如何确证混合斑？

本题答案：1)确定是否为混合斑——多个>2个峰的图谱//norH1>60%H2，stutter<15%mainH
2)确定等位基因峰——accordingtoladder
3)确定构成混合物的组分数——n个等位基因数提示至少有n/2(Z)个组分
4)统计分析：似然率法
5)结巴带
6)等位基因丢失
7)LCN影响
8)Amelogenin基因的X和Y峰面积——判断是否为混合斑&混合斑中男女成分比例
9)Y-STR基因座等位基因数——推断混合斑的最少组分数目

答案：实验一：将两菌株分别放入中间有烧结玻璃的U形玻璃管中，两边反复加压使液体交换，分别培养。
实验二：将两菌株先分别加入一定量的DNA酶消解胞外的游离DNA分子，再混合培养。
若实验一、二均有原养型出现，说明是转导作用，因为带有供体DNA的噬菌体可通过烧结玻璃，并且噬菌体中的DNA不受DNA酶的作用。
若实验一无原养型出现，而实验二有原养型出现，说明是接合作用，因为接合作用需菌体接触，但胞外的DNA酶不能作用于接合转移的DNA。
若实验一、二均无原养型出现，说明是转化作用，因为游离DNA不能通过烧结玻璃，而且要被DNA酶分解。

母核和结构的呈色反应、沉淀反应、制备衍生物测定熔点、水解产物的反应、薄层色谱法、紫外分光光度法、红外分光光度法等都是鉴别甾体激素药物常用的方法。

一、呈色反应 

(一)与强酸的呈色反应 

硫酸、磷酸、高氯酸、盐酸等呈色，硫酸为主。可能机制为浓硫酸与甾体的酮基质子化反应，形成正碳离子，然后与HSO4-作用。 

特点：操作简便，反应灵敏，通过形成的颜色或荧光的不同而互相区别，但操作条件不易掌握。

(二)官能团的呈色反应 

1.C17-α-醇酮基 有还原性，能与氧化剂四氮唑盐反应显色。（可做薄层的显色剂）；   2.酮基 C3-、C20-能与2，4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼等羰基试剂反应呈色。   3.甲酮基以及活泼亚甲基 能与亚硝铁氰化钠、间二硝基酚、芳香醛类反应呈色。   4.有机氟 经氧瓶燃烧后生成无机氟化物，在与茜素蓝及硝酸亚铈呈色；   5.酚羟基 能与重氮磺酸反应生成红色偶氮染料。

二、沉淀反应 

1.与斐林试剂 C17-α-醇酮基具有还原性，生成橙红色氧化亚铜沉淀。   2.氨基硝酸银 C17-α-醇酮基，黑色金属银沉淀   3.硝酸银 炔雌醇、炔诺酮，白色沉淀。     4.硝酸-硝酸银 有机氯破坏在酸性条件下，白色沉淀。

三、制备衍生物测定其熔点 

生成酯、肟、缩氨基脲，或利用醇制碱液水解甾体酯类生成相应的母体，然后测定其熔点。   1.酯的生成   2.酮肟的生成   3.缩氨基脲的生成   4.酯的水解 

四、水解产物的反应 

醋酸、戊酸和己酸酯水解后鉴别酸。

五、紫外分光光度法 

C=C-C=O和C=C-C=C共轭系统，可用规定波长和吸收度比值法鉴别。

六、红外分光光度法

结构复杂，各国药典几乎均采用红外分光光度法鉴别，中国药典95版。36种原料，其中33种采用该法。

七、薄层色谱法 

简便、快速、分离效能高等特点。

方法： 供试品溶液和对照品溶液的制备 供试品通常需做前处理（如有机溶剂提取），消除注射液、片剂及软膏剂等辅料的干扰。将处理好的供试品和对照品用规定溶剂配成一定浓度的溶液备用。   展开与检出 将供试品与对照品在同一块薄层板上分别点样，用规定的展开剂展开，取出晾干，用规定的显色剂显色，立即检视。供试品溶液所显斑点与对照品溶液所显斑点的Rf值相同。

八、高效液相色谱法

保留时间一致鉴别。