参考答案和解析
正确答案:
解析: 暂无解析
更多“判断题对于重组体的筛选工作来说,DNA测序属于直接筛选法。A 对B 错”相关问题
  • 第1题:

    遗传基因工程的主要内容包括

    A.载体和目的基因的分离

    B.限制性内切酶的切割,并把载体和目的基因合成重组

    C.DNA重组体的转化表达

    D.DNA重组体的扩增、筛选与鉴定


    正确答案:ABCD
    解析:DNA克隆就是应用酶学的方法,在体外将各种来源的遗传物质——同源的或异源的、原核的或真核的、天然的或人工的DNA与载体DNA结合成一具有自我复制能力的DNA分子——复制子,继而通过转化或转染宿主细胞、筛选出含有目的基因的转化子细胞,再进行扩增、提取获得大量同——DNA分子,即DNA克隆。实现基因克隆所采用的方法及相关的工作统称重组DNA技术,又称基因丁程。一个完整的DNA克隆过程应包括:目的基因的获取,基因载体的选择与构建,目的基因与载体的拼接,重组DNA分子导入宿主细胞,筛选并无性繁殖含重组分子的受体细胞(转化子)。

  • 第2题:

    遗传工程的主要内容包括( )

    A.载体和目的基因的制备
    B.限制性内切酶的切割,并把载体和目的基因合成重组体
    C.DNA重组体的转化和表达
    D.DNA重组体的扩增、筛选与鉴定

    答案:A,B,C,D
    解析:

  • 第3题:

    重组DNA技术大致可以用以下几个字简单概括:分(目的基因的分离)、切(限制性内切酶切割目的基因和载体)、接(目的基因和载体连接)、转(连接产物导入受体细胞)、筛(筛选阳性重组子)。重组DNA技术中最常用的筛选方法是()

    • A、标志补救筛选
    • B、插入表达筛选
    • C、抗性筛选
    • D、限制性内切酶酶切图谱分析
    • E、核酸分子杂交筛选

    正确答案:C

  • 第4题:

    简单说明DNA重组技术中的蓝白斑筛选原理。


    正确答案: 蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法:是根据载体的遗传特征筛选重组子,如α-互补、抗生素基因等。现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段,其中有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。在这个编码区中插入了一个多克隆位点(MCS),它并不破坏读框,但可使少数几个氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影响功能,这种载体适用于可编码β-半乳糖苷酶C端部分序列的宿主细胞。因此,宿主和质粒编码的片段虽都没有酶活性,但它们同时存在时,可形成具有酶学活性的蛋白质。这样,lacZ基因在缺少近操纵基因区段的宿主细胞与带有完整近操纵基因区段的质粒之间实现了互补,称为α-互补。
    由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG的作用下,在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落,因而易于识别。然而,当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后,几乎不可避免地导致无α-互补能力的氨基端片段,使得带有重组质粒的细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选,又称为蓝白斑筛选。如用蓝白斑筛选则经连接产物转化的钙化菌平板37℃温箱倒置培养12-16hr后,有重组质粒的细菌形成白色菌落。

  • 第5题:

    DNA重组的顺序是()①用连接酶将外源DNA与载体连接。②培养细胞以扩增重组DNA。③通过转化将重组DNA引入受体细胞。④筛选出含有重组体的克隆。

    • A、①②③④
    • B、①④②③
    • C、①③②④
    • D、④①③②

    正确答案:C

  • 第6题:

    DNA重组中用来筛选的方法有().

    • A、PCR法
    • B、平板筛选法
    • C、原位杂交技术
    • D、人工检验法

    正确答案:A,B,C

  • 第7题:

    如何筛选重组体?


    正确答案: (1)抗药性筛选
    这是利用载体DNA上组装的抗药性选择标记进行筛选的方法。
    常用的抗生素筛选剂:氨苄青霉素(ampicillin,Ap或Amp);氯霉素(chloramphenicol,Cm或Cmp);卡那霉素(kanamycin,Kn或Kan);四环素(tetracymic,Tc或Tet);链霉素(strentomycin,Sm或Str)。
    (2)插入失活筛选法
    检测克隆载体携带有外源DNA的通常方法是插入失活。经过抗药性筛选获得的大量转化子中既包含所需要的重组子,也包含非重组子。为了进一步筛选出重组子,可利用质粒载体的抗药性进行再次筛选。
    (3)插入表达筛选法
    与插入失活相反,插入表达法是外源目的基因插入特定载体后,能激活用于筛选操作的标记基因的表达,由此进行转化子的筛选。设计载体时,在筛选标记基因前面连接一段具有抑制作用的负调控序列,插入外源DNA将使该负调控序列失活,其下游的筛选标记基因才能表达。
    (4)环丝氨酸筛选
    这种筛选方法只使用于抗四环素的基因插入失活的重组克隆筛选。
    (5)显色反应筛选法
    显色反应可以在平板上或膜上直接显示出重组克隆,不仅方便而且灵敏。

  • 第8题:

    判断题
    对于重组体的筛选工作来说,DNA测序属于直接筛选法。
    A

    B


    正确答案:
    解析: 暂无解析

  • 第9题:

    填空题
    PCR 扩增筛选重组体是比较简便的筛选方法,它适合于()。

    正确答案: 插入外源片段的种类较多,大小又极为相似的重组体的筛选
    解析: 暂无解析

  • 第10题:

    多选题
    重组DNA技术包括()
    A

    制备目的基因DNA片段

    B

    将目的基因与载体相连

    C

    将重组DNA导入受体细胞

    D

    筛选和鉴定DNA重组体

    E

    去除载体


    正确答案: D,E
    解析: 暂无解析

  • 第11题:

    单选题
    重组DNA技术大致可以用以下几个字简单概括:分(目的基因的分离)、切(限制性内切酶切割目的基因和载体)、接(目的基因和载体连接)、转(连接产物导入受体细胞)、筛(筛选阳性重组子)。重组DNA技术中最常用的筛选方法是()
    A

    标志补救筛选

    B

    插入表达筛选

    C

    抗性筛选

    D

    限制性内切酶酶切图谱分析

    E

    核酸分子杂交筛选


    正确答案: E
    解析: 暂无解析

  • 第12题:

    判断题
    用免疫化学法筛选重组体不需要外源基因的表达。
    A

    B


    正确答案:
    解析: 暂无解析

  • 第13题:

    对于重组体的筛选,属直接选择法的有

    A.免疫化学法
    B. Southern 印迹
    C.酶联免疫法
    D.标志补救

    答案:B,D
    解析:

  • 第14题:

    如何筛选与鉴定重组体?


    正确答案: 鉴定
    (1)报告基因的检测法
    (2)目的基因分子杂交检测方法
    筛选:
    在利用载体间接转化外源基因或直接转化处理之后,大部分受体细胞是没有被转化的,这就需要采用特定的方法将转化细胞与未转化细胞区分开来。为了淘汰未转化的细胞,人们试验了各种不同的基因作为转化的报告基因(reporter gene),包括一些显性的选择标记基因,以及可用特定方法检测其蛋白质产物的基因。其中GUS基因和NPTII基因能耐受氨基末端融合、检测简单,是目前应用最多的报告基因。在植物基因工程中双子叶植物如番茄、辣椒、马铃薯的转化及部分单子叶植物的转化用NPTII基因所抗的卡那霉素(kanamycin)来筛选。

  • 第15题:

    重组DNA技术包括()

    • A、制备目的基因DNA片段
    • B、将目的基因与载体相连
    • C、将重组DNA导入受体细胞
    • D、筛选和鉴定DNA重组体
    • E、去除载体

    正确答案:A,B,C,D

  • 第16题:

    基因克隆主要分为以下几个步骤()。

    • A、制备目的基因和相关载体
    • B、将目的基因和有关载体进行连接
    • C、将重组的DNA导入受体细胞
    • D、DNA重组体的筛选和鉴定
    • E、DNA重组体的扩增和表达

    正确答案:A,B,C,D,E

  • 第17题:

    概述筛选和鉴定DNA重组体的常用方法。


    正确答案:在转基因操作以后,载体只能进入部分宿主细胞,即使含有载体的细胞,也并非都含有目的基因,有些宿主细胞可能含有自身连接成环的载体分子或非目的基因与载体形成的重组体。因此,须在不同层次不同水平上进行筛选和鉴定,以确定哪一菌落所含的重组DNA分子确实带有目的基因,这一过程为筛选。根据载体体系、宿主细胞特性及外源基因在受体细胞表达情况的不同,可采用:
    (1)直接选择法:针对载体携带某种或某些标志基因和目的基因,直接测定该基因或基因表型的方法。a.抗药标志的筛选:载体具有某种抗生素的抗性基因,在转化后只有含载体的细菌才能在含该抗生素的培养平板上生长并形成单菌落,而未转化细胞则不能生长,这样即可将转化菌与非转化菌区别开来。b.插入失活法:将目的基因插入载体某一耐药基因内使该基因失活,可区分单纯载体或重组载体(含目的基因)的转化菌落。如pBR322含ampr、Tetr双抗药基因,若将目的基因插入载体的Tetr基因中,则含目的基因的转化细胞只能在含Amp的培养液中生长,而不能在含Tet的培养液中生长。c.标志补救:若克隆的基因能在宿主菌表达,且表达产物与宿主菌的营养缺陷互补,那么就可以利用营养突变菌株进行筛选,这称为标志补救。如重组体为亮氨酸自养型(Leu+),将重组子导入亮氨酸异养型(Leu-)的宿主细胞后,在不含Leu的培养液中可生长,而不含重组体的细胞则不能生长。 -互补法筛选(见43题)也是一种标志补救选择方法。d.酶切图谱筛选:分别挑取独立的菌落,培养后快速提取重组体DNA,用重组时所采用的限制酶切割后,进行琼脂糖凝胶电泳,可以从DNA片段的大小和有无判断所选的菌落是否为阳性克隆。e.核酸杂交筛选:将转化子DNA或克隆的DNA分子片段转移至合适的膜上,利用标记探针进行杂交,直接选择并鉴定目的基因。f.原位杂交筛选:是将待选菌在平板上培养成菌落,按相应位置(原位)转移至合适的膜上,经变性使膜上的DNA成单链,再与标记的探针(与目的基因互补)杂交,找出平板上的菌落位置,即为重组的阳性菌落。
    (2)免疫学方法筛选:利用特异抗体与目的基因表达产物的特异相互作用进行筛选。这种方法不直接鉴定基因,属非直接筛选法。分为免疫化学方法及酶联免疫检测分析等。基本的工作原理是将琼脂培养板上的转化子菌落经氯仿蒸汽裂解、释放抗原,再将固定有抗血清的膜覆盖在裂解菌落上,在膜上得到抗原抗体复合物,最后用合适的方法检出阳性反应菌落。

  • 第18题:

    简述重组DNA的筛选与鉴定中蓝-白斑筛选的原理。


    正确答案:它是一种利用蓝色化合物的形成作为指示剂的筛选方法,筛选含有编码β-半乳糖苷酶的基因。当在质粒中插入外源DNA→β-半乳糖苷酶的N端基因失活→不能与宿主β-半乳糖苷酶的C端进行α-互补→产生白色菌落。

  • 第19题:

    下列能区分期望重组子的筛选方法是()

    • A、抗药性筛选法
    • B、营养缺陷筛选法
    • C、显色筛选法
    • D、次级克隆法
    • E、菌落原位杂交法

    正确答案:E

  • 第20题:

    判断题
    以λ噬菌体为载体的筛选方法比较简便,凡能形成噬菌斑的就一定是重组体。
    A

    B


    正确答案:
    解析: 暂无解析

  • 第21题:

    单选题
    根据重组DNA的结构特征进行筛选重组子时,下列说法错误的是( )
    A

    限制性内切酶图谱分析 

    B

    重组DNA快速裂解 

    C

    核酸分子杂交 

    D

    核酸分子测序 

    E

    PCR


    正确答案: E
    解析: 暂无解析

  • 第22题:

    多选题
    DNA重组中用来筛选的方法有().
    A

    PCR法

    B

    平板筛选法

    C

    原位杂交技术

    D

    人工检验法


    正确答案: A,C
    解析: 暂无解析

  • 第23题:

    问答题
    概述筛选和鉴定DNA重组体的常用方法。

    正确答案: 在转基因操作以后,载体只能进入部分宿主细胞,即使含有载体的细胞,也并非都含有目的基因,有些宿主细胞可能含有自身连接成环的载体分子或非目的基因与载体形成的重组体。因此,须在不同层次不同水平上进行筛选和鉴定,以确定哪一菌落所含的重组DNA分子确实带有目的基因,这一过程为筛选。根据载体体系、宿主细胞特性及外源基因在受体细胞表达情况的不同,可采用:
    (1)直接选择法:针对载体携带某种或某些标志基因和目的基因,直接测定该基因或基因表型的方法。a.抗药标志的筛选:载体具有某种抗生素的抗性基因,在转化后只有含载体的细菌才能在含该抗生素的培养平板上生长并形成单菌落,而未转化细胞则不能生长,这样即可将转化菌与非转化菌区别开来。b.插入失活法:将目的基因插入载体某一耐药基因内使该基因失活,可区分单纯载体或重组载体(含目的基因)的转化菌落。如pBR322含ampr、Tetr双抗药基因,若将目的基因插入载体的Tetr基因中,则含目的基因的转化细胞只能在含Amp的培养液中生长,而不能在含Tet的培养液中生长。c.标志补救:若克隆的基因能在宿主菌表达,且表达产物与宿主菌的营养缺陷互补,那么就可以利用营养突变菌株进行筛选,这称为标志补救。如重组体为亮氨酸自养型(Leu+),将重组子导入亮氨酸异养型(Leu-)的宿主细胞后,在不含Leu的培养液中可生长,而不含重组体的细胞则不能生长。 -互补法筛选(见43题)也是一种标志补救选择方法。d.酶切图谱筛选:分别挑取独立的菌落,培养后快速提取重组体DNA,用重组时所采用的限制酶切割后,进行琼脂糖凝胶电泳,可以从DNA片段的大小和有无判断所选的菌落是否为阳性克隆。e.核酸杂交筛选:将转化子DNA或克隆的DNA分子片段转移至合适的膜上,利用标记探针进行杂交,直接选择并鉴定目的基因。f.原位杂交筛选:是将待选菌在平板上培养成菌落,按相应位置(原位)转移至合适的膜上,经变性使膜上的DNA成单链,再与标记的探针(与目的基因互补)杂交,找出平板上的菌落位置,即为重组的阳性菌落。
    (2)免疫学方法筛选:利用特异抗体与目的基因表达产物的特异相互作用进行筛选。这种方法不直接鉴定基因,属非直接筛选法。分为免疫化学方法及酶联免疫检测分析等。基本的工作原理是将琼脂培养板上的转化子菌落经氯仿蒸汽裂解、释放抗原,再将固定有抗血清的膜覆盖在裂解菌落上,在膜上得到抗原抗体复合物,最后用合适的方法检出阳性反应菌落。
    解析: 暂无解析

  • 第24题:

    单选题
    DNA重组的顺序是()①用连接酶将外源DNA与载体连接。②培养细胞以扩增重组DNA。③通过转化将重组DNA引入受体细胞。④筛选出含有重组体的克隆。
    A

    ①②③④

    B

    ①④②③

    C

    ①③②④

    D

    ④①③②


    正确答案: C
    解析: 暂无解析