PCR克隆目的基因的基本程序是什么？

题目

PCR克隆目的基因的基本程序是什么？

相似考题

1.（3）为建设基因工程菌，可用PCR等技术从上述菌株中克隆植酸酶基因。PCR反应包含多次循环，每次循环包括三步：____________ 。反应过程中打开模板DNA双链的方法是 ___________ 。

2.重组DNA技术的基本步骤包括A、选择载体和获取目的基因B、目的基因与载体酶切后连接C、重组DNA导入受体细胞D、筛选阳性克隆E、分、切、接、转、筛

3.在分子克隆中，目的DNA可来自A．原核细胞基因组DNAB．真核细胞基因组DNAC．PCR合成的DNAD．真核细胞mRNA反转录获得的cDNA

4.温度均一性较好的PCR仪为A、水浴锅PCR基因扩增仪和压缩机PCR基因扩增仪B、半导体PCR基因扩增仪和离心式空气加热PCR基因扩增仪C、压缩机PCR基因扩增仪和半导体PCR基因扩增仪D、压缩机PCR基因扩增仪和离心式空气加热PCR基因扩增仪E、水浴锅PCR基因扩增仪和离心式空气加热PCR基因扩增仪

更多“PCR克隆目的基因的基本程序是什么？”相关问题

  • 第1题：

    在分子克隆中，目的DNA可来自
    A.原核细胞基因组B.真核细胞基因组DNA
    C. PCR合成的DNA D.真核细胞mRNA反转录获得的cDNA


    答案：A,B,C,D
    解析：
    应用重组技术有时是为了分离、获得某一感兴趣的基因或目的DNA序列，或是为了获得 感兴趣的表达产物蛋白质.这些感兴趣的基因或DNA序列就是目的DNA。目的的获取有以下几 种途径：①化学合成法：如已知某种基因的核苷酸序列,可利用合成仪通过化学合成原理合成目的 DNA。②基因组DNA：包括原核生物基因组DNA和真核生物基因组DNA。③应用PCR合成DNA。④ cDNA：以mRNA为模板,利用反转录酶合成与mRNA.互补的DNA(cDNA)。

  • 第2题：

    重组DNA基本过程包括


    A.目的基因的获取
    B.克隆载体的构建
    C.目的基因与载体的拼接
    D.重组分子导入受体菌

    答案：A,B,C,D
    解析：

  • 第3题：

    小鼠杂交瘤细胞表达的单克隆抗体用于人体试验时易引起过敏反应，为了克服这个缺陷，可选择性扩增抗体的可变区基因（目的基因）后再重组表达。下列相关叙述正确的是（）

    • A、设计扩增目的基因的引物时不必考虑表达载体的序列
    • B、用PCR方法扩增目的基因时不必知道基因的全部序列
    • C、PCR体系中一定要添加从受体细胞中提取的DNA聚合酶
    • D、一定要根据目的基因编码产物的特性选择合适的受体细胞

    正确答案:B,D

  • 第4题：

    什么是PCR技术？PCR的基本原理是什么？


    正确答案:PCR即聚合酶链式反应，是一种在体外快速扩增特定目的基因或DNA序列的技术，故又称基因的体外扩增技术。它可以在试管中建立反应，经过数小时之后，就能将极微量的目的基因或DNA片断扩增数十万乃至千百万倍，无需经过繁琐费时的基因克隆程序，便可获得足够数到两精确的DNA拷贝。
    PCR的基本工作原理：以拟扩增的DNA分子为模板，以一对分别与模板5’末端和3’末端相互补的寡核苷酸片段为引物，在DNA聚合酶的作用下，按照半保留复制的机制沿着模板链延伸直至完成新的DNA合成，重复这一过程，即可使目的DNA片段得到扩增。

  • 第5题：

    基因敲除的基本程序是什么？


    正确答案: 通过DNA同源重组，使得胚胎干细胞特定的内源基因被破坏而造成功能丧失，然后通过胚胎干细胞介导得到该基因丧失的小鼠模型的过程称为基因敲除。
    1、打靶载体的构建：同源序列要足够长，要含有筛选用的标志基因。
    2、胚胎干细胞的体外培养
    3、打靶载体导入胚胎干细胞
    4、同源重组胚胎干细胞的筛选
    5、基因敲除胚胎干细胞注射入胚泡
    6、胚泡植入假孕小鼠的子宫中
    7、杂交育种获得纯合的基因敲除动物

  • 第6题：

    根据mRNA的信息推出获取目的基因的方法是（）

    • A、用DNA探针测出目的基因
    • B、用mRNA探针测出目的基因
    • C、用mRNA反转录形成目的基因
    • D、用PCR技术扩增mRNA

    正确答案:C

  • 第7题：

    下列哪项不是分子克隆的主要步骤（）

    • A、目的基因的表达
    • B、基因文库的建立
    • C、目的基因的筛选
    • D、目的基因的分析

    正确答案:A

  • 第8题：

    PCR原理是什么？其基本步骤如何？解释各步骤的目的。


    正确答案:类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。
    PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：
    ①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；
    ②模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；
    ③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链；重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”。

  • 第9题：

    概述基因克隆的基本步骤。


    正确答案: 基因克隆的基本步骤有：
    ①用相互配套的1～2种限制酶切割含目的基因的DNA和载体DNA（切）；
    ②连接目的基因和载体DNA得到重组载体（接）；
    ③将重组载体导入宿主细胞（转），若使用的是质粒载体，称转化，噬菌体载体称转导，病毒载体称转染；
    ④将经过转化（或转导，转染）的细菌或细胞稀释，在加有选择性培养基的平皿培养基或细胞培养板上培养，选择含目的基因的阳性克隆，并用其它方法进一步鉴定（筛）；
    ⑤扩大培养选出的阳性克隆（扩）。随后可分离目的基因，或在一定的条件下表达目的基因。

  • 第10题：

    在基因克隆中，目的基因有哪些主要来源？


    正确答案:（1）从染色体DNA中直接分离：主要针对原核生物。
    （2）化学合成法：由已知多肽的氨基酸序列，推得编码这些氨基酸的核苷酸序列，利用DNA合成仪人工合成其基因。
    （3）从基因组DNA文库中筛选分离组织/细胞染色体DNA：利用限制性核酸内切酶将染色体DNA切割成片段，与适当的克隆载体连接后转入受体菌扩增，即获得基因组DNA文库，用核酸探针将所需目的基因从基因文库中“钓”取出来。
    （4）从文库中筛选cDNA：提取mRNA，利用反转录酶合成与其互补的DNA（cDNA）分子，再复制成双链cDNA片段，与适当载体连接后转入受体菌，即获得cDNA文库，然后采用适当方法从cDNA文库中筛选出目的cDNA。
    （5）用PCR从基因组DNA或cDNA中扩增目的基因。

  • 第11题：

    单选题
    温度均一性较好的PCR仪为（）。
    A

    水浴锅PCR基因扩增仪和压缩机PCR基因扩增仪

    B

    半导体PCR基因扩增仪和离心式空气加热PCR基因扩增仪

    C

    压缩机PCR基因扩增仪和半导体PCR基因扩增仪

    D

    压缩机PCR基因扩增仪和离心式空气加热PCR基因扩增仪

    E

    水浴锅PCR基因扩增仪和离心式空气加热PCR基因扩增仪


    正确答案： A
    解析： 暂无解析

  • 第12题：

    问答题
    基因克隆过程中，获得目的基因的途径有哪些？

    正确答案： （1）从基因组文库（genomic library）中获得；
    （2）从cDNA文库中获得；
    （3）PCR扩增特定基因；
    （4）人工合成。
    解析： 暂无解析

  • 第13题：

    PCR及其衍生技术主要应用于

    A.基因的体外突变
    B.目的基因克隆
    C. DNA序列分析
    D.基因表达检测

    答案：A,B,C,D
    解析：
    生化P408。PCR技术的主要用途有：目的基因克隆、基因的体外突变、DNA和 RNA的微量分析、DNA序列测定和基因突变分析等。

  • 第14题：

    简述PCR及扩增基因的基本过程。


    正确答案:P.CR扩增基因的基本过程类似于体内细胞分裂中的半保留复制：
    1.高温变性加热使DNA解链成两股单链（变性）。
    2.低温退火降温使这两股单链按碱基互补的原则分别与引物结合（引物是人工合成的寡核苷酸，一般约15－25个碱基）。
    3.中温延伸在DNA聚合酶的作用下，使游离的单核苷酸沿着引物的3’端，按碱基配对的原则延伸，形成两条与模板DNA互补的新链。
    重复上述过程，经过25-35个循环，可使所需基因放大几百万倍。

  • 第15题：

    基因克隆过程中，获得目的基因的途径有哪些？


    正确答案: （1）从基因组文库（genomic library）中获得；
    （2）从cDNA文库中获得；
    （3）PCR扩增特定基因；
    （4）人工合成。

  • 第16题：

    能检测目的基因片段缺失的PCR方式为（）。

    • A、筑巢PCR
    • B、多重PCR
    • C、原位PCR
    • D、不对称PCR
    • E、反向PCR

    正确答案:B

  • 第17题：

    获得目的基因的方法有（）

    • A、从基因文库中获得目的基因
    • B、通过反转录获得cDNA
    • C、PCR获得
    • D、人工化学合成
    • E、改造旧基因

    正确答案:A,B,C,D,E

  • 第18题：

    获得目的基因的一种战略是从基因文库中筛选，下列程序中用于创建基因文库的是（）。

    • A、PCR法与化学合成法
    • B、逆转录法和PCR法
    • C、鸟枪法和逆转录法
    • D、化学合成法和鸟枪法

    正确答案:C

  • 第19题：

    目的基因克隆的基本方法有哪些？


    正确答案: （1）直接从染色体DNA中分离：
    仅适用于原核生物、叶绿体和线粒体基因的分离，较少采用。
    （2）人工合成：
    根据已知多肽链的氨基酸顺序，利用遗传密码表推定其核苷酸顺序再进行人工合成。适应于编码小分子多肽的基因。
    （3）从mRNA合成cDNA：
    采用一定的方法钓取特定基因的mRNA，再通过逆转录酶催化合成其互补DNA（cDNA），除去RNA链后，再用DNA聚合酶合成其互补DNA链，从而得到双链DNA。这一方法通常可得到可表达的完整基因。
    （4）利用PCR合成：
    如已知目的基因两端的序列，则可采用聚合酶链反应（polymerase chainreaction，PCR）技术，在体外合成目的基因。
    （5）从基因文库中筛选：
    首先建立基因组或cDNA文库，利用探针从文库中筛选目的克隆。

  • 第20题：

    PCR的基本原理是什么？用PCR扩增某一基因，必须预先得到什么样的信息？


    正确答案: （1）DNA半保留复制的原理，在体外进行DNA的变性、复性和引物延伸。
    （2）至少要预先知道足够合成一对引物的靶DNA序列。

  • 第21题：

    基因克隆中目的基因的来源可以是（）。

    • A、从基因组文库中获得
    • B、从cDNA文库中获得
    • C、PCR扩增
    • D、人工合成
    • E、细胞DNA

    正确答案:A,B,C,D,E

  • 第22题：

    问答题
    PCR 的基本原理是什么？用 PCR扩增某一基因，必须预先得到什么样的信息？

    正确答案： （1）DNA半保留复制的原理，在体外进行 DNA的变性、复性和引物延伸。
    （2）至少要预先知道足够合成一对引物的靶 DNA序列。
    解析： 暂无解析

  • 第23题：

    单选题
    下列哪项不是分子克隆的主要步骤（）
    A

    目的基因的表达

    B

    基因文库的建立

    C

    目的基因的筛选

    D

    目的基因的分析


    正确答案： B
    解析： 暂无解析

相关内容