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  • 第1题:

    简述PCR的原理及其应用。


    正确答案:PCR技术是模拟体内条件下,应用DNA聚合酶反应特异性扩增某一DNA片段的技术。它根据待扩增区域两端已知序列合成两个与模板DNA互补的核苷酸引物,这一单链引物的序列决定了待扩增片段的特异性和片段长度,当有模板DNA存在时,引物便可在一定的复性温度下特异地与热变性形成单链的DNA模板互补形成“退火”。当有DNA聚合酶和dNTP存在时,便可在一定条件下,按5(→3(方向从引物端合成DNA链,从而可以产生倍增的DNA片段,当经过30~35个周期后便可产生100万倍以上的所需DNA片段。由于PCR扩增技术的快速、简便、准确、可靠,因此,该技术已广泛应用于遗传病的基因诊断,病原体的检测,肿瘤的DNA诊断,法医学亲权鉴定,性别鉴定以及在DNA水平上研究生物进化等。

  • 第2题:

    何谓易错PCR技术?简述易错PCR技术进行体外基因突变的主要过程


    正确答案:指从酶的单一基因出发,在改变反应条件的情况下进行PCR,使扩增得到的基因出现碱基配对错误,从而引起基因突变的技术过程。
    过程:双链DNA的变性、引物与单链DNA退火结合、引物延伸。

  • 第3题:

    简述定量PCR的测定原理和方法。


    正确答案:荧光标记技术是分子生物学最常用的标记技术,荧光染料或荧光标记物与扩增产物结合后,被激发的荧光强度和扩增产物成正比。而根据扩增原理,扩增是呈指数增长,因此在反应体系和反应条件完全一样下,样本含量应与扩增产物的对数成正比,故在一定的条件下荧光强度和样本含量成正比。

  • 第4题:

    简述PCR原理。


    正确答案:PCR是在体外扩增DNA序列的方法,原理并不复杂,首先将双链DNA分子在邻近沸点的温度下加热分离成两条单链DNA分子,DNA聚合酶以单链DNA为模板并利用反应混合物当中的四种脱氧核苷三磷酸合成新生的DNA互补链。包括:DNA解链(变性)、引物与模板DNA结合(退火)、DNA合成(延伸)三步,可以被不断重复。

  • 第5题:

    问答题
    简述易错PCR技术与常规PCR技术的异同点。

    正确答案: 易错PCR技术是从酶的单一基因出发,在改变反应条件的情况下进行聚合酶链反应(PCR),使扩增得到的基因出现碱基配对错误,而引起基因突变的技术过程。
    易错PCR技术与常规PCR技术有很多相同之处,都是用DNA聚合酶为催化剂,使用四种脱氧核苷三磷酸为底物,都要添加镁离子,其操作过程也相同,都经过双链DNA的变性、引物与单链DNA退火结合、引物延伸三个步骤。
    (1)双链DNA的变性(解链):将待扩增的模板DNA升温至85~95℃,使DNA双链之间的氢键断开,解离为单链DNA。
    (2)引物与单链DNA退火结合:单链DNA在温度逐步降低至50~70℃时,会与其碱基互补的引物结合形成双链,引物是经过设计后人工合成的与模板DNA某一片段互补的寡核苷酸链,长度为15~30个碱基。
    (3)引物延伸:引物结合后,将温度升高至70~75℃,在DNA聚合酶的作用下,以引物为起点,以四种脱氧核苷三磷酸为底物,以目标DNA链为模板,按照碱基配对原则,由5′-端向3′-端的方向延伸,而进行DNA复制。以上三个步骤反复进行,一般经过30次循环,即可使目的基因扩增几百万倍。
    易错PCR技术与常规PCR技术的主要不同点在于反应条件有所不同。
    (1)在易错PCR中镁离子浓度较高:常规PCR扩增时,镁离子浓度为0.5~2.5mmol/L,进行易错PCR时,在原有基础上提高镁离子的浓度,以稳定非互补的碱基对。
    (2)在易错PCR中可以添加一定浓度的锰离子,以降低聚合酶对模板的特异性,而常规PCR不用添加锰离子。
    (3)在易错PCR中四种底物(dATP、dTTP、dCTP、dGTP)的浓度比改版,即采用浓度不平衡的各种底物,是DNA聚合酶在催化基因扩增时,碱基配对错误的出现频率增加,而容易引起基因突变。
    解析: 暂无解析

  • 第6题:

    问答题
    简述降落PCR。

    正确答案: 降落PCR是Don于1991年最早发明的,退火温度起始于高于Tm值计算15度,之后每过一个循环温度降低1℃(或n℃),直到达到一个较低的退火温度(Tm值以下5℃),这个温度为“touchdown”退火温度。由于正确和非正确的退火温度造成的产量是指数级的,因此可以使正确产物得到累计。当温度降低到非特异性退火温度时,就会发生非特异性结合,但此时的特异性结合产物已经累计了一个几何级数的优势,因此非特异性结合产物的量不会很多。
    解析: 暂无解析

  • 第7题:

    简述PCR及其临床应用。


    正确答案:聚合酶链反应(PCR):利用DNA聚合酶(如TagDNA聚合酶)等在体外条件下,催化一对引物间的特异DNA片段合成的基因体外扩增技术。引物:单链DNA片段。过程:变性DNA双链-单链(93~98℃),退火引物与模板结合(37~65℃),延伸双链合成(70~75℃)。常见PCR技术的类型:原位PCR、逆转录PCR(RT-PCR)及定量RT-PCR、反向PCR、PCR-SSCP、PCR-ELISA.固相锚定PCR、mRNA差异显示逆转录PCR。PCR的应用:(1)在感染性疾病中的应用:对传染性疾病进行病原学确证诊断;对病原体进行基因分型和同源性比较;克隆病原体各种蛋白质的基因,用于蛋白表达,制备诊断试剂或疫苗;发现新病原体;克隆病原体各种基因,建立基因表达载体,用于基因治疗。(2)遗传性疾病的基因诊断:发现的遗传病有4000多种;产前诊断PCR-RFLP;PCR-ASO。(3)肿瘤的研究及诊断:癌基因与抑癌基因。(4)在法医学中的应用:个人认识;亲子鉴定。(5)其他应用:DNA克隆;引入点突变、缺失或插入;重组PCR;DNA测序;示差PCR。

  • 第8题:

    简述易错PCR技术与常规PCR技术的异同点。


    正确答案:易错PCR技术是从酶的单一基因出发,在改变反应条件的情况下进行聚合酶链反应(PCR),使扩增得到的基因出现碱基配对错误,而引起基因突变的技术过程。
    易错PCR技术与常规PCR技术有很多相同之处,都是用DNA聚合酶为催化剂,使用四种脱氧核苷三磷酸为底物,都要添加镁离子,其操作过程也相同,都经过双链DNA的变性、引物与单链DNA退火结合、引物延伸三个步骤。
    (1)双链DNA的变性(解链):将待扩增的模板DNA升温至85~95℃,使DNA双链之间的氢键断开,解离为单链DNA。
    (2)引物与单链DNA退火结合:单链DNA在温度逐步降低至50~70℃时,会与其碱基互补的引物结合形成双链,引物是经过设计后人工合成的与模板DNA某一片段互补的寡核苷酸链,长度为15~30个碱基。
    (3)引物延伸:引物结合后,将温度升高至70~75℃,在DNA聚合酶的作用下,以引物为起点,以四种脱氧核苷三磷酸为底物,以目标DNA链为模板,按照碱基配对原则,由5′-端向3′-端的方向延伸,而进行DNA复制。以上三个步骤反复进行,一般经过30次循环,即可使目的基因扩增几百万倍。
    易错PCR技术与常规PCR技术的主要不同点在于反应条件有所不同。
    (1)在易错PCR中镁离子浓度较高:常规PCR扩增时,镁离子浓度为0.5~2.5mmol/L,进行易错PCR时,在原有基础上提高镁离子的浓度,以稳定非互补的碱基对。
    (2)在易错PCR中可以添加一定浓度的锰离子,以降低聚合酶对模板的特异性,而常规PCR不用添加锰离子。
    (3)在易错PCR中四种底物(dATP、dTTP、dCTP、dGTP)的浓度比改版,即采用浓度不平衡的各种底物,是DNA聚合酶在催化基因扩增时,碱基配对错误的出现频率增加,而容易引起基因突变。

  • 第9题:

    简述影响飞机起飞和降落的特殊天气。


    正确答案: 影响飞机起降的恶劣天气主要有:
    ①地面大风:有地面大风时,往往产生轮流涡旋,影响飞行的稳定性,加大操纵难度;
    ②低空风切变:当飞机遇到风切变时,空速将发生变化,从而使升力发生变化,力的平衡遭到破坏,会发生改变航速和飞机姿态现象;
    ③低能见度:能见度的好坏直接影响飞行的起降,低云、降水、雾、风沙、浮尘、烟、霾等天气对机场产生视程障碍现象。

  • 第10题:

    简述动力绞盘铲刀降落缓慢或不降落的原因。


    正确答案:铲刀降落缓慢或不降落的原因可能是滑轮卡住,制动调整不当或松闸操纵不灵,锥形离合器分离不彻底等原因造成的。

  • 第11题:

    问答题
    何谓易错PCR技术?简述易错PCR技术进行体外基因突变的主要过程

    正确答案: 指从酶的单一基因出发,在改变反应条件的情况下进行PCR,使扩增得到的基因出现碱基配对错误,从而引起基因突变的技术过程。
    过程:双链DNA的变性、引物与单链DNA退火结合、引物延伸。
    解析: 暂无解析