11、PCR反应体系的PH对PCR反应的快慢没有影响的。

第1题：

第2题：

简述PCR反应体系主要包括哪些组分。
P.CR反应组分：
①模板（特定序列的DNA分子）。
②两个特异寡核苷酸片段-引物primer，这一对引物位于欲扩增DNA区的两侧，与靶序列两端互补。
③耐热DNA聚合酶Taq酶以及酶的缓冲液-buffer。
④4种脱氧核糖核苷酸dNTP。
略

第3题：

在固定容积的PCR反应体系中，加入越多的模版，PCR反应的效果就会越好。（）

正确答案:错误

第4题：

荧光定量PCR结果中样品的Ct值受下列哪些因素的影响（）。

• A、阈值设定
• B、模版的起始浓度
• C、PCR反应的循环数
• D、引物的扩增效率

正确答案:A,B,D

第5题：

PCR反应的原始材料是（）。

正确答案:模板DNA

第6题：

简述PCR反应体系，实验中注意的问题。

正确答案:1.PCR原理：PCR是利用DNA合成的原理，合成两个与靶DNA两侧序列互补的引物，在体外进行靶DNA的重复合成。
包括3个步骤：
（1）DNA变性：加热使靶DNA双链解离成两条单链。
（2）引物与靶DNA退火：降低温度至适当水平，促使两个引物根据碱基互补的原理分别结合至靶DNA的两条链的3’末端。
（3）引物延伸：在DNA聚合酶催化下，引物沿着靶DNA3’末端向5’末端延伸（引物延伸是5’→3’方向）。新合成DNA在新一轮变性解离后形成更多的模版与引物退火，在DNA聚合酶催化行，合成新一轮的靶DNA。每一轮DNA的合成均以所有DNA为模版，靶DNA数量呈指数增加。
2.注意问题：引物
（1）引物长度：15~30bp，常用为20bp
（2）引物扩增跨度：以200~500bp为宜，特点条件下课扩增至10kb
（3）引物碱基：G+C含量以40~60%为宜，太少扩增效果不佳，太多易出血非特异性条带；ATGC最后随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸成串排列
（4）避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异性扩增条带
（5）引物3’末端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基，应严格要求配对
（6）引物中有货最好加上合适的酶切位点，被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点
（7）引物特异性：引物与核苷酸序列数据库的其他序列无明显同源性
（8）引物量： 每条引物浓度0.1~1μmol或10~100pmol，以最低引物量产生所需要的结果为好，过高引起错配和非特异性扩增，增加引物之间形成聚体的机会
P.CR循环次数：循环次数觉得PCR扩增程度。主要取决于模版DNA的浓度。一般的循环次数在30~40次，次数越多，非特异性产物量亦随之增多
设立对照：PCR反应应设立阳性和阴性对照，是PCR反应是否成功、产物条带位置及大小是否合理的一个重要参考指标。

第7题：

PCR的反应体系一般为（）

• A、100μl
• B、50μl
• C、30μl
• D、20μl
• E、60μl

正确答案:B

第8题：

第9题：

第10题：

第11题：

第12题：

第13题：

第14题：

以下关于PCR的说法错误的是（）

• A、PCR反应必须要有模板、引物、dNTP和DNA聚合酶
• B、应用PCR技术可以进行定点突变
• C、PCR的引物必须完全和模板互补配对
• D、PCR反应中，仅介于两引物间的DNA片段得到大量扩增

正确答案:C

第15题：

PCR中阳性对照没有出现的原因包括（）。

• A、反应体系配制出错
• B、阳性对照失效
• C、反应体系中组分失效
• D、漏加

正确答案:A,B,C,D

第16题：

影响PCR反应的因素有哪些？

正确答案:PCR反应体系包含DNA模板、寡核苷酸引物、DNA聚合酶、dNTP及含有必需离子的反应缓冲液，这些因素都对PCR反应产生影响。

第17题：

什么是PCR，请试述PCR技术的原理，以及PCR的反应过程？

正确答案:P.CR就是聚合酶链反应（PolymeraseChainReaction）。
原理：双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。
反应过程：首先。双链DNA分子在临近沸点的温度下加热分离成两条单链DNA分子；然后，加入到反映混合物中的引物和模板DNA的特定末端相结合；戒指，DNA聚合酶以单链DNA为模板，利用反应混合物中的三种核苷三磷酸，在引物的3’-OH端合成新生的DNA互补链。

第18题：

PCR反应体系中所必需的物质是（）

• A、Taq酶
• B、dNTP
• C、DNA模板
• D、Mg离子
• E、以上都是

正确答案:E

第19题：

第20题：

第21题：

第22题：

第23题：

第24题：