重组体的筛选方法有A.抗药标志筛选 B.标志补救 C.分子杂交 D.免疫化学

题目
重组体的筛选方法有


A.抗药标志筛选
B.标志补救
C.分子杂交
D.免疫化学
相似考题

1.DNA重组技术中，用来筛选重组体的方法有A．标志补救B．分子杂交C．特异性抗体与产物结合D．紫外分光光度计分析

2.下列哪种方法不宜用于重组体的筛选( )A、Western印迹杂交B、抗药性标志选择C、分子杂交D、标志补救E、免疫学方法

3.下列哪种方法不宜用于重组体的筛选A．Western印迹杂交B．抗药性标志选择C．标志补救D．分子杂交E．免疫学方法

4.常用于从转化菌中筛选DNA重组体的方法不包括A、α互补筛选B、插入失活筛选C、杂交筛选D、质粒的小量快速提取E、DNA序列测定筛选

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  • 第1题：

    如何筛选与鉴定重组体？


    正确答案: 鉴定
    （1）报告基因的检测法
    （2）目的基因分子杂交检测方法
    筛选：
    在利用载体间接转化外源基因或直接转化处理之后，大部分受体细胞是没有被转化的，这就需要采用特定的方法将转化细胞与未转化细胞区分开来。为了淘汰未转化的细胞，人们试验了各种不同的基因作为转化的报告基因（reporter gene），包括一些显性的选择标记基因，以及可用特定方法检测其蛋白质产物的基因。其中GUS基因和NPTII基因能耐受氨基末端融合、检测简单，是目前应用最多的报告基因。在植物基因工程中双子叶植物如番茄、辣椒、马铃薯的转化及部分单子叶植物的转化用NPTII基因所抗的卡那霉素（kanamycin）来筛选。

  • 第2题：

    重组DNA的筛选与鉴定一般有哪四种方法？


    正确答案: ①平板筛选法。是指利用载体的遗传性标记在平板上直接筛选的方法。插入失活：当外源DNA序列插入质粒中某一抗药基因内，使该基因失活，转化细胞就不能生长在含相应抗生素的培养平板上.蓝-白筛选：利用蓝色化合物的形成作为指示剂，筛选带重组质粒的细菌。
    ②限制酶切图谱筛选。对载体上插入的外源DNA片段进行酶切图谱分析，并以此与目的基因的已知图谱对比，因此利用这种方法不仅能区分重组子与非重组子，而且还能鉴定目的重组子。
    ③PCR筛选重组体。抽取少量重组DNA→PCR扩增→电泳鉴定→序列分析
    ④原位杂交技术。1，获取DNA重组2，重组3，转化体4，筛选5，克隆6，表达7.表达产物分离纯化。

  • 第3题：

    概述筛选和鉴定DNA重组体的常用方法。


    正确答案:在转基因操作以后，载体只能进入部分宿主细胞，即使含有载体的细胞，也并非都含有目的基因，有些宿主细胞可能含有自身连接成环的载体分子或非目的基因与载体形成的重组体。因此，须在不同层次不同水平上进行筛选和鉴定，以确定哪一菌落所含的重组DNA分子确实带有目的基因，这一过程为筛选。根据载体体系、宿主细胞特性及外源基因在受体细胞表达情况的不同，可采用：
    （1）直接选择法：针对载体携带某种或某些标志基因和目的基因，直接测定该基因或基因表型的方法。a.抗药标志的筛选：载体具有某种抗生素的抗性基因，在转化后只有含载体的细菌才能在含该抗生素的培养平板上生长并形成单菌落，而未转化细胞则不能生长，这样即可将转化菌与非转化菌区别开来。b.插入失活法：将目的基因插入载体某一耐药基因内使该基因失活，可区分单纯载体或重组载体（含目的基因）的转化菌落。如pBR322含ampr、Tetr双抗药基因，若将目的基因插入载体的Tetr基因中，则含目的基因的转化细胞只能在含Amp的培养液中生长，而不能在含Tet的培养液中生长。c.标志补救：若克隆的基因能在宿主菌表达，且表达产物与宿主菌的营养缺陷互补，那么就可以利用营养突变菌株进行筛选，这称为标志补救。如重组体为亮氨酸自养型（Leu+），将重组子导入亮氨酸异养型（Leu-）的宿主细胞后，在不含Leu的培养液中可生长，而不含重组体的细胞则不能生长。 -互补法筛选（见43题）也是一种标志补救选择方法。d.酶切图谱筛选：分别挑取独立的菌落，培养后快速提取重组体DNA，用重组时所采用的限制酶切割后，进行琼脂糖凝胶电泳，可以从DNA片段的大小和有无判断所选的菌落是否为阳性克隆。e.核酸杂交筛选：将转化子DNA或克隆的DNA分子片段转移至合适的膜上，利用标记探针进行杂交，直接选择并鉴定目的基因。f.原位杂交筛选：是将待选菌在平板上培养成菌落，按相应位置（原位）转移至合适的膜上，经变性使膜上的DNA成单链，再与标记的探针（与目的基因互补）杂交，找出平板上的菌落位置，即为重组的阳性菌落。
    （2）免疫学方法筛选：利用特异抗体与目的基因表达产物的特异相互作用进行筛选。这种方法不直接鉴定基因，属非直接筛选法。分为免疫化学方法及酶联免疫检测分析等。基本的工作原理是将琼脂培养板上的转化子菌落经氯仿蒸汽裂解、释放抗原，再将固定有抗血清的膜覆盖在裂解菌落上，在膜上得到抗原抗体复合物，最后用合适的方法检出阳性反应菌落。

  • 第4题：

    DNA重组中用来筛选的方法有（）.

    • A、PCR法
    • B、平板筛选法
    • C、原位杂交技术
    • D、人工检验法

    正确答案:A,B,C

  • 第5题：

    下列能区分期望重组子的筛选方法是（）

    • A、抗药性筛选法
    • B、营养缺陷筛选法
    • C、显色筛选法
    • D、次级克隆法
    • E、菌落原位杂交法

    正确答案:E

  • 第6题：

    填空题
    PCR 扩增筛选重组体是比较简便的筛选方法，它适合于（）。

    正确答案： 插入外源片段的种类较多，大小又极为相似的重组体的筛选
    解析： 暂无解析

  • 第7题：

    填空题
    重组体的筛选有两层涵义，一是将（），二是将（）。

    正确答案： 携带有外源插入DNA片段的克隆挑选出来,携带有特定外源插入片段的重组体挑选出来
    解析： 暂无解析

  • 第8题：

    填空题
    目前，在重组体的筛选中，已经发展了许多构思巧妙、具有极高准确性的筛选方法。 大致可以分为 （1）（）；（2）（）；（3）（）；（4）（）。

    正确答案： 遗传学方法,物理筛选法,核酸杂交法,表达产物分析法
    解析： 暂无解析

  • 第9题：

    多选题
    DNA重组中用来筛选的方法有（）.
    A

    PCR法

    B

    平板筛选法

    C

    原位杂交技术

    D

    人工检验法


    正确答案： A,C
    解析： 暂无解析

  • 第10题：

    单选题
    基因工程中，利用载体把外源基因转入到宿主细胞后，一部分受体细胞是没有被转化的，这就需要进行（）来把他们区分开.
    A

    重组体的筛选

    B

    重组体的再制作

    C

    重组体淘汰

    D

    重组体修改


    正确答案： B
    解析： 暂无解析

  • 第11题：

    多选题
    下列属于基因工程操作过程的有（）.
    A

    在供体细胞中切割目的基因

    B

    目的基因与载体组成重组体

    C

    把重组体引入到宿主细胞中

    D

    外源目的基因的筛选与鉴定


    正确答案： C,B
    解析： 暂无解析

  • 第12题：

    判断题
    对于重组体的筛选工作来说，DNA测序属于直接筛选法。
    A

    对

    B

    错


    正确答案： 对
    解析： 暂无解析

  • 第13题：

    用下列方法进行重组体的筛选，只有（）说明外源基因进行了表达。

    • A、Southem印迹杂交
    • B、Northem印迹杂交
    • C、Western印迹
    • D、原位菌落杂交

    正确答案:C

  • 第14题：

    筛选重组转化体的方法有哪些？


    正确答案:利用表型特征进行筛选和物理筛选鉴定法

  • 第15题：

    下列属于基因工程操作过程的有（）.

    • A、在供体细胞中切割目的基因
    • B、目的基因与载体组成重组体
    • C、把重组体引入到宿主细胞中
    • D、外源目的基因的筛选与鉴定

    正确答案:A,B,C,D

  • 第16题：

    如何筛选重组体？


    正确答案: （1）抗药性筛选
    这是利用载体DNA上组装的抗药性选择标记进行筛选的方法。
    常用的抗生素筛选剂：氨苄青霉素（ampicillin，Ap或Amp）；氯霉素（chloramphenicol，Cm或Cmp）；卡那霉素（kanamycin，Kn或Kan）；四环素（tetracymic，Tc或Tet）；链霉素（strentomycin，Sm或Str）。
    （2）插入失活筛选法
    检测克隆载体携带有外源DNA的通常方法是插入失活。经过抗药性筛选获得的大量转化子中既包含所需要的重组子，也包含非重组子。为了进一步筛选出重组子，可利用质粒载体的抗药性进行再次筛选。
    （3）插入表达筛选法
    与插入失活相反，插入表达法是外源目的基因插入特定载体后，能激活用于筛选操作的标记基因的表达，由此进行转化子的筛选。设计载体时，在筛选标记基因前面连接一段具有抑制作用的负调控序列，插入外源DNA将使该负调控序列失活，其下游的筛选标记基因才能表达。
    （4）环丝氨酸筛选
    这种筛选方法只使用于抗四环素的基因插入失活的重组克隆筛选。
    （5）显色反应筛选法
    显色反应可以在平板上或膜上直接显示出重组克隆，不仅方便而且灵敏。

  • 第17题：

    问答题
    如何筛选与鉴定重组体？

    正确答案： 鉴定
    （1）报告基因的检测法
    （2）目的基因分子杂交检测方法
    筛选：
    在利用载体间接转化外源基因或直接转化处理之后，大部分受体细胞是没有被转化的，这就需要采用特定的方法将转化细胞与未转化细胞区分开来。为了淘汰未转化的细胞，人们试验了各种不同的基因作为转化的报告基因（reporter gene），包括一些显性的选择标记基因，以及可用特定方法检测其蛋白质产物的基因。其中GUS基因和NPTII基因能耐受氨基末端融合、检测简单，是目前应用最多的报告基因。在植物基因工程中双子叶植物如番茄、辣椒、马铃薯的转化及部分单子叶植物的转化用NPTII基因所抗的卡那霉素（kanamycin）来筛选。
    解析： 暂无解析

  • 第18题：

    填空题
    根据噬菌斑的清晰程度筛选重组体主要是 cⅠ基因的（）。

    正确答案： 失活
    解析： 暂无解析

  • 第19题：

    问答题
    重组DNA的筛选与鉴定一般有哪四种方法？

    正确答案： ①平板筛选法。是指利用载体的遗传性标记在平板上直接筛选的方法。插入失活：当外源DNA序列插入质粒中某一抗药基因内，使该基因失活，转化细胞就不能生长在含相应抗生素的培养平板上.蓝-白筛选：利用蓝色化合物的形成作为指示剂，筛选带重组质粒的细菌。
    ②限制酶切图谱筛选。对载体上插入的外源DNA片段进行酶切图谱分析，并以此与目的基因的已知图谱对比，因此利用这种方法不仅能区分重组子与非重组子，而且还能鉴定目的重组子。
    ③PCR筛选重组体。抽取少量重组DNA→PCR扩增→电泳鉴定→序列分析
    ④原位杂交技术。1，获取DNA重组2，重组3，转化体4，筛选5，克隆6，表达7.表达产物分离纯化。
    解析： 暂无解析

  • 第20题：

    判断题
    以λ噬菌体为载体的筛选方法比较简便，凡能形成噬菌斑的就一定是重组体。
    A

    对

    B

    错


    正确答案： 错
    解析： 暂无解析

  • 第21题：

    单选题
    重组体的筛选方法，不包括（　　）。
    A

    抗药性选择

    B

    标志补救

    C

    分子杂交法

    D

    盐析法

    E

    免疫化学方法及酶免检测分析


    正确答案： A
    解析： 暂无解析

  • 第22题：

    问答题
    概述筛选和鉴定DNA重组体的常用方法。

    正确答案： 在转基因操作以后，载体只能进入部分宿主细胞，即使含有载体的细胞，也并非都含有目的基因，有些宿主细胞可能含有自身连接成环的载体分子或非目的基因与载体形成的重组体。因此，须在不同层次不同水平上进行筛选和鉴定，以确定哪一菌落所含的重组DNA分子确实带有目的基因，这一过程为筛选。根据载体体系、宿主细胞特性及外源基因在受体细胞表达情况的不同，可采用：
    （1）直接选择法：针对载体携带某种或某些标志基因和目的基因，直接测定该基因或基因表型的方法。a.抗药标志的筛选：载体具有某种抗生素的抗性基因，在转化后只有含载体的细菌才能在含该抗生素的培养平板上生长并形成单菌落，而未转化细胞则不能生长，这样即可将转化菌与非转化菌区别开来。b.插入失活法：将目的基因插入载体某一耐药基因内使该基因失活，可区分单纯载体或重组载体（含目的基因）的转化菌落。如pBR322含ampr、Tetr双抗药基因，若将目的基因插入载体的Tetr基因中，则含目的基因的转化细胞只能在含Amp的培养液中生长，而不能在含Tet的培养液中生长。c.标志补救：若克隆的基因能在宿主菌表达，且表达产物与宿主菌的营养缺陷互补，那么就可以利用营养突变菌株进行筛选，这称为标志补救。如重组体为亮氨酸自养型（Leu+），将重组子导入亮氨酸异养型（Leu-）的宿主细胞后，在不含Leu的培养液中可生长，而不含重组体的细胞则不能生长。 -互补法筛选（见43题）也是一种标志补救选择方法。d.酶切图谱筛选：分别挑取独立的菌落，培养后快速提取重组体DNA，用重组时所采用的限制酶切割后，进行琼脂糖凝胶电泳，可以从DNA片段的大小和有无判断所选的菌落是否为阳性克隆。e.核酸杂交筛选：将转化子DNA或克隆的DNA分子片段转移至合适的膜上，利用标记探针进行杂交，直接选择并鉴定目的基因。f.原位杂交筛选：是将待选菌在平板上培养成菌落，按相应位置（原位）转移至合适的膜上，经变性使膜上的DNA成单链，再与标记的探针（与目的基因互补）杂交，找出平板上的菌落位置，即为重组的阳性菌落。
    （2）免疫学方法筛选：利用特异抗体与目的基因表达产物的特异相互作用进行筛选。这种方法不直接鉴定基因，属非直接筛选法。分为免疫化学方法及酶联免疫检测分析等。基本的工作原理是将琼脂培养板上的转化子菌落经氯仿蒸汽裂解、释放抗原，再将固定有抗血清的膜覆盖在裂解菌落上，在膜上得到抗原抗体复合物，最后用合适的方法检出阳性反应菌落。
    解析： 暂无解析

  • 第23题：

    单选题
    下列哪种方法不宜用于重组体的筛选（）
    A

    Western印迹杂交

    B

    抗药性标志选择

    C

    分子杂交

    D

    标志补救

    E

    免疫学方法


    正确答案： A
    解析： 暂无解析

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