免疫印迹法原理和需注意问题。

第1题：

第2题：

第3题：

第4题：

第5题：

酶联免疫吸附实验常用的方法有（）。

• A、直接法、间接法、夹心法、竞争抑制法
• B、直接法、沉淀法、印迹法、竞争抑制法
• C、直接法、间接法、夹心法、免疫扩散法
• D、直接法、间接法、印迹法、免疫扩散法
• E、直接法、沉淀法、印迹法、免疫抑制法

正确答案:A

第6题：

HIV感染的确认试验是（）

• A、免疫印迹法
• B、酶联免疫法
• C、PDR法
• D、流式细胞仪检测

正确答案:A

第7题：

简述蛋白质免疫印迹法的基本原理和主要操作步骤。

正确答案: 蛋白质印迹法又称蛋白质免疫印迹法，是20世纪70年代末80年代初在蛋白质凝胶电泳和固相免疫测定的基础上发展起来的蛋白质检测技术，为检测样品中是否存在蛋白质抗原提供了一种可靠的方法。该法鉴定蛋白质的原理是根据被测蛋白能与特定抗体的结合特性和该蛋白的相对分子质量。
免疫印迹法程序可分为5个步骤：
（1）蛋白样品的制备；
（2）经过SDS-PAGE分离样品；
（3）分离的蛋白转移到膜载体上，转移后首先将膜上未反应的位点封闭起来以抑制抗体的非特异性吸附；
（4）用固定在膜上的蛋白质作为抗原，与对应的非标记抗体（一抗）结合；
（5）洗去未结合的一抗，加入酶耦联或放射性同位素标记的二抗，通过显色或放射性自显影法检测凝胶中的蛋白成分。

第8题：

自身抗体的检测方法有（）

• A、免疫荧光法
• B、ELISA
• C、免疫印迹法
• D、免疫斑点法
• E、上述选项均是

正确答案:E

第9题：

第10题：

第11题：

第12题：

第13题：

第14题：

第15题：

第16题：

简述免疫印迹法的原理。

正确答案: 免疫印迹法亦称为Westemblot，由SDS-PAGE、蛋白质转印和酶免疫测定三项技术结合而成。抗原等蛋白样品经SDS处理后带负电荷，SDS-PAGE时从阴极向阳极泳动，分子量小者，泳动速度快；然后将凝胶中已经分离的蛋白质条带在电场作用下转移至硝酸纤维素膜上；最后将印有蛋白质条带的硝酸纤维素膜依次与特异性抗体和酶标第二抗体作用，加λ能形成不溶性显色物的酶反应底物，使区带染色；根据电泳时加λ的分子量标准，可确定各组分的分子量。

第17题：

免疫印迹法是由_________、_________和_________三项技术结合而成。

正确答案:SDS-PAGE蛋白质转印；酶免疫测定

第18题：

HIV抗体蛋白印迹法确证试剂的原理。

正确答案:抗原多为全病毒裂解抗原，用SDS-PAGE按其分子量大小进行分离，然后通过电转移法将凝胶中的HIV蛋白转移至硝酸纤维薄膜上，再将这些硝酸纤维薄膜制备成试剂条用于实验。这类试剂的抗原条带全，包括膜区抗原gp160、gp120和gp41，核心抗原p55、p24和p17，聚合酶抗原p66、p51和p31，另外还有HIV-2型特异性抗原。

第19题：

免疫印迹法原理和需注意问题。

正确答案:免疫印迹法是在蛋白质电泳分离和抗原抗体检测的基础上发展起来一项检测蛋白质的技术，它将SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的高分辨力与抗原抗体反应的特异性相结合，其操作可分成三个阶段：
第一阶段为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PACE）；第二阶段为电转移；第三阶段为酶免疫定位。
需注意问题：
①许多单克隆抗体不能与变性抗原反应，因此免疫印迹实验中常选用多克隆抗体。
②在电泳之前应用免疫沉淀法将抗原进行纯化和浓缩可提高免疫印迹的灵敏度。
③IBT法在临床应用中存在一定的局限性：不同分子量的蛋白质出现电泳距离一致的条带；IBT法一般不能检出针对构象依赖表位的抗体，造成某些抗体漏检。

第20题：

第21题：

第22题：

第23题：

第24题：