问答题免疫印迹法原理和需注意问题。
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免疫印迹法原理和需注意问题。
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第1题：
HIV抗体确认试验为A:酶联免疫法
B:乳胶凝集法
C:胶体金免疫层析法
D:荧光免疫法
E:免疫印迹答案：E解析：免疫印迹法可同时检测多种抗体(gp41、gp120、gp60、p24)，阳性标准为至少两条显色(gp41/gp120/gp60)或至少1条同时与P24同时出现。 -
第2题：
A.免疫层析试验
B.酶联免疫斑点试验
C.斑点酶免疫吸附试验
D.放射免疫沉淀试验
E.免疫印迹法弥补了免疫印迹法不足的试验是答案：D解析：Dot-ELISA的优点为：NC膜吸附蛋白力强，微量抗原吸附完全，故检出灵敏度可较普通ELISA高6～8倍；试剂用量较ELISA节约约10倍；吸附抗原（抗体）或已有结果的NC膜可长期保存（-20℃可长达6个月），不影响其活性。ELISPOT技术应用领域非常广泛，如移植中排斥反应的预测、疫苗发展、Th1/Th2分析、自身免疫病研究、肿瘤研究、过敏性疾病研究、感染性疾病研究、抗原决定簇图谱分析、化合物和药物免疫学反应的筛选等。IBT法不仅广泛应用于分析抗原组分及其免疫活性，并可用于疾病的诊断。RIPA是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法，是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法，同时弥补了免疫印迹法的不足。 -
第3题：
酶联免疫吸附实验常用的方法有（）。
- A、直接法、间接法、夹心法、竞争抑制法
- B、直接法、沉淀法、印迹法、竞争抑制法
- C、直接法、间接法、夹心法、免疫扩散法
- D、直接法、间接法、印迹法、免疫扩散法
- E、直接法、沉淀法、印迹法、免疫抑制法
正确答案:A -
第4题：
HIV抗体蛋白印迹法确证试剂的原理。
正确答案:抗原多为全病毒裂解抗原，用SDS-PAGE按其分子量大小进行分离，然后通过电转移法将凝胶中的HIV蛋白转移至硝酸纤维薄膜上，再将这些硝酸纤维薄膜制备成试剂条用于实验。这类试剂的抗原条带全，包括膜区抗原gp160、gp120和gp41，核心抗原p55、p24和p17，聚合酶抗原p66、p51和p31，另外还有HIV-2型特异性抗原。 -
第5题：
简述蛋白质免疫印迹法的基本原理和主要操作步骤。
正确答案: 蛋白质印迹法又称蛋白质免疫印迹法，是20世纪70年代末80年代初在蛋白质凝胶电泳和固相免疫测定的基础上发展起来的蛋白质检测技术，为检测样品中是否存在蛋白质抗原提供了一种可靠的方法。该法鉴定蛋白质的原理是根据被测蛋白能与特定抗体的结合特性和该蛋白的相对分子质量。
免疫印迹法程序可分为5个步骤：
（1）蛋白样品的制备；
（2）经过SDS-PAGE分离样品；
（3）分离的蛋白转移到膜载体上，转移后首先将膜上未反应的位点封闭起来以抑制抗体的非特异性吸附；
（4）用固定在膜上的蛋白质作为抗原，与对应的非标记抗体（一抗）结合；
（5）洗去未结合的一抗，加入酶耦联或放射性同位素标记的二抗，通过显色或放射性自显影法检测凝胶中的蛋白成分。 -
第6题：
单选题HIV抗体确认试验为（）A酶联免疫法
B乳胶凝集法
C胶体金免疫层析法
D荧光免疫法
E免疫印迹
正确答案： D解析： 免疫印迹法可同时检测多种抗体（gp41、gp120、gp60、p24），阳性标准为至少两条显色（gp41／gp120/gp60）或至少1条同时与P24同时出现。 -
第7题：
问答题叙述免疫印迹法的原理。正确答案： 按三个步骤来完成。第一阶段是SDS-PAGE，抗原在聚丙酰胺凝胶中从阴极向阳极移动；第二阶段为转印，将凝胶中已分离的条带转移至硝酸纤维素膜上，继续在电场下作用；第三阶段为显色定位，将印有蛋白质条带的硝酸纤维素膜依次与特异性抗体、酶标二抗和酶反应底物作用，显色可辨的阳性反应条带。解析： 暂无解析 -
第8题：
问答题试述模糊综合评价分析法的优点及应用中需注意的问题。正确答案： （1）模糊综合评价法的优点：
由于模糊综合评价结果是以向量的形式出现的，而不是一个具体的数值点，从而可以较为准确地反映事物本身的模糊状况。它既可以用于主观指标的综合评价，也可以用于客观指标的综合评价，特别是在主观指标的综合评价中，模糊综合评价法的评价效果要比其他评价方法优越，因此得到了较为广泛的应用。
（2）在应用模糊综合评价法时需要注意以下几个问题：
首先，模糊综合评价过程本身并不能解决评价指标间相关造成的评价信息重复问题。因而在运用此方法前指标的预选处理特别重要，唯有如此才能将相关程度较大的指标删去，以保证评价结果的准确性。其次，由于指标的权重大多是人为确定的，包含了较大的主观随意性；因此要充分反映客观实际，需要很好地把握。最后，对各被评价对象的指标信息量考虑不够，有可能影响评价结果的区分度。解析： 暂无解析 -
第9题：
填空题免疫印迹法是由_________、_________和_________三项技术结合而成。正确答案： SDS-PAGE蛋白质转印,酶免疫测定解析： 暂无解析 -
第10题：
问答题简述Southern印迹杂交的原理和方法。正确答案： Southern印迹杂交是1975年Southern建立起来的一种杂交方法，属固相-液相杂交。该法的主要特点是利用毛细现象将DNA转移到固体支持物上，称为Southern转移或Southern印迹（Southernblot）。它首先用合适的限制性内切核酸酶将DNA切割，进行电泳分离后，利用干燥的吸水纸产生毛细作用，使液体经过凝胶，从而使DNA片段由液流携带从凝胶转移并结合在固体支持物表面，在通过和探针杂交来检测固体支持物表面的DNA。解析： 暂无解析 -
第11题：
问答题运用谈话法需注意的问题有哪些？正确答案： 根据调查目的，准备好谈话的计划、提纲，拟定好适宜的谈话问题；注意营造宽松自然的谈话氛围，取得被访问者的信任；预先尽可能对被访者的一些具体情况有所了解，以便采适当方法；谈话的问题要简单明白，易于回答。解析： 暂无解析 -
第12题：
问答题HIV抗体蛋白印迹法确证试剂的原理。正确答案： 抗原多为全病毒裂解抗原，用SDS-PAGE按其分子量大小进行分离，然后通过电转移法将凝胶中的HIV蛋白转移至硝酸纤维薄膜上，再将这些硝酸纤维薄膜制备成试剂条用于实验。这类试剂的抗原条带全，包括膜区抗原gp160、gp120和gp41，核心抗原p55、p24和p17，聚合酶抗原p66、p51和p31，另外还有HIV-2型特异性抗原。解析： 暂无解析 -
第13题：
总抗核抗体筛选试验常采用A、ELISA法
B、放免法
C、免疫印迹法
D、间接免疫荧光法
E、免疫双扩散法答案：D解析：总抗核抗体筛选试验所采用的方法主要是间接免疫荧光法。 -
第14题：
简述免疫印迹法的原理。
正确答案: 免疫印迹法亦称为Westemblot，由SDS-PAGE、蛋白质转印和酶免疫测定三项技术结合而成。抗原等蛋白样品经SDS处理后带负电荷，SDS-PAGE时从阴极向阳极泳动，分子量小者，泳动速度快；然后将凝胶中已经分离的蛋白质条带在电场作用下转移至硝酸纤维素膜上；最后将印有蛋白质条带的硝酸纤维素膜依次与特异性抗体和酶标第二抗体作用，加λ能形成不溶性显色物的酶反应底物，使区带染色；根据电泳时加λ的分子量标准，可确定各组分的分子量。 -
第15题：
免疫印迹法是由_________、_________和_________三项技术结合而成。
正确答案:SDS-PAGE蛋白质转印；酶免疫测定 -
第16题：
测定细胞内细胞因子的方法是（）
- A、ELISA
- B、ELISPOT
- C、免疫荧光法
- D、Northern印迹法
- E、Southern印迹法
正确答案:B -
第17题：
免疫印迹法原理和需注意问题。
正确答案:免疫印迹法是在蛋白质电泳分离和抗原抗体检测的基础上发展起来一项检测蛋白质的技术，它将SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的高分辨力与抗原抗体反应的特异性相结合，其操作可分成三个阶段：
第一阶段为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PACE）；第二阶段为电转移；第三阶段为酶免疫定位。
需注意问题：
①许多单克隆抗体不能与变性抗原反应，因此免疫印迹实验中常选用多克隆抗体。
②在电泳之前应用免疫沉淀法将抗原进行纯化和浓缩可提高免疫印迹的灵敏度。
③IBT法在临床应用中存在一定的局限性：不同分子量的蛋白质出现电泳距离一致的条带；IBT法一般不能检出针对构象依赖表位的抗体，造成某些抗体漏检。 -
第18题：
问答题简述蛋白质免疫印迹法的基本原理和主要操作步骤。正确答案： 蛋白质印迹法又称蛋白质免疫印迹法，是20世纪70年代末80年代初在蛋白质凝胶电泳和固相免疫测定的基础上发展起来的蛋白质检测技术，为检测样品中是否存在蛋白质抗原提供了一种可靠的方法。该法鉴定蛋白质的原理是根据被测蛋白能与特定抗体的结合特性和该蛋白的相对分子质量。
免疫印迹法程序可分为5个步骤：
（1）蛋白样品的制备；
（2）经过SDS-PAGE分离样品；
（3）分离的蛋白转移到膜载体上，转移后首先将膜上未反应的位点封闭起来以抑制抗体的非特异性吸附；
（4）用固定在膜上的蛋白质作为抗原，与对应的非标记抗体（一抗）结合；
（5）洗去未结合的一抗，加入酶耦联或放射性同位素标记的二抗，通过显色或放射性自显影法检测凝胶中的蛋白成分。解析： 暂无解析 -
第19题：
单选题弥补了免疫印迹法不足的试验是（）A免疫层析试验
B酶联免疫斑点试验
C斑点酶免疫吸附试验
D放射免疫沉淀试验
E免疫印迹法
正确答案： B解析： Dot-ELISA的优点为：NC膜吸附蛋白力强，微量抗原吸附完全，故检出灵敏度可较普通ELISA高6～8倍；试剂用量较ELISA节约约10倍；吸附抗原(抗体)或已有结果的NC膜可长期保存(-20℃可长达6个月)，不影响其活性。ELISPOT技术应用领域非常广泛，如移植中排斥反应的预测、疫苗发展、Th1/Th2分析、自身免疫病研究、肿瘤研究、过敏性疾病研究、感染性疾病研究、抗原决定簇图谱分析、化合物和药物免疫学反应的筛选等。IBT法不仅广泛应用于分析抗原组分及其免疫活性，并可用于疾病的诊断。RIPA是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法，是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法，同时弥补了免疫印迹法的不足。 -
第20题：
问答题什么是Western免疫印迹？它与Southern印迹有什么不同？正确答案： Western免疫印迹是将蛋白质经电泳分离后从凝胶中转移到固相支持物上，然后用特异性的抗体进行检测。它与Southern的不同在于探针的性质不同，在Western免疫印迹中使用的探针是抗体（蛋白质）。解析： 暂无解析 -
第21题：
问答题Southern印迹杂交、Northern印迹杂交及Western免疫印迹彼此之间有哪些不同？正确答案： （1）检测目标物质不同：Southern印迹杂交检测的是DNA，Northern印迹杂交检测是RNA，Western免疫印迹杂交检测的是蛋白质。
（2）所用凝胶不同：Southern印迹杂交和Northern印迹杂交用的是琼脂糖凝胶，而Western免疫印迹用的是SDS-聚丙烯酰胺凝胶。
（3）是否变性电泳不同：Southern印迹杂交是跑非变性琼脂糖凝胶电泳，电泳之后在凝胶上用NaOH处理使DNA变性，然后转印；Northern印迹杂交实在电泳上样前用甲基氢氧化银、乙二醛或甲醛使RNA变性，而不用NaOH，因为它会水解RNA的2’-OH；Western免疫印迹则是跑变性的聚丙烯酰胺电泳或非变性的聚丙烯酰胺电泳。
（4）探针不同：Southern印迹杂交、Northern印迹杂交的探针是单链的DNA或RNA，而Western免疫印迹用的探针是特异性抗体蛋白质，而非核酸。解析： 暂无解析 -
第22题：
填空题免疫印迹法常用于____的检测和____的鉴定。正确答案：解析： -
第23题：
问答题试论因素分析法的基本程序及运用时需注意的问题。正确答案：解析：