测定DNA序列的双脱氧末端终法是Sanger发明的

第1题：

第2题：

简述链末端终止法测定DNA序列的原理。

正确答案:利用DNA聚合酶，以待测单链DNA为模板，以dNTP为底物，设立四种相互独立的测序反应体系，在每个反应体系中加入不同的双脱氧核苷三磷酸（dideoxyribonucleoside triphosphate，ddNTP）作为链延伸终止剂，在测序引物引导下，按照碱基配对原则，每个反应体系中合成一系列长短不一的引物延伸链，通过高分辨率的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，放射自显影检测后，从凝胶底部到顶部按5′→3′方向读出新合成链序列，由此推知待测模板链的序列。

第3题：

简述利用双脱氧末端终止法（Sanger法）测定DNA一级结构的原理与方法？

正确答案: 原理是采用核苷酸链终止剂—2，，3，-双脱氧核苷酸终止DNA的延长。由于它缺少形成3/5/磷酸二脂键所需要的3-OH，一旦参入到DNA链中，此DNA链就不能进一步延长。根据碱基配对原则，每当DNA聚合酶需要dNMP参入到正常延长的DNA链中时，就有两种可能性，一是参入ddNTP，结果导致脱氧核苷酸链延长的终止；二是参入dNTP，使DNA链仍可继续延长，直至参入下一个ddNTP。根据这一方法，就可得到一组以ddNTP结尾的长短不一的DNA片段。
方法是分成四组分别为ddAMP、ddGMP、ddCMP、ddTMP反应后，聚丙烯酰胺凝胶电泳按泳带可读出DNA序列。

第4题：

双脱氧合成终止法测DNA序列时，加A体系中所得到的DNA片段都是以哪个核苷酸结尾（）。

• A、A
• B、C
• C、G
• D、T
• E、U

正确答案:A

第5题：

双脱氧末端终止法DNA测序不需要（）。

• A、引物酶
• B、DNA聚合酶
• C、dNTP
• D、ddNTP

正确答案:A

第6题：

双脱氧末端终止法测定DNA序列是基于（）

• A、DNA的聚合反应
• B、DNA的连接反应
• C、DNA的降解反应
• D、特殊的DNA连接酶
• E、聚合单体2’和5’位的脱氧

正确答案:A

第7题：

双脱氧链末端终止法测序反应与普通体外合成DNA反应的主要区别是（）。

• A、DNA聚合酶不同
• B、dNTP的种类不同
• C、dNTP的浓度不同
• D、引物不同
• E、双脱氧链末端终止法测序反应体系中还需加入ddNTP

正确答案:E

第8题：

Sanger双脱氧链末端终止法

正确答案: 是检测DNA序列的一种方法。其原理是利用PCR，但反应体系中除了dNTP外，还有ddNTP。ddNTP可掺入到正在延伸的DNA链中，但不能同后续的dNTP形成磷酸二酯键，从而使正在延伸的DNA链在此终止。由于存在ddNTP与dNTP的竞争，生成的反应产物是一系列长度不同的多核苷酸片段。

第9题：

第10题：

第11题：

第12题：

第13题：

Sanger双脱氧链终止法采用DNA引物引导新生DNA的合成，采用的模板是（）

• A、单链DNA
• B、双链DNA
• C、单链RNA
• D、双链RNA
• E、蛋白质

正确答案:A,B

第14题：

有关化学降解法测序描述正确的是（）。

• A、借助于双脱氧末端终止法
• B、进行了DNA的延伸
• C、进行了碱基的特异修饰和化学降解
• D、序列上每个碱基都须标记
• E、电泳分离步骤可省略

正确答案:C

第15题：

下列哪些科学研究成果获得了诺贝尔奖？（）

• A、发现DNA双螺旋结构
• B、双脱氧DNA序列测定方法
• C、DNA聚合酶链式反应
• D、蛋白质N-末端测序方法

正确答案:A,B,C

第16题：

SANGER双脱氧链终止法的原理是什么？

正确答案: DNA链中核苷酸以3’，5’-磷酸二酯键连接，合成DNA所用的底物是2’-脱氧核苷三磷酸。2’，3’ddNTP与普通dNTP不同，它们在脱氧核糖的3’位置缺少一个羟基。在DNA聚合酶作用下通过三磷酸基团掺入到延伸的DNA链中，但由于没有3’羟基，不能同后续的dNTP形成磷酸二酯键，因此，正在延伸的DNA链不能继续延伸。在DNA合成反应混合物的4种普通dNTP中加入少量的一种ddNTP，链延伸将与偶然发生但却十分特异的链终止竞争，产物是一系列的核苷酸链，其长度取决于引物末端到出现过早链终止位置间的距离。在4组独立酶反应中分别采用4种不同的ddNTP，结果将产生4组寡核苷酸，它们将分别终止于模板链的A、C、G或T位置。

第17题：

简述Sanger双脱氧链终止法的基本原理。（聚丙烯酰胺凝胶电泳模式图）

正确答案: （1）核酸是依赖于模板在聚合酶的作用下由5’端到3’端聚合（DNA聚合酶参与了细菌修复DNA合成过程。）；
（2）可延伸的引物必须能提供游离的3’-OH末端，双脱氧核苷酸由于缺少游离的3’羟基末端，因此会终止聚合反应的进行。如果分别用4种双脱氧核苷酸终止反应，则会获得4组长度不同的DNA片段，通过比较所以的DNA片段的长度可以得知核苷酸的序列。

第18题：

有关双脱氧末端终止法序列分析描述正确的是（）。

• A、原理等同化学降解法
• B、在体外进行了DNA的合成
• C、引物标记是关键
• D、类似原理用于了DNA序列自动化分析
• E、得到特异的ddNTP末端片段是关键

正确答案:B,D,E

第19题：

在单纯以测定DNA序列为目的的全自动DNA测序仪中，广泛应用的原理是（）。

• A、Edman降解法
• B、双脱氧链末端终止法
• C、化学降解法
• D、氧化－还原法
• E、水解法

正确答案:B

第20题：

试说明双脱氧法测定DNA序列的原理和方法？

正确答案:原理：在体外合成DNA的同时，加入使链合成终止的试剂，与4种脱氧核苷酸按一定比例混合，参与DNA的体外合成，产生长短不一、具有特定末端的DNA片段，由于二脱氧核苷酸没有3’-OH，不能进一步延伸产生3’，5’-磷酸二酯键，合成反应就在此处停止。
方法：
（1）选取待测DNA的一条链为模板，用5’端标记的短引物与模板的3’端互补。
（2）将样品分为4等分，每份中添加4种脱氧核苷三磷酸和相应于其中一种的双脱氧核苷酸。
（3）加入DNA聚合酶引发DNA合成，由于双脱氧核苷酸与脱氧核苷酸的竞争作用，合成反应在双脱氧核苷酸掺入处终止，结果合成出一套长短不同的片段。
（4）将4组片段进行聚乙烯酰胺凝胶电泳分离，根据所得条带，读出待测DNA的碱基顺序。

第21题：

第22题：

第23题：

第24题：