简述影响目的基因在大肠杆菌中表达的因素。

第1题：

第2题：

简述影响因素试验及其目的。

正确答案:影响因素试验是在比加速实验更激烈的条件下进行，主要包括：
1.高温试验。
2.高湿度试验。
3.强光照射试验。
其目的是探讨药物的固有稳定性、了解稳定性的影响因素及可能的降解途径和分解产物，为制剂生产工艺、包装、贮存等提供依据。

第3题：

简述大肠杆菌表达系统的优点和不足。 

正确答案:1）发展最早、应用最广泛的经典的表达系统。
2）具有遗传背景清楚、目标基因表达水平高（高达70％），培养周期短，抗污染能力强。
3）不能用于加工修饰化（糖基化、酰胺化）蛋白表达。
4）细胞死亡后，细胞壁脂多糖游离出来，形成内毒素，具有抗原性，产生热源。
5）N端增加的蛋氨酸也容易引起免疫反应。

第4题：

简述影响基牙受扭力及扭力大小的因素。

正确答案:（1）舌施加的侧向力：舌是一个施加力的器官。
（2）牙合力的大小、方向及部位：人工牙的颊舌径宽度、牙尖高度、牙尖斜度、人工牙数目直接影响可摘局部义齿牙合力的大小和方向。
（3）牙槽嵴粘膜的性质及牙槽嵴的解剖形态。
（4）卡环对基牙的扭力：可摘局部义齿中卡环都将不同程度地传递给基牙一定大小的扭力。

第5题：

影响大肠杆菌系统外源基因表达的因素有哪些？

正确答案: 1、启动子的强弱；
2、基因的剂量；
3、影响RNA转录和翻译效率的因素：SD序列、mRNA；
4、外源基因密码子的选择；
5、表达产物的大小；
6、表达产物的稳定性。

第6题：

用基因工程技术可使大肠杆菌合成人的蛋白质。下列叙述错误的是（）

• A、常用相同的限制性内切酶处理目的基因和质粒
• B、载体上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的细胞和促进目的基因的表达
• C、可用含抗生素的培养基检测大肠杆菌中是否导入了重组质粒
• D、导入大肠杆菌的目的基因不一定能成功表达

正确答案:B

第7题：

影响目的基因在大肠杆菌中表达的因素.

正确答案: 1.外源基因的拷贝数2.外源基因的表达效率3.表达产物的稳定性4.细胞的代谢负荷

第8题：

简述使外源基因在宿主细胞中顺利表达的两种方法

正确答案: （1）在形成重组DNA分子时，在载体的启动基因顺序和核糖体结合顺序后面的适当位置上连接外源基因。
（2）将外源基因插入到载体的结构基因中的适当位置上，转录和翻译的结果将产生一个融合蛋白。这种蛋白质被提纯后，要准确地将两部分分开，才能获得所需的蛋白质

第9题：

在大肠杆菌表达系统中表达真核细胞基因，目的基因必须是（），因为大肠杆菌没有剪切（）的功能。

正确答案:cDNA；内含子

第10题：

第11题：

第12题：

第13题：

第14题：

经转化的目的基因在宿主植物细胞中是能够表达的，且有两种表达方式：即（）和（）

正确答案:瞬时表达；稳定表达

第15题：

简述大肠杆菌表达系统与酵母表达系统的异同。

正确答案: 相同点：易操作，繁殖快、成本低、易于工业化生产。
不同点：
1、大肠杆菌表达系统转录信号与酵母系统不同，与核糖体的结合位点不同
2、大肠杆菌中表达不存在翻译后修饰作用，故对蛋白质产物不能糖基化；酵母菌具有原核细菌无法比拟的真核蛋白翻译后加工系统。
3、大肠杆菌表达系统由于分泌能力不足，真核蛋白质常形成不溶性的包涵体，表达产物必须在下游处理过程中经过变性和复性处理才能恢复其生物活性；酵母菌具有真核生物表达系统基因表达调控和蛋白质修饰功能，避免了产物活性低、包涵体变性复性等问题。

第16题：

如何实现真核生物一蛋白基因在大肠杆菌细胞中受控、稳定、分泌和高效表达。

正确答案: 大肠杆菌是高效表达异源蛋白最常用的原核表达系统。由于每种基因都有其独特的结构、mRNA的稳定性和翻译效率、蛋白质折叠的难易程度，修主细胞蛋白酶对蛋白质的降解等等原因，因此并非每一种基因都能在大肠杆菌中有效表达。下面浅谈一下实现真核生物一蛋白基因在大肠杆菌细胞中受控、稳定、分泌和高效表达的策略。
首先，要构建有效的表达载体，一种高效的原核表达载体需要包括一个强大并且可以严紧调节的启动子；一位于翻译起始密码子5’端大约9bp的SD序列；位于目的基因3’末端的一个高效转录终止子。除此之外，载体还需要一个复制起点，筛选标记和利于对启动子活性进行严紧调节的基因。这种调节元件可以插入载体自身，也可以插入宿主的染色体。其他的元件包括转录和翻译增强子等。这些元件的作用往往具有基因特异性，因此要根据不同的情况加以取舍。构建表达载体，需要仔细考虑多种元件的组合，以保证最高水平的蛋白质合成。
a、提高转录水平调控的策略
（1）选择的启动子要具有适合高水平蛋白质合成的某些特性。首先启动子的作用要强；第二，它必须表现最低水平的基础转录活性。若要求高效的基因表达，最好选用高密度培养细胞和表现最低活性的可诱导和非抑制启动子。
（2）现在已鉴定了一些在E.coli中显著增强异源基因表达的序列，有可能利用增强子来达到超量表达蛋白质的目的。（3）虽然转录终止子在表达质粒的构建过程中常被忽略，但有效的转录终止子是表达载体必不可少的元件。
b、提高翻译水平调控的策略  
（1）mRNA5’末端的独特结构是mRNA翻译起始效率的最主要决定因素，因此找到通用的有效起始翻译的共同序列能高效起始外源蛋白的翻译。
（2）SD与起始密码子间的距离约为5-13bp，这一距离影响翻译起始的效率，因此在设计载体中要控制好这段距离。（3）在mRNA的翻译起始区的二级结构在决定基因表达效率方面具有重要作用，使用一些策略使mRNA形成二级结构的可能性最小。
（4）mRNA的快速降解势必影响蛋白质的产生，比如可以通过选用缺乏某些特定RNase如RNaseII或PNPase的宿主菌来提高基因的表达，这将在E.coli高效表达外源基因中有很大作用。
（5）在mRNA中存在终止信号是翻译终止过程必不可少的，在设计表达载体时，通常插入三个终止密码子以防止核糖体的跳跃，在E.coli中偏向于使用UAA密码子。
c、维护真核生物蛋白基因在大肠杆菌细胞稳定性和减少E.coli中重组蛋白裂解的策略
（1）将蛋白质靶向细胞周质或培养基
（2）在较低的温度下培养细菌
（3）选用蛋白酶缺陷的菌株
（4）构建N-末端或C-末端融合蛋白；融合系统能够产生大量的可溶性的融合蛋白，为E.coli中高效表达和纯化重组蛋白提供了极大方便。
（5）将目的基因多拷贝串联
（6）与分子伴侣共表达
（7）替换特定的氨基酸残基以消除蛋白酶裂解位点
（8）改善蛋白质的亲水性
（9）优化培养条件，E.coli中的蛋白质产量可以通过高细胞密度培养系统而获得显著提高，
d、提高真核生物蛋白基因在大肠杆菌细胞分泌的策略 
（1）将蛋白质分泌到细胞外是人们最期望的一种策略。因为这样容易纯化目的蛋白质，减少细菌的蛋白酶对目的蛋白质的裂解。但是，E.coli在正常情况下只有很少量的蛋白质分泌到细胞外。在大肠杆菌表达系统中，金黄色葡萄球菌A蛋白的信号肽能引导带有E结构域的A蛋白片段或融合产物从细胞质外泌到培养基中，如果能利用可控的强启动子进行A蛋白信号肽引导的基因表达，则有望在蛋白质外泌方面有所突破。
（2）对培养基的特殊操作能明显提高蛋白质释放到培养基中。例如，在培养基中添加甘氨酸能增强外周质蛋白释放到培养基中，且不引起明显的细菌裂解。
质粒的构建，SD序列，信号肽，糖基化，启动子

第17题：

目的基因在大肠杆菌中表达的效率受以下哪几个方面影响？（）

• A、启动子的强弱
• B、核糖体结合位点
• C、终止子强弱
• D、SD序列和起始密码ATG的间距
• E、密码子的组成

正确答案:A,B,D,E

第18题：

用基因工程技术可使大肠杆菌合成人的蛋白质。下列叙述错误的是（）

• A、通常用相同的限制性内切酶处理含目的基因的DNA和质粒
• B、DNA连接酶和RNA聚合酶是构建基因表达载体必需的工具酶
• C、可用含抗生素的培养基检测大肠杆菌中是否导入了含抗生素抗性基因的表达载体
• D、导入大肠杆菌的目的基因不一定能成功表达

正确答案:B

第19题：

简述真核基因在原核细胞中获得表达必须具备的三个条件。

正确答案: （1）要有原核细胞的启动子；
（2）要有能与原核细胞16SrRNA3’端相配合的顺序；
（3）表达的干扰素多肽要不被细胞酶类所迅速降解。

第20题：

简述影响土基压实的因素有哪些？

正确答案: （1）含水量；
（2）土质；
（3）压实工具；
（4）压实工具和方法以及相应的压实度；
（5）压实厚度对压实效果的影响；

第21题：

简述影响培养基灭菌的因素。

正确答案:所污染杂菌的种类、数量、灭菌温度、时间、培养基成分、pH值、培养基中颗粒和泡沫。

第22题：

第23题：