确答案:鸟枪法；cDNA法；人工合成 -
第8题：
填空题目前常用的获得目的基因的方法有（）、（）、（）正确答案： 鸟枪法,cDNA法,人工合成解析： 暂无解析 -
第9题：
问答题获得目的基因的方法有哪些？正确答案： 获得目的基因的方法有：鸟枪法（shotgun）；物理化学法（密度梯度离心法、单链酶法、分子杂交法）；化学合成法；酶促逆转录合成法；PCR扩增法。解析： 暂无解析 -
第10题：
问答题常用的转基因动物的方法有哪些？正确答案： 显微注射法、逆转录病毒法、胚胎干细胞法。其中以显微注射法可转录的外援基因的容量最大。解析： 暂无解析 -
第11题：
问答题什么是目的基因？获得目的基因的途径有哪些?正确答案： 目的基因（objectgenE.，靶基因（targetgenE.根据基因工程的目的和设计所需要的某些DNA分子片段。直接分离法、PCR扩增、构建基因组文库法、构建cDNA文库法、化学合成法。解析： 暂无解析 -
第12题：
问答题获得转基因哺乳动物细胞的方法有哪些？正确答案： ①借助于载体的基因转移；
②不需载体的基因转移，如显微注射法、Ca3（PO4）2介导的DNA导入、电击法、脂质体介导的基因转移、染色体介导的基因转移、血影细胞介导的基因转移等。解析： 暂无解析 -
第13题：
动物转基因常用的外源基因导入方法有哪些？各有何优缺点？
正确答案: 显微注射法：优点：准确、快捷。缺点：成本很高。
体细胞核移植方法：优点：经济、有效。缺点：耗时。 -
第14题：
常用的目的基因与载体的连接方法有哪些？
正确答案: 外源DNA片段同载体分子连接的方法，即DNA分子体外重组技术，主要是依赖于核酸内切限制酶和DNA连接酶的作用.一般说来在选择外源DNA同载体分子连接反应程序时，需要考虑到下列三个因素：
（1）实验步骤要尽可能地简单易行；
（2）连接形成的"接点”序列，应能被一定的核酸内切限制酶重新切割，以便回收插入的外源DNA片段；
（3）对转录和转译过程中密码结构的阅读不发生干扰。 -
第15题：
生产转基因动物的常用方法有哪些？各有何优缺点？
正确答案:六种方法：
（1）原核期胚胎的显微注射技术，优点：有外源基因长度不受限制，可直接用不含原核载体DNA片段的外源基因进行转移；实验周期相对较短。缺点：大动物原核胚的胚胎胞质中含有大量的泡状颗粒，影响其透光性，且显微操作技术含量较高，需要特殊的仪器并可能在注射过程中对胚胎造成损伤等；外源基因能否整合到受体基因组中，要等到子一代出生后经过选择才能确定，这对生育周期长，产仔少的大动物来说，效率就很低，而且整合位点随机，易造成宿主基因组内生命活动所必需的基因失活和导致胚胎或动物死亡；整合一般是指多拷贝首尾串联相接，不利于研究基因结构、功能及表达调控。
（2）反转录病毒技术，优点：感染率高，易转染，操作简单，而且多数为单拷贝，并可稳定的整合到可识别插入位点。缺点：反转录病毒作为载体，其插入的外源基因最大不能超过10KB，并且容易产生嵌合体。另外，插入的外干扰源基因容易丢失，反转录病毒本身的DNA序列也会干扰外源基因的表达。还有反转录病毒在安全方面仍存在问题。
（3）慢病毒载体技术，优点：高效的转染率和转基因的高表达。缺点：插入外源基因需小于8.5kb和插入突变，经传代整合后所得原病毒DNA易发生甲基化，影响外源基因表达。
（4）精子载体技术，优点：简单易行，直接可以用精子作为外源DNA载体进行基因转移。可以对大量的精子细胞进行处理，不损伤卵母细胞，在短时间内生产转基因胚胎，而且整合率高，成本低。缺点：结果不稳定，有的外源DNA并未整合到宿主的基因组中，而是以附加体的形式存在于染色体之外，由于存在于正常的细胞有丝分裂中，附加体丢失的概率很高。
（5）体细胞核移植转基因技术，优点：动物转基因效率大幅提高，体细胞克隆技术可将基因整合和生产胚胎分开操作，有利于使用基因打靶技术。缺点：克隆技术的效率有待提高。
（6）胚胎干细胞介导技术，优点：可以将外源基因整合到细胞的染色体组中，然后把这些干细胞经过筛选，找到理想的干细胞，大大减少了整合突变率，还可以消除随机整合产生的位置效应的影响。 -
第16题：
获得目的基因的方法有哪些？
正确答案:获得目的基因的方法有：鸟枪法（shotgun）；物理化学法（密度梯度离心法、单链酶法、分子杂交法）；化学合成法；酶促逆转录合成法；PCR扩增法。 -
第17题：
何谓目的基因？获得目的基因有何种方法？
正确答案: 目的基因：在基因工程设计和操作中，被用于基因重组、改变受体细胞性状和获得预期表达产物的基因。
获取方法：①利用限制性内切核酶酶切法直接分离目的基因；②利用PCR直接扩增目的基因；③化学合成；④通过构建基因组文库或cDNA文库分离目的基因 -
第18题：
目前常用的获得目的基因的方法有（）、（）和（）。
正确答案:鸟枪法；cDNA法；人工合成 -
第19题：
转基因动物的筛选方法有哪些？
正确答案: 转基因动物的筛选方法主要有PCR法、Southern杂交法、荧光原位杂交法和表型观察法。 -
第20题：
问答题基因克隆过程中，获得目的基因的途径有哪些？正确答案： （1）从基因组文库（genomic library）中获得；
（2）从cDNA文库中获得；
（3）PCR扩增特定基因；
（4）人工合成。解析： 暂无解析 -
第21题：
问答题转基因动物检测的方法有哪些？正确答案： 转基因动物产生后，需通过不同水平检测基因的整合、表达等诸多生物学指标。
（1）DNA水平的检测。
a.基因组DNA的提取。
b.基因组PCR的检测。
c.基因组DNA的分子杂交。
d.染色体原位杂交。
（2）RNA水平的检测。
a.Northern-blotting。
b.Rnass保护法分析。
c.逆转录—聚合酶链反应（RT—PCR）。
（3）蛋白质水平的检测。
a.ELISA方法。
b.放射免疫方法。
c.Western印迹法。解析： 暂无解析 -
第22题：
填空题目前常用的获得目的基因的方法有（）、（）和（）。正确答案： 鸟枪法,cDNA法,人工合成解析： 暂无解析 -
第23题：
问答题获得动物目的基因的方法有哪些？正确答案： ①cDNA方法；
②DNA的化学合成；
③利用PCR法获得基因，除了用到普通PCR法外，还要用到逆转录PCR、锚定PCR和反向PCR。解析： 暂无解析