简述链末端终止法测定DNA序列的原理。

题目

简述链末端终止法测定DNA序列的原理。

相似考题

1.链末端终止法测定的序列是A、DNA原分子B、DNA的酶促反应产物C、DNA的末端序列D、DNA的中间序列E、DNA的两端序列

2.链末端终止法中的PCR循环测序法采用的DNA聚合酶是A、大肠埃希菌DNA聚合酶B、Klenow片段C、测序酶D、序列酶E、Taq DNA聚合酶

3.化学降解法测定的序列是A、DNA原分子B、DNA的酶促反应产物C、DNA的末端序列D、DNA的中间序列E、DNA的降解序列

4.链末端终止法是目前最通用的DNA测序技术，应掌握其基本原理、主要步骤和体系组成，并熟悉其特点。链末端终止法包括4组独立的酶反应体系，这4组不同的酶反应体系在于分别加入了不同的A、dNTPB、标记的dNTPC、ddNTPD、标记的ddNTPE、dNTP与ddNTP链末端终止法中链的持续延伸与随机但特异发生的链终止反应展开竞争，结果产生一系列酶促产物，终止于互补链上的碱基是A、A，T，C，GB、A，U，C，GC、A，C，GD、A，T，CE、A，U，C对于未知序列测序，链末端终止法的测序引物为A、其亚克隆载体序列的随机引物B、其亚克隆载体序列的定向引物C、其亚克隆载体序列的待测引物D、其亚克隆载体序列的通用引物E、其亚克隆载体序列的双链引物链末端终止法的测序准确性可能受到多种因素影响，其主要原因在于A、该法的测序载体不确定B、该法的测序引物不确定C、该法的DNA聚合酶不确定D、该法的待测模板不确定E、该法测定的序列是酶促反应生成的产物

参考答案和解析
正确答案:利用DNA聚合酶，以待测单链DNA为模板，以dNTP为底物，设立四种相互独立的测序反应体系，在每个反应体系中加入不同的双脱氧核苷三磷酸（dideoxyribonucleoside triphosphate，ddNTP）作为链延伸终止剂，在测序引物引导下，按照碱基配对原则，每个反应体系中合成一系列长短不一的引物延伸链，通过高分辨率的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，放射自显影检测后，从凝胶底部到顶部按5′→3′方向读出新合成链序列，由此推知待测模板链的序列。
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  • 第1题：

    链末端终止法识读待测序列需

    A、根据酶促反应的结果直接判读

    B、根据链末端终止反应直接判读

    C、根据电泳结果直接判读

    D、根据模板链序列推知互补链序列

    E、根据互补链序列推知模板链序列


    参考答案：E

  • 第2题：

    Klenow片段的主要用途有（）。

    • A、补齐双链DNA的3ˊ末端。
    • B、通过补齐3ˊ端，标记3ˊ末端。
    • C、在cDNA克隆中，第二股链的合成。
    • D、DNA序列分析
    • E、平端连接

    正确答案:A,B,C,D

  • 第3题：

    链末端终止法是目前最通用的DNA测序技术，应掌握其基本原理、主要步骤和体系组成，并熟悉其特点。链末端终止法的测序准确性可能受到多种因素影响，其主要原因在于（）

    • A、该法的测序载体不确定
    • B、该法的测序引物不确定
    • C、该法的DNA聚合酶不确定
    • D、该法的待测模板不确定
    • E、该法测定的序列是酶促反应生成的产物

    正确答案:E

  • 第4题：

    链末端终止法是目前最通用的DNA测序技术，应掌握其基本原理、主要步骤和体系组成，并熟悉其特点。对于未知序列测序，链末端终止法的测序引物为（）

    • A、其亚克隆载体序列的随机引物
    • B、其亚克隆载体序列的定向引物
    • C、其亚克隆载体序列的待测引物
    • D、其亚克隆载体序列的通用引物
    • E、其亚克隆载体序列的双链引物

    正确答案:D

  • 第5题：

    双脱氧末端终止法测定DNA序列是基于（）

    • A、DNA的聚合反应
    • B、DNA的连接反应
    • C、DNA的降解反应
    • D、特殊的DNA连接酶
    • E、聚合单体2’和5’位的脱氧

    正确答案:A

  • 第6题：

    在单纯以测定DNA序列为目的的全自动DNA测序仪中，广泛应用的原理是（）。

    • A、Edman降解法
    • B、双脱氧链末端终止法
    • C、化学降解法
    • D、氧化－还原法
    • E、水解法

    正确答案:B

  • 第7题：

    链末端终止法中的PCR循环测序法采用的DNA聚合酶是（）

    • A、大肠埃希菌DNA聚合酶
    • B、Klenow片段
    • C、测序酶
    • D、序列酶
    • E、TaqDNA聚合酶

    正确答案:E

  • 第8题：

    单选题
    链末端终止法测定的序列是（）
    A

    DNA原分子

    B

    DNA的酶促反应产物

    C

    DNA的末端序列

    D

    DNA的中间序列

    E

    DNA的两端序列


    正确答案： B
    解析： 暂无解析

  • 第9题：

    单选题
    链末端终止法中的PCR循环测序法采用的DNA聚合酶是（）
    A

    大肠埃希菌DNA聚合酶

    B

    Klenow片段

    C

    测序酶

    D

    序列酶

    E

    TaqDNA聚合酶


    正确答案： E
    解析： 暂无解析

  • 第10题：

    单选题
    链末端终止法识读待测序列需（）
    A

    根据酶促反应的结果直接判读

    B

    根据链末端终止反应直接判读

    C

    根据电泳结果直接判读

    D

    根据模板链序列推知互补链序列

    E

    根据互补链序列推知模板链序列


    正确答案： C
    解析： 暂无解析

  • 第11题：

    单选题
    在单纯以测定DNA序列为目的的全自动DNA测序仪中，广泛应用的原理是（）。
    A

    Edman降解法

    B

    双脱氧链末端终止法

    C

    化学降解法

    D

    氧化－还原法

    E

    水解法


    正确答案： A
    解析： 暂无解析

  • 第12题：

    问答题
    简述链末端终止法测定DNA序列的原理。

    正确答案： 利用DNA聚合酶，以待测单链DNA为模板，以dNTP为底物，设立四种相互独立的测序反应体系，在每个反应体系中加入不同的双脱氧核苷三磷酸（dideoxyribonucleoside triphosphate，ddNTP）作为链延伸终止剂，在测序引物引导下，按照碱基配对原则，每个反应体系中合成一系列长短不一的引物延伸链，通过高分辨率的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，放射自显影检测后，从凝胶底部到顶部按5′→3′方向读出新合成链序列，由此推知待测模板链的序列。
    解析： 暂无解析

  • 第13题：

    简述化学法测定DNA序列的基本原理。


    正确答案:化学法是对待测DNA进行化学降解。在化学法的测序系统中，先对待测DNA末端进行放射性标记，然后分成4组或5组互为独立的化学反应体系，每一组用不同的化学试剂特异地针对某一种或某一类碱基进行化学切割，通过化学降解后产生长短不一的DNA片段，其长度取决于改组反应所针对的碱基在待测DNA片断中的位置，将各组反应产物通过高分辨率的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，放射自显影检测后直接识读待测DNA的序列。

  • 第14题：

    链末端终止法是目前最通用的DNA测序技术，应掌握其基本原理、主要步骤和体系组成，并熟悉其特点。链末端终止法中链的持续延伸与随机但特异发生的链终止反应展开竞争，结果产生一系列酶促产物，终止于互补链上的碱基是（）

    • A、A，T，C，G
    • B、A，U，C，G
    • C、A，C，G
    • D、A，T，C
    • E、A，U，C

    正确答案:A

  • 第15题：

    限制性核酸内切酶，简称限制酶，是一类能识别双链DNA分子中特定的核苷酸序列，并在识别序列内或附近切割DNA双链结构的核酸酶。限制性核酸内切酶切割DNA后不会产生（）

    • A、黏性末端
    • B、5′黏性末端
    • C、3′黏性末端
    • D、平末端
    • E、单链缺口

    正确答案:E

  • 第16题：

    简述利用双脱氧末端终止法（Sanger法）测定DNA一级结构的原理与方法？


    正确答案: 原理是采用核苷酸链终止剂—2，，3，-双脱氧核苷酸终止DNA的延长。由于它缺少形成3/5/磷酸二脂键所需要的3-OH，一旦参入到DNA链中，此DNA链就不能进一步延长。根据碱基配对原则，每当DNA聚合酶需要dNMP参入到正常延长的DNA链中时，就有两种可能性，一是参入ddNTP，结果导致脱氧核苷酸链延长的终止；二是参入dNTP，使DNA链仍可继续延长，直至参入下一个ddNTP。根据这一方法，就可得到一组以ddNTP结尾的长短不一的DNA片段。
    方法是分成四组分别为ddAMP、ddGMP、ddCMP、ddTMP反应后，聚丙烯酰胺凝胶电泳按泳带可读出DNA序列。

  • 第17题：

    有关双脱氧末端终止法序列分析描述正确的是（）。

    • A、原理等同化学降解法
    • B、在体外进行了DNA的合成
    • C、引物标记是关键
    • D、类似原理用于了DNA序列自动化分析
    • E、得到特异的ddNTP末端片段是关键

    正确答案:B,D,E

  • 第18题：

    目前DNA测序仪的工作原理，主要是利用（）。

    • A、Edman降解法
    • B、双脱氧链末端终止法
    • C、化学降解法
    • D、氧化－还原法
    • E、水解法

    正确答案:B,C

  • 第19题：

    试说明双脱氧法测定DNA序列的原理和方法？


    正确答案:原理：在体外合成DNA的同时，加入使链合成终止的试剂，与4种脱氧核苷酸按一定比例混合，参与DNA的体外合成，产生长短不一、具有特定末端的DNA片段，由于二脱氧核苷酸没有3’-OH，不能进一步延伸产生3’，5’-磷酸二酯键，合成反应就在此处停止。
    方法：
    （1）选取待测DNA的一条链为模板，用5’端标记的短引物与模板的3’端互补。
    （2）将样品分为4等分，每份中添加4种脱氧核苷三磷酸和相应于其中一种的双脱氧核苷酸。
    （3）加入DNA聚合酶引发DNA合成，由于双脱氧核苷酸与脱氧核苷酸的竞争作用，合成反应在双脱氧核苷酸掺入处终止，结果合成出一套长短不同的片段。
    （4）将4组片段进行聚乙烯酰胺凝胶电泳分离，根据所得条带，读出待测DNA的碱基顺序。

  • 第20题：

    单选题
    链末端终止法是目前最通用的DNA测序技术，应掌握其基本原理、主要步骤和体系组成，并熟悉其特点。链末端终止法中链的持续延伸与随机但特异发生的链终止反应展开竞争，结果产生一系列酶促产物，终止于互补链上的碱基是（）
    A

    A，T，C，G

    B

    A，U，C，G

    C

    A，C，G

    D

    A，T，C

    E

    A，U，C


    正确答案： A
    解析： 暂无解析

  • 第21题：

    单选题
    链末端终止法是目前最通用的DNA测序技术，应掌握其基本原理、主要步骤和体系组成，并熟悉其特点。对于未知序列测序，链末端终止法的测序引物为（）
    A

    其亚克隆载体序列的随机引物

    B

    其亚克隆载体序列的定向引物

    C

    其亚克隆载体序列的待测引物

    D

    其亚克隆载体序列的通用引物

    E

    其亚克隆载体序列的双链引物


    正确答案： E
    解析： 暂无解析

  • 第22题：

    问答题
    简述化学法测定DNA序列的基本原理。

    正确答案： 化学法是对待测DNA进行化学降解。在化学法的测序系统中，先对待测DNA末端进行放射性标记，然后分成4组或5组互为独立的化学反应体系，每一组用不同的化学试剂特异地针对某一种或某一类碱基进行化学切割，通过化学降解后产生长短不一的DNA片段，其长度取决于改组反应所针对的碱基在待测DNA片断中的位置，将各组反应产物通过高分辨率的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，放射自显影检测后直接识读待测DNA的序列。
    解析： 暂无解析

  • 第23题：

    多选题
    有关双脱氧末端终止法序列分析描述正确的是（）。
    A

    原理等同化学降解法

    B

    在体外进行了DNA的合成

    C

    引物标记是关键

    D

    类似原理用于了DNA序列自动化分析

    E

    得到特异的ddNTP末端片段是关键


    正确答案： E,A
    解析： 暂无解析

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