简述多重PCR。

第1题：

第2题：

能对未知序列进行扩增的PCR是（）

• A、多重PCR
• B、巢式PCR
• C、原位PCR
• D、反向PCR
• E、不对称PCR

正确答案:D

第3题：

对于极微量的靶序列的扩增可以采用下列哪种PCR技术？（）

• A、AP-PCR方法（arbitrarily  primed  PCR）
• B、通用引物-PCR方法（general  primer-mediated  PCR，GP-PCR）
• C、套式PCR（nested  primers-polymerase  chainreaction，NP-PCR）
• D、多重PCR（multiplexPCR）
• E、原位PCR技术（in  situ PCR，ISPCR）

正确答案:C

第4题：

能检测目的基因片段缺失的PCR方式为（）。

• A、筑巢PCR
• B、多重PCR
• C、原位PCR
• D、不对称PCR
• E、反向PCR

正确答案:B

第5题：

简述容错PCR定义。

正确答案: 是指在利用Taq聚合酶进行目的基因的PCR扩增的同时引入碱基错配，导致目的基因随机突变的一种DNA体外进化技术。

第6题：

简述PCR及其临床应用。

正确答案:聚合酶链反应（PCR）：利用DNA聚合酶（如TagDNA聚合酶）等在体外条件下，催化一对引物间的特异DNA片段合成的基因体外扩增技术。引物：单链DNA片段。过程：变性DNA双链-单链（93～98℃），退火引物与模板结合（37～65℃），延伸双链合成（70～75℃）。常见PCR技术的类型：原位PCR、逆转录PCR（RT-PCR）及定量RT-PCR、反向PCR、PCR-SSCP、PCR-ELISA.固相锚定PCR、mRNA差异显示逆转录PCR。PCR的应用：（1）在感染性疾病中的应用：对传染性疾病进行病原学确证诊断；对病原体进行基因分型和同源性比较；克隆病原体各种蛋白质的基因，用于蛋白表达，制备诊断试剂或疫苗；发现新病原体；克隆病原体各种基因，建立基因表达载体，用于基因治疗。（2）遗传性疾病的基因诊断：发现的遗传病有4000多种；产前诊断PCR-RFLP；PCR-ASO。（3）肿瘤的研究及诊断：癌基因与抑癌基因。（4）在法医学中的应用：个人认识；亲子鉴定。（5）其他应用：DNA克隆；引入点突变、缺失或插入；重组PCR；DNA测序；示差PCR。

第7题：

对于极微量的靶序列的扩增可以采用的PCR技术是（）

• A、通用引物-PCR方法（generalprimer-media-tedPCR，GP-PCR）
• B、多重PCR（multiplexPCR）
• C、套式PCR（nestedprimers-polymerasechainreaction，NP-PCR）
• D、AP-PCR方法（arbitrarilyprimedPCR）
• E、原位PCR技术（insituPCR，ISP（R）

正确答案:C

第8题：

第9题：

第10题：

第11题：

第12题：

第13题：

苯丙酮尿症常用的分子诊断检测方法：（）

• A、PCR-STR
• B、PCR-SSCP
• C、PCR-DGGE
• D、PCR-RFLP
• E、多重ASPCR

正确答案:A,B,C,D,E

第14题：

对于极微量的靶序列的扩增可以采用的PCR技术是（）

• A、通用引物－PCR方法（general primermediated  PCR，CJP－PCR）
• B、多重PCR（multiplexPCR）
• C、套式PCR（nestcdprimers－polymerasc  chain reaction，NP－PCR）
• D、AP－PCR方法（arbitrarily primcdPCR）
• E、原位PCR技术（in situPCR，ISPCR）

正确答案:C

第15题：

检测RNA病毒的分子生物学方法是（）

• A、反转录PCR（RT-PCR）
• B、套式PCR（NestedPCR）
• C、多重PCR（MultiplexPCR）
• D、任意引物PCR（ArbitrarilyPrimedPCR）
• E、限制性片段长度多态性（RFLP）分析

正确答案:A

第16题：

对于极微量的靶序列的扩增可以采用的PCR技术是（）

• A、通用引物-PCR方法(general primer-media-ted PCR，GP-PCR)
• B、多重PCR(multiplex PCR)
• C、套式PCR(nested primers-polymerase chain reaction，NP-PCR)
• D、AP-PCR方法(arbitrarily primed PCR)
• E、原位PCR技术(in situ PCR，ISPCR)

正确答案:C

第17题：

多重PCR

正确答案:多重PCR：是在一次反应中加入多种引物，同时扩增一份DNA样品中的不同序列。每对引物所扩增的产物序列长短不一。根据不同长短的序列存在与否，检测是否有某些基因片断的缺失与突变。多重PCR对于检测疾病相关基因十分庞大的疾病很有价值。

第18题：

简述易错PCR技术与常规PCR技术的异同点。

正确答案:易错PCR技术是从酶的单一基因出发，在改变反应条件的情况下进行聚合酶链反应（PCR），使扩增得到的基因出现碱基配对错误，而引起基因突变的技术过程。
易错PCR技术与常规PCR技术有很多相同之处，都是用DNA聚合酶为催化剂，使用四种脱氧核苷三磷酸为底物，都要添加镁离子，其操作过程也相同，都经过双链DNA的变性、引物与单链DNA退火结合、引物延伸三个步骤。
（1）双链DNA的变性（解链）：将待扩增的模板DNA升温至85~95℃，使DNA双链之间的氢键断开，解离为单链DNA。
（2）引物与单链DNA退火结合：单链DNA在温度逐步降低至50~70℃时，会与其碱基互补的引物结合形成双链，引物是经过设计后人工合成的与模板DNA某一片段互补的寡核苷酸链，长度为15~30个碱基。
（3）引物延伸：引物结合后，将温度升高至70~75℃，在DNA聚合酶的作用下，以引物为起点，以四种脱氧核苷三磷酸为底物，以目标DNA链为模板，按照碱基配对原则，由5′-端向3′-端的方向延伸，而进行DNA复制。以上三个步骤反复进行，一般经过30次循环，即可使目的基因扩增几百万倍。
易错PCR技术与常规PCR技术的主要不同点在于反应条件有所不同。
（1）在易错PCR中镁离子浓度较高：常规PCR扩增时，镁离子浓度为0.5~2.5mmol/L，进行易错PCR时，在原有基础上提高镁离子的浓度，以稳定非互补的碱基对。
（2）在易错PCR中可以添加一定浓度的锰离子，以降低聚合酶对模板的特异性，而常规PCR不用添加锰离子。
（3）在易错PCR中四种底物（dATP、dTTP、dCTP、dGTP）的浓度比改版，即采用浓度不平衡的各种底物，是DNA聚合酶在催化基因扩增时，碱基配对错误的出现频率增加，而容易引起基因突变。

第19题：

简述PCR原理。

正确答案:PCR是在体外扩增DNA序列的方法，原理并不复杂，首先将双链DNA分子在邻近沸点的温度下加热分离成两条单链DNA分子，DNA聚合酶以单链DNA为模板并利用反应混合物当中的四种脱氧核苷三磷酸合成新生的DNA互补链。包括：DNA解链（变性）、引物与模板DNA结合（退火）、DNA合成（延伸）三步，可以被不断重复。

第20题：

第21题：

第22题：

第23题：