连接反应

题目

连接反应

相似考题

1.某一质粒载体如图6所示，外源DNA插入到Ampr或Tetr中会导致相应的基因失活 (Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因)。有人将此质粒载体用BamH I酶切后,与用BamH I酶切获得的目的基因混合，加入DNA连接酶进行连接反应，用得到的混合物直接转化大肠杆菌。结果大肠杆菌有的未被转化，有的被转化。被转化的大肠杆菌有三种，分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入目的基因的重组质粒的大肠杆菌。回答下列问题：(1)质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有____(答出两点即可)。而作为基因表达载体，除满足上述基本条件外，还需具有启动子和终止子。 (2)如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选，在上述三种大肠杆菌细胞中，未被转化的和仅含有环状目的基因的细胞是不能区分的，其原因是____；并且含有质粒载体和含有插入了目的基因的重组质粒的细胞也是不能区分的，其原因是____。在上述筛选的基础上，若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落，还需使用含有____的固体培养基。 (3)基因工程中，某些噬菌体经改造后可以作为载体，其DNA复制所需的原料来自____。

2.下列哪些因素对保证较高连接效率是有利的（）A、高纯度DNA。B、载体与目的基因摩尔数之比为1：1。C、载体与目的基因摩尔数之比为1：3~5。D、连接反应体系中DNA浓度较高。E、连接反应体系中DNA浓度较低。

3.常用的DNA连接酶有两种，即（）和（），它们可催化带（）匹配的双链DNA分子之间的连接反应

4.DNA连接反应中的注意事项。

参考答案和解析
正确答案: 在双螺旋DNA单链上，连接缺口处两个相邻碱基形成磷酸二脂键（也可用于连接RNA平末端连接）。
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  • 第1题：

    下列有关连接反应的叙述，错误的是（）

    • A、连接反应的最佳温度为37℃
    • B、连接反应缓冲体系的甘油浓度应低于10%
    • C、连接反应缓冲体系的ATP浓度不能高于1mM
    • D、连接酶通常应过量2-5倍

    正确答案:A

  • 第2题：

    限制酶切割后的产物连接反应效果差，可能原因是（）

    • A、限制酶去除不完全
    • B、平端连接
    • C、核酸外切酶污染
    • D、连接反应温度低于16℃
    • E、从限制酶消化中带来太高浓度的磷酸盐或其他盐类

    正确答案:A,B,C,E

  • 第3题：

    提高重组率的方法包括（I加大外源DNA与载体的分子之比II载体分子除磷III连接酶过量IV延长连接反应时间）（）

    • A、I+II
    • B、I+II+III
    • C、I+III+IV
    • D、II+III+IV

    正确答案:A

  • 第4题：

    DNA连接酶催化的连接反应需要能量，大肠杆菌的能量来源是（），动物细胞则以（）为能源。


    正确答案:NAD+；ATP

  • 第5题：

    下列有关组合化学的说法不正确的是（）

    • A、组合化学方法可以快速合成数量巨大的化合物
    • B、人们已将计算机辅助设计和组合化学合成相结合来设计先导化合物
    • C、利用组合化学合成技术缩短了药物发现的周期
    • D、组合化学以不同的化合物构件单元为组合，连接反应为特征得到了大量的化学实体
    • E、以上都不正确

    正确答案:E

  • 第6题：

    问答题
    DNA连接反应中的注意事项。

    正确答案： （1）连接及反应温度；
    （2）防止粘末端的自身环化应采取以下措施：
    ①控制载体与外源DNA分子的浓度与比例；
    ②用碱性磷酸酶处理载体防止自身环化；
    ③定向克隆；
    （3）用λDNA和科斯质粒的载体时的连接；①λDNA载体应考虑两个参数：插入分子左右臂的比例，两者的浓度；②科斯质粒常用两种方法连接，一种是用碱性磷酸酶处理，另一种是多酶反应进行的克隆。
    解析： 暂无解析

  • 第7题：

    问答题
    连接反应的一般原则是什么？

    正确答案： 为了获得最大效率的连接，反应体系越小越好，一般10μl；
    连接反应中，载体和插入的目的片段的摩尔比一般为1：1或1：3。DNA浓度约为10ng/μl。
    解析： 暂无解析

  • 第8题：

    单选题
    关于DNA复制中连接酶的叙述错误的是（）
    A

    参与随从链的生成

    B

    连接双链中的单链缺口

    C

    催化相邻的DNA片段以3′，5′－磷酸二酯键相连

    D

    连接反应需要ATP参与

    E

    催化相邻的DNA片段以5′，3′－磷酸二酯键相连


    正确答案： B
    解析： 暂无解析

  • 第9题：

    单选题
    一段转化炉辐射段上方猪尾管的主要作用是（）。
    A

    连接反应管与上集气管

    B

    连接反应管与下集气管

    C

    延长反应物的停留时间

    D

    补尝炉管的热膨涨


    正确答案： A
    解析： 暂无解析

  • 第10题：

    名词解释题
    连接反应

    正确答案： 在双螺旋DNA单链上，连接缺口处两个相邻碱基形成磷酸二脂键（也可用于连接RNA平末端连接）。
    解析： 暂无解析

  • 第11题：

    问答题
    影响 DNA连接酶催化连接反应的因素有哪些？

    正确答案： 影响 DNA连接酶催化连接反应的因素有很多，但温度对连接反应的影响较大。黏性末端链通常以 12℃～15℃最好，这种温度有利于末端退火和连接酶的活性稳定。温度高了难以进行末端退火，低于上述温度会降低连接酶的活性。平末端连接以室温为宜，因为平末端连接不存在 DNA的退火问题，但是温度高于 30℃，连接酶特别不够稳定。平末端连接时连接酶的浓度要比黏性末端连接时高 10～100倍。DNA中有残存的 tRNA 不会抑制 DNA连接酶的活性，但是，如果 NaCl 的浓度高于 150mmol／L，则对连接反应有强的抑制作用。 另外反应体系中有 NH4+离子的存在，对 E．coli DNA连接酶具有激活作用E．coliDNA 连接酶需要 NAD+作辅助因子，而 T4DNA连接酶需要 ATP。
    解析： 暂无解析

  • 第12题：

    填空题
    DNA复制时，复制叉进行的半保留复制实际上是半不连续复制，（）链上是连续复制，（）链上是不连续合成的，即先合成出小的DNA片段，称为冈畸片段，然后再在酶的催化下将这些小的片段连接成长链。连接反应需要能量，细菌内以（）为能量来源，动物细胞和某些噬菌体以（）为能量来源。

    正确答案： 前导,后随,NAD+,ATP
    解析： 暂无解析

  • 第13题：

    影响DNA连接酶催化连接反应的因素有哪些？


    正确答案: （1）DNA的纯度
    （2）DNA甲基化的程度
    （3）酶切消化反应的温度
    （4）DNA的分子结构
    （5）核酸内切限制酶的缓冲液

  • 第14题：

    双脱氧末端终止法测定DNA序列是基于（）

    • A、DNA的聚合反应
    • B、DNA的连接反应
    • C、DNA的降解反应
    • D、特殊的DNA连接酶
    • E、聚合单体2’和5’位的脱氧

    正确答案:A

  • 第15题：

    一段转化炉辐射段上方猪尾管的主要作用是（）。

    • A、连接反应管与上集气管
    • B、连接反应管与下集气管
    • C、延长反应物的停留时间
    • D、补尝炉管的热膨涨

    正确答案:D

  • 第16题：

    DNA复制时，复制叉进行的半保留复制实际上是半不连续复制，（）链上是连续复制，（）链上是不连续合成的，即先合成出小的DNA片段，称为冈畸片段，然后再在酶的催化下将这些小的片段连接成长链。连接反应需要能量，细菌内以（）为能量来源，动物细胞和某些噬菌体以（）为能量来源。


    正确答案:前导；后随；NAD+；ATP

  • 第17题：

    下列关于大肠杆菌DNA连接酶的叙述中，正确的是（）。

    • A、需NADP+参与
    • B、连接反应不需要消耗能量
    • C、需NAD+参与
    • D、需ATP供能
    • E、具有5′→3′聚合活性

    正确答案:D

  • 第18题：

    单选题
    下列关于大肠杆菌DNA连接酶的叙述中，正确的是（）。
    A

    需NADP+参与

    B

    连接反应不需要消耗能量

    C

    需NAD+参与

    D

    需ATP供能

    E

    具有5′→3′聚合活性


    正确答案： C
    解析： 暂无解析

  • 第19题：

    单选题
    下列有关组合化学的说法不正确的是（）
    A

    组合化学方法可以快速合成数量巨大的化合物

    B

    人们已将计算机辅助设计和组合化学合成相结合来设计先导化合物

    C

    利用组合化学合成技术缩短了药物发现的周期

    D

    组合化学以不同的化合物构件单元为组合，连接反应为特征得到了大量的化学实体

    E

    以上都不正确


    正确答案： E
    解析： 组合化学是得到先导化合物的一种方法，它是以树脂为载体，以不同的化合物构件单元为组合，连接反应为特征，进行平行、系统、反复的合成，得到了大量的化学实体，构成组合化合物库的合成技术。近年来，人们已将计算机辅助设计和组合化学合成相结合来设计先导化合物，利用组合化学合成技术的快速性缩短了药物发现的周期，所以答案为E。

  • 第20题：

    填空题
    DNA连接酶催化的连接反应需要能量，大肠杆菌的能量来源是（），动物细胞则以（）为能源。

    正确答案： NAD+,ATP
    解析： 暂无解析

  • 第21题：

    填空题
    常用的DNA连接酶有两种，即（）和（），它们可催化带（）匹配的双链DNA分子之间的连接反应

    正确答案： 大肠杆菌DNA连接酶,T4DNA连接酶,粘性末端
    解析： 暂无解析

  • 第22题：

    填空题
    平末端连接法（blunt end ligation）的连接效率比黏性末端连接的效率低得多，所以通常在连接反应体系中适量添加促进大分子凝聚的凝聚剂，以提高平末端 DNA连接的效率。常用的凝聚剂是（）。

    正确答案： PEG8000
    解析： 暂无解析

  • 第23题：

    单选题
    下列有关连接反应的叙述，错误的是（）。
    A

    连接反应的最佳温度为37℃

    B

    连接反应缓冲体系的甘油浓度应低于10%

    C

    连接反应缓冲体系的ATP浓度不能高于1mM

    D

    接酶通常应过量2-5倍


    正确答案： B
    解析： 暂无解析

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