第3题:
试述PCR技术的反应过程
(1)引物的长度一般15~30bp; (2)引物扩增跨度:以500bp为宜,特定重要条件下可扩增长至10kb的片段; (3)引物碱基:G+C含量以40%~60%为宜,A、T、G、C最好随机分布,避免5个以上的嘌吟或嘧啶核苷酸的成串排列; (4)避免引物内部出现二级结构:避免两条引物间互补,特别是3′端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异性的扩增条物; (5)引物3′端的碱基必须与模板严格配对,而且尽量不要为A,最好选择T,因为3′端末位为T时错配几率大大降低; (6)产物有或能加上合适的酶切位点; (7)被扩增的靶序列最好有适宜的酶切点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。