无菌检查的方法有哪些？如何进行染菌判断？

第1题：

如何对发酵染菌进行原因分析？

正确答案: 导致发酵染菌的原因错综复杂，但不外乎菌种、物料污染所带入，设备泄露和死角造成，空气过滤失效及灭菌操作失误等因素。发酵染菌可以从以下三方面来分析寻找原因。
从染菌的范围来分析。但罐染菌应从单体设备的严密、清洁和灭菌操作上找原因。相同时间内同时出现几个发酵罐染菌应从空气系统。糖油物料、排气口等公用系统上找原因。单体罐连续或间断性染菌应从该罐的清洁、泄漏、死角或设备不合理方面找原因。
（1）从染菌的时间来分析。尚未补加糖料之前发生前期染菌，一般杂菌量大，应从物料灭菌不透。种子带菌、泡沫顶罐。轴封渗漏等方面找原因。发酵的中后期染菌应从设备严密、空气系统、糖油物料系统以及中间工艺控制上找原因。
（2）从染菌的菌型上分析。染酵母菌、霉菌。由于其不抗热，可从无菌室的清洁情况，倒瓶、并瓶时菌落数以及设备泄露上找原因。染球菌、杆菌等不抗热杂菌应从空气过滤介质的破损失效、设备渗漏、培养基倒流等方面找原因。染芽孢杆菌等抗热杂菌时应从设备的死角、罐内的清洁、不合理的设备装置以及灭菌操作上找原因。

第2题：

染菌量检查、控制菌检查过程都必须严格遵守无菌操作。

正确答案:正确

第3题：

如何正确判断空气系统故障造成的染菌？

正确答案: 空气系统出现除滤失效，过滤介质吹翻、油、水过多等故障引起的染菌，其特点是：
（1）染菌罐的范围广。
（2）发酵罐染菌的时间不统一，较零乱。
（3）污染的菌型比较集中，酵母菌、霉菌或杆菌。

第4题：

发酵罐染菌的处理方法有哪些？

正确答案: 发酵罐染菌的处理方法：
（1）污染杂菌的处理：发酵罐污染杂菌后，依据染菌时间、所染杂菌的危害性及时进行处理，同时对所涉及的设备也要及时处理。
①种子罐染菌的处理：种子罐染后都不能往下道工序多种，要及时用高压蒸气直接灭菌后放下水；
②发酵罐染菌的处理：发酵罐前期染菌。污染的杂菌对产生菌的危害性大，采用蒸汽灭菌后放掉；如果危害性不大可用重新灭菌、重新接种的方式处理、如营养成分消耗较多，可放掉部分培养液，补入部分新培养基后进行灭菌，重新接种，如污染的杂菌量少且生长缓慢，可以继续运转下去，但要时刻注意杂菌数量和代谢的变化。在发酵的中后期染菌，一是加入适量的杀菌剂，如呋喃西林或某些抗生素，抑制杂菌的生长，二是降低培养温度或控制补料量来控制杂菌的生长速度，如果采用上两种措施仍不见效，就要考虑提前放罐。
③染菌后的处理：染菌后的罐体用甲醛等化学物质处理再和蒸汽灭菌（包括各种附属设备）在再次投料之前，又彻底清洗罐体、附件，同时进行严密程度检查，以防渗漏。
（2）污染噬菌体的处理：抗生素等产品发酵过程中有时出现噬菌体污染。轻者造成生产能力大幅度下降，重者造成停产。发酵过程中污染噬菌体后一般做如下处理：
①发酵液用高压蒸汽灭菌后放掉，严防发酵液任意流失。
②全部停产，对环境进行全面的清洗和消毒，断绝噬菌体的寄生基础。
③更换生产菌种，不断筛选噬种体菌种，防止噬菌体的重复污染。

第5题：

不同时间染菌对发酵有什么影响，染菌如何控制？

正确答案: （1）种子培养期染菌：由于接种量较小，生产菌生长一开始不占优势，而且培养液中几乎没有抗生素（产物）或只有很少抗生素（产物）。因而它防御杂菌能力低，容易污染杂菌。如在此阶段染菌，应将培养液全部废弃。
（2）发酵前期染菌：发酵前期最易染菌，且危害最大。
原因：发酵前期菌量不很多，与杂菌没有竞争优势；且还未合成产物（抗生素）或产生很少，抵御杂菌能力弱，在这个时期要特别警惕以制止染菌的发生。
措施：可以用降低培养温度，调整补料量，用酸碱调pH值，缩短培养周期等措施予以补救。如果前期染菌，且培养基养料消耗不多，可以重新灭菌，补加一些营养，重新接种再用。
（3）发酵中期染菌：发酵中期染菌会严重干扰产生菌的代谢。杂菌大量产酸，培养液pH下降；糖、氮消耗快，发酵液发粘，菌丝自溶，产物分泌减少或停止，有时甚至会使已产生的产物分解。有时也会使发酵液发臭，产生大量泡沫。
措施：降温培养，减少补料，密切注意代谢变化情况。如果发酵单位到达一定水平可以提前放罐，或者抗生素生产中可以将高单位的发酵液输送一部分到染菌罐，抑制杂菌。
（4）发酵后期染菌：发酵后期发酵液内已积累大量的产物，特别是抗生素，对杂菌有一定的抑制或杀灭能力。因此如果染菌不多，对生产影响不大。如果染菌严重，又破坏性较大，可以提前放罐。
发酵染菌后的措施：
染菌后的培养基必须灭菌后才可放下水道。灭菌方法：可通蒸汽灭菌，也可加入过氧乙酸等化学灭菌剂搅拌半小时，才放下水道。否则由于各罐的管道相通，会造成其它罐的染菌，而且直接放下水道也会造成空气的污染而导致其它罐批染菌。
凡染菌的罐要找染菌的原因，对症下药，该罐也要彻底清洗，进行空罐消毒，才可进罐。
染菌厉害时，车间环境要用石灰消毒，空气用甲醛熏蒸。特别，若染噬菌体，空气必须用甲醛蒸汽消毒。

第6题：

目前常用于检查是否染菌的无菌实验方法主要有（）、（）、（）等。

正确答案:肉汤培养法；镜检；平板划线法

第7题：

如何检测和判断过程是否染菌？

正确答案: 发酵过程中应以无菌试验的结果为依据进行判断。
显微镜检查法；肉汤培养法；平板划线培养或斜面培养；发酵过程异常现象观察。

第8题：

判断题

发酵对空气无菌程度的要求按染菌机率为10-3来计算，即1000次发酵周期所用的无菌空气只允许1次染菌。

A

对

B

错

正确答案：对

解析：暂无解析

第9题：

问答题

发酵生产中引起染菌的原因有哪些？如何进行检查和判断分析？

正确答案：主要原因有种子带菌、空气系统染菌、设备渗漏、培养基或设备灭菌不彻底、管理和操作不当。检查是否染菌可采用显微镜检查法、平板划线培养检查法和肉汤培养法。同时还需从发酵过程的异常现象判断是否染菌，如溶解氧水平、排气中CO2含量、pH异常变化等，可初步判断污染了杂菌。

解析：暂无解析

第10题：

填空题

目前常用于检查是否染菌的无菌实验方法主要有（）、（）、（）等。