13、碱裂解法提取质粒DNA的过程中，NaOH的作用是使细菌细胞裂解。

第1题：

第2题：

第3题：

目前使用较为广泛的质粒DNA小量提取的方法是（）

• A、牙签少量制备法
• B、小量一步提取法
• C、SDS裂解法
• D、碱裂解法
• E、煮沸裂解法

正确答案:D

第4题：

下列关于细菌质粒的叙述，正确的是（）

• A、所有的质粒都可以作为基因工程中的载体
• B、是独立于细菌拟核DNA之外的双链DNA分子，不与蛋白质结合
• C、质粒对侵入的宿主细胞都是无害的
• D、细菌质粒的复制过程都是在宿主细胞内独立进行的

正确答案:B

第5题：

碱裂解法制备质粒DNA的方法有哪些？

正确答案: （1）接种菌落于含抗生素的LB中，37℃剧烈振荡反应；
（2）培养液4℃12000rpm30min离心；
（3）重悬细菌于100μl冰预冷的溶液I（50mM葡萄糖25mMTris-HCL（pH8.0），10mMEDTAPh8.0）中剧烈振荡；（4）加200μl亲配制液溶液II（0.2MNaOH1%SDS），混合内容物，不要振荡，置冰上；
（5）加150μl冰预冷溶液III（5MKac60ml，冰乙酸11.5ml，水28.5ml），温和振荡10s置于阔步3-5min；
（6）40℃。12000rpm离心5min，转移上清；
（7）上清加等量酚；氯仿抽提，4℃，12000rpm离心2min，收集上清；
（8）加入2倍体积乙醇，振荡混合，室温放置2min；
（9）4℃，12000rpm，离心5min，弃上清；
（10）倒置离心管，倾干液体；
（11）1ml70%乙醇4℃洗涤沉淀，弃上清，空气中干燥10min；
（12）用500μl含无DNA酶的胰RNA酶（20μg/ml）的TE重新溶解核酸，振荡，贮于-20℃。

第6题：

碱裂解法提取质粒DNA的原理，分析影响试验结果的各种可能因素。

正确答案: 碱裂解法原理：在碱性条件下，双连DNA氢键断裂，结构破坏变性，环状超螺旋质粒不充分变性。在中性条件下变性质粒恢复原来构型，而线性大分子细菌DNA不能复性呈不溶物而经离心除去。
（各种可能因素是上一届的，具体其实大家可以根据那天师兄说的去写）
提取失败：
1）洗去双链时，将质粒DNA洗去；
2）破壁失败，质粒没析出；
3）加剂问题
电泳失败：1）电压太高
2）没加染色剂
3）胶穿孔
4）电泳时间过长

第7题：

关于碱解法分离质粒DNA，下面哪一种说法不正确？（）

• A、溶液I的作用是悬浮菌体
• B、溶液Ⅱ的作用是使DNA变性
• C、溶液Ⅲ的作用是使DNA复性
• D、质粒DNA分子小，所以没有变性，染色体变性后不能复性

正确答案:D

第8题：

第9题：

第10题：

第11题：

第12题：

第13题：

第14题：

有关煮沸裂解法提取质粒DNA的正确叙述是（）

• A、该法是一种条件比较温和的物理方法
• B、煮沸能完全灭活核酸内酶A
• C、不适用于大多数Ecoli菌株
• D、适用于HB101菌株
• E、适用于<15kb的质粒DNA制备

正确答案:E

第15题：

从细菌中分离质粒DNA的方法都包括的基本步骤是（）。

• A、培养细菌检测质粒
• B、培养细菌使质粒扩增
• C、收集和裂解细胞
• D、分离和纯化质粒DNA
• E、B+C+D

正确答案:E

第16题：

细菌以转化方式进行基因转移时有以下（）特性。

• A、大量供体细胞的基因被转移
• B、包含有F质粒参加
• C、可通过从供体细胞中提取DNA片段来完成

正确答案:C

第17题：

简述质粒DNA的分离提取方法。

正确答案: （1）选择性抽提法，（2）碱性SDS法

第18题：

碱裂解法提取质粒所用到的溶液I中的葡萄糖的作用是维持渗透压。

正确答案:正确

第19题：

质粒DNA提取后如何检测其提取质量？

正确答案:质粒DNA鉴定常用琼脂糖凝胶电泳法。它是利用琼脂糖溶化再凝固后能形成带有一定孔隙的固体基质的特性，其孔隙大小取决于琼脂糖的浓度。在电场的作用下及中性pH的缓冲条件下带负电的核酸分子就可以向阳极迁移。不同DNA，其分子量大小及构型不同，电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带。琼脂糖凝胶电泳法分离DNA主要是利用分子筛效应，其迁移速度与分子量的对数值成反比关系。此外，琼脂糖凝胶的浓度也会影响特定大小的线状DNA的迁移率，因此采用不同浓度的凝胶可以分离不同大小范围的DNA片段。染料溴化乙锭（EB）能够插入DNA分子中的碱基对之间而与DNA形成复合物，在紫外光的照射下发射荧光，且其发射的荧光强度与DNA的含量成正比。用肉眼观察，可以检测10ng以上的DNA。质粒DNA有三种构型，其中超螺旋的电泳迁移率最快。
质粒DNA的浓度测定主要有紫外光谱分析法与EB荧光分析法两种。其中紫外光谱分析法主要是根据DNA在260nm处有特异的紫外吸收峰，且其光吸收的强度与核酸的浓度成正比这一特性来推算DNA的浓度。据计算，测定该波长下DNA溶液的OD值，当OD260=1时，双链DNA含量约为50μg/ml，据此可计算出测定溶液中DNA的含量。由于蛋白质的吸收峰在280nm处，在测定DNA含量时，还常计算OD260/OD280之值，如该值为1.8—2.0时，认为已达到较高的纯度，如低于此值，表明其内含杂质较多，可能影响酶切反应。

第20题：

第21题：

第22题：

第23题：

第24题：