酵母双杂交系统

第1题：

第2题：

第3题：

目前研究蛋白质间相互作用最常采用的方法是（）。

• A、质谱分析
• B、二维凝胶电泳
• C、酵母双杂交技术
• D、DNase I 足纹分析

正确答案:C

第4题：

酵母双杂交系统研究蛋白质相互作用需要分离靶蛋白。

正确答案:错误

第5题：

简述酵母双杂交系统的优缺点。

正确答案: 酵母双杂交系统所具有的优点：①蛋白质作为被研究的对象不用被纯化；②检测在活细胞内进行，可以在一定程度上反映体内（细胞内）的真实情况；③由于这一系统可以反映基因表达产物的累积效应，因而可检测存在于蛋白质之间微弱或短暂的相互作用；④采用不同组织、器官、细胞类型和分化时期材料构建cDNA文库，可用于分析多种不同功能的蛋白。
局限性：①双杂交系统分析蛋白间的相互作用定位于细胞核内，而许多蛋白间的相互作用依赖于翻译后加工如糖基化、二硫键形成等，这些反应在核内无法进行。②由于某些蛋白本身具有激活转录功能或在酵母中表达时发挥转录激活作用，从而引起报告基因的表达，产生“假阳性”结果。③双杂交只是反映蛋白质间能发生作用的可能性，这种可能还必须经过其他实验验证，尤其要与生理功能研究相结合，否则可能会误入歧途。

第6题：

简述利用“酵母双杂交系统”可以研究蛋白质间的相互作用中的内容。

正确答案: 真核生物的转录因子可以分为两部分，Binding Domain和Activated Domain。Binding Domain负责结合在DNA上，Binding Domain负责激活转录。二者都是相互独立的区域，但二者单独都不能有转录活性，必须结合在一起或相互靠近在一起才有活性。
在研究蛋白质相互作用中，将一种蛋白质的基因连接在Binding Domain上，将另一种蛋白质的基因结合在Binding Domain上，蛋白质基因表达后就与转录因子的两个Domain分别结合，两个蛋白质因相互作用而结合在一起，进而使Binding Domain和Activated Domain相互靠近在一起，从而形成具有转录活性的转录因子。在欲表达的基因区域连上报告基因，通过报告基因的表达与否，就可判断蛋白质之间是否发生了相互作用。

第7题：

第8题：

第9题：

第10题：

第11题：

第12题：

第13题：

第14题：

酵母双杂交系统（两个Pr相互作用）的原理是什么？一般由哪几部分组成？

正确答案: 原理：在这一系统中，与诱饵蛋白融合的DNA-BD（DNA结合域）和与文库猎物蛋白融合的AD（转录激活域）均来自GAL4相应的结构域.将诱饵蛋白与猎物蛋白的编码质粒分别导入同一个GAL4缺失的酵母细胞中，通过两种相互作用蛋白结合形成复合物，可以重建GAL4的活性，转录激活相应的效应基因。
三个基本组成部分：
1.编码靶蛋白与DNA结合域融合蛋白的表达质粒.这种靶蛋白在双杂交系统中专称诱饵蛋白；
2.cDNA质粒表达文库，文库cDNA表达出的蛋白与转录激活域形成融合蛋白，这些蛋白统称为猎物蛋白；
3.能反映出体内转录因子活性重建的宿主酵母菌及体现出这种活性的报道基因系统。

第15题：

酵母双杂交体系常常出现假的阳性结果，应该如何正确判读得到的结论呢？

正确答案: 1.用不同的报道基因系统的双杂交实验来重复筛选
2.通过在体外检测诱饵蛋白与猎物蛋白在体外的相互作用情况，如免疫共沉淀
3.基于生物学知识判断两蛋白是否会在生物细胞中发生相互作用
4.查询前人是使用酵母双杂交系统时总结的经验

第16题：

酵母双杂交系统被用来研究（）。

• A、真核生物基因表型分析
• B、酵母基因的功能分析
• C、蛋白质的相互作用
• D、蛋白质和DNA的相互作用

正确答案:C

第17题：

酵母双杂交系统

正确答案: 是将待研究的两种蛋白质的基因分别克隆到酵母表达质粒的转录激活因子（如GAL4等）的DNA结合结构域基因和GAL4激活结构域基因，构建成融合表达载体，从表达产物分析两种蛋白质相互作用的系统。

第18题：

第19题：

第20题：

第21题：

第22题：

第23题：

第24题：