甲基特异性PCR

第1题：

第2题：

第3题：

PCR-SSP序列特异性引物PCR

正确答案: 是根据等位基因的序列，设计具有序列特异性的引物，对样本进行DNA分型。该方法是以引物决定分型特异性。有以下优点：特异性强、重复性好、结果易于判定。

第4题：

PCR是以DNA的_____特性为基础设计的。（）

• A、超螺旋
• B、热稳定
• C、半保留复制
• D、甲基化

正确答案:C

第5题：

简述PCR的步骤。PCR是如何使得特异性DNA片段以几何级数倍增的？

正确答案: PCR分三步：
①双链模板DNA变性。双链解开成单链。
②退火。
即引物与单链DNA两端互补序列配对，形成DNA聚合反应中的模板与引物的关系。没有引物的帮助，所有的DNA聚合酶都无能力从头合成一条新链。
③链的延伸。
DNA聚合酶从引物3’-OH端开始进行聚合酶反应，直至完全产生两条互补的新链。
三个反应阶段结束后，又可以开始下一次的循环，引物链的延伸产物与原来的模板DNA经加热变性后，也作为模板DNA和另一个引物互补，在DNA聚合酶作用下又发生引物链的延伸反应。这样反复循环数十次，可使特异性DNA片段以几何级数倍增。

第6题：

什么叫PCR的引物？什么叫特异性引物？什么叫简并性引物？

正确答案: 引物：所谓引物，实际上就是两段与待扩增靶DNA序列互补的寡核苷酸片段，两引物间距离决定扩增片段的长度，两引物的5’端决定扩增产物的5’末端位置。（引物要大大过量）
特异性引物：引物是与靶DNA的3’端和5’端特异性结合的寡核苷酸片段，是决定PCR特异性的关键。只有当每条引物都能特异性地与模板DNA中的靶序列复性形成稳定的结构，才能保证其特异性。
简并性引物：简并引物是指代表编码单个氨基酸所有不同碱基可能性的不同序列的混合物。为了增加特异性，可以参考密码子使用表，根据不同生物的碱基使用偏好，减少简并性。

第7题：

PCR和由PCR衍生的技术是发展最好、应用最广泛的核酸扩增技术。影响探针杂交特异性的主要因素是（）

• A、温度
• B、特异性探针
• C、载体
• D、标志物
• E、核酸片段大小

正确答案:B

第8题：

PCR特异性主要取决于（）。

• A、循环次数
• B、模板量
• C、DNA聚合酶活性
• D、引物的特异性
• E、操作技术

正确答案:D

第9题：

第10题：

第11题：

第12题：

第13题：

第14题：

第15题：

常用的促进PCR特异性的试剂有哪些？

正确答案:甲酰胺，DMSO，甘油，甜菜碱，PCRx Enhancer Solution。

第16题：

实时荧光定量PCR的优点包括（）。

• A、实时监控PCR反应的进程
• B、特异性高于普通PCR
• C、灵敏度高
• D、在单管中实现扩增和检测分析

正确答案:A,B,C,D

第17题：

提高PCR反应的特异性一般可以使用哪几种方法？

正确答案: A.引物设计：引物长度、碱基配对是否严格、GC%含量、退火温度、引物浓度与纯度、稳定性、是否为简并性引物等；
B.使用热启动：在变性完成之后再加入DNA聚合酶（或聚合酶才有活性），这样可以提高特异性，因为DNA聚合酶在低温时也有活性，可能引起非特异的扩增；
C.镁离子浓度：不同的模板和引物有不同的镁离子浓度，应进行预实验进行探索；较高的镁离子浓度会提高产量，同时降低特异性；dNTP浓度较高时应适当提高镁离子浓度；
D.促进PCR的添加剂：降低DNA熔解温度，从而有助于引物退火并辅助DNA聚合酶延伸通过二级结构区，可提高特异性和产率；
E.使用巢式PCR：降低扩增多个靶位点的可能性，提高特异性。

第18题：

决定PCR扩增产物的特异性和长度的是（）。

正确答案:引物

第19题：

使用热启动DNA聚合酶可以增加PCR反应的特异性。（）

正确答案:正确

第20题：

第21题：

第22题：

第23题：