质粒的构建策略是什么？
题目
质粒的构建策略是什么？
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第1题：
天然质粒的人工构建对质粒主要进行哪些方面的改造？
正确答案: 1.加入合适的选择标记基因，通常是抗生素基因。
2.增加或减少合适的酶切位点，便于重组。
3.缩短长度，切去不必要的片段，增加装载量。
4.改变复制子，由严紧变为松弛型，以增加拷贝数。加装特殊的基因元件。 -
第2题：
质粒载体人工构建的目的是什么？
正确答案: 天然质粒往往存在着这样或那样的缺陷，因此不适合用作基因工程的载体必须对之进行改造构建。
（1）加入合适的选择标记基因，如两个以上，易于用作选择。
（2）增加或减少合适的酶切位点，便于重组。
（3）缩短长度，切去不必要的片段，提高导入效率，增加装载量。
（4）改变复制子，变严紧为松弛，变少拷贝为多拷贝，人工构建的方法就是重组，拼拼接接。 -
第3题：
科斯质粒的特点是什么？
正确答案: （1）具有λ噬菌体的特性，能高效地转染宿主细胞，但它不含λ噬菌体的全部必要基因，不能裂解生成噬菌斑；
（2）具有质粒载体的特性，带有质粒的抗性基因而易于筛选。 -
第4题：
为了构建重组质粒pZHZ2，可利用限制酶E、F切割目的基因和质粒pZHZ1，然后用相应的酶连接下列叙述中错误的是（）
- A、基因工程的核心就是构建重组DNA分子
- B、质粒pZHZ2上存在RNA聚合酶结合的位点
- C、重组质粒pZHZ2只能被限制酶G、H切开
- D、质粒pZHZ1、pZHZ2复制时一定会用到DNA聚合酶
正确答案:C -
第5题：
简述构建质粒载体的基本策略和构建过程。
正确答案: （一）基本策略
1、能在受体细胞内有效的复制；
2、必须含有允许外源DNA片段克隆的位点，切尽可能的多；
3、含有供选择克隆子的标记基因；
4、载体DNA分子尽可能小。
（二）构建过程
1、选择合适的出发质粒（亲本质粒）；
2、正确获得构建质粒克隆载体的元件；
3、选择合适的选择标记基因；
4、在能达到预期目的的前提下，过程力求简单。 -
第6题：
黏性质粒是由（）与（）重新构建的载体，其克隆容量可达（）kb。
正确答案:λDNA的cos区；质粒；40～50 -
第7题：
用于基因工程的载体有三类：（）、噬菌体载体、构建的其他载体（柯斯质粒等）。
正确答案:质粒载体 -
第8题：
什么是质粒？质粒的本质是什么？
正确答案:质粒是一种基因工程中常用的运载体，存在于许多细菌以及酵母菌等生物中；质粒的本质是能够自主复制的很小的环状DNA分子。 -
第9题：
问答题质粒载体人工构建的目的是什么？正确答案： 天然质粒往往存在着这样或那样的缺陷，因此不适合用作基因工程的载体必须对之进行改造构建。
（1）加入合适的选择标记基因，如两个以上，易于用作选择。
（2）增加或减少合适的酶切位点，便于重组。
（3）缩短长度，切去不必要的片段，提高导入效率，增加装载量。
（4）改变复制子，变严紧为松弛，变少拷贝为多拷贝，人工构建的方法就是重组，拼拼接接。解析： 暂无解析 -
第10题：
单选题质粒载体是在天然质粒的基础上为适应实验室操作而进行构建的，构建方法为（ ）。A人工构建
B天然合成
C化学提取
D生物合成
E以上都是
正确答案： A解析： 暂无解析 -
第11题：
问答题简述人工构建的质粒的构成。正确答案： （1）Ori区，质粒复制的起始点；
（2）Par区，保证在细胞分裂过程中，质粒被均等地分配至子细胞；
（3）MCS区，该区含有多个单一性限制性核酸内切酶酶切点，便于在此区将质粒切开而加入；
（4）外源性DNA；
（5）筛选区，耐抗生素基因或β-半乳糖苷酶基因。解析： 暂无解析 -
第12题：
问答题对天然质粒的人工构建主要表现在哪些方面？正确答案： 天然质粒往往存在着缺陷，因而不适合用作基因工程的载体，必须对之进行改造构建：
A.加入合适的选择标记基因，如两个以上，易于用作选择，通常是抗生素基因。
B.增加或减少合适的酶切位点，便于重组。
C.缩短长度，切去不必要的片段，提高导入效率，增加装载量。
D.改变复制子，变严紧为松弛，变少拷贝为多拷贝。E.根据基因工程的特殊要求加装特殊的基因元件解析： 暂无解析 -
第13题：
最早构建的质粒载体是（）。
- A、pUC
- B、pBR322
- C、pUR278
- D、pGPD-2
- E、柯斯质粒
正确答案:B -
第14题：
简述人工构建的质粒的构成。
正确答案:（1）Ori区，质粒复制的起始点；
（2）Par区，保证在细胞分裂过程中，质粒被均等地分配至子细胞；
（3）MCS区，该区含有多个单一性限制性核酸内切酶酶切点，便于在此区将质粒切开而加入；
（4）外源性DNA；
（5）筛选区，耐抗生素基因或β-半乳糖苷酶基因。 -
第15题：
融合蛋白表达质粒的构建原则是什么？
正确答案:受体细胞的结构基因能高效表达，且其表达产物可以通过亲和层析进行特异性简单纯化外源基因应装在受体蛋白编码基因的下游，为融合蛋白提供终止密码子。在某些情况下，并不需要完整的受体结构基因，目的是尽可能避免融合蛋白分子中两种组份的分子量过于接近，为目的蛋白分离回收创造条件，两个结构基因拼接位点处的序列设计十分重要，它直接决定着融合蛋白的裂解工艺两个蛋白编码序列应保持一致的翻译阅读框架。 -
第16题：
构建质粒克隆载体的基本策略
正确答案: 1.能在受体中进行有效的复制（有复制起始位点）
2.含多克隆位点
3.含有供选择克隆子的标记基因，如：常用的标记基因：Apr，Kmr，Smr，Tcr基因等
.4DNA分子尽可能小和较高的拷贝数。5根据特殊需要，组装各种“元件”，构建不同用途的质粒克隆载体 -
第17题：
请论述λ-DNA载体的构建策略是什么。
正确答案:（1）λ-DNA载体的构建：缩短长度，野生型λ-DNA包装的上限为51kb，本身长度为48.5kb，只有当插入的外源DNA片段不大于2.5kb时，才能被包装成有感染力的噬菌体颗粒。因此缩短野生型λ-DNA的长度，可以提高装载量。其实野生型λ-DNA上约有40-50%的片段是复制和裂解所非必需的（除去非必需区段，除去左右两臂必要区域中的限制位点代以MCS，插入选择位点如Lac）。根据切除的多少，可将λ-DNA分成两大类载体：插入型载体，取代型载体。
（2）λ-DNA载体的构建：删除重复的酶切位点，野生型的λ-DNA链上有5个EcoRI位点和7个HindIII位点，不利于重组操作，必须删除至1-2个，同时，为了便于各种来源的DNA片段的克隆，还需要增加一些单一的酶切位点除了简单的切割外，还需要采用定点突变技术去除或增添酶位点。
（3）λ-DNA载体的构建：加装选择标记，与质粒不同，野生型λ-DNA上缺少合适的选择标记，因此加装选择标记是λ-DNA克隆载体构建的重要内容λ-DNA克隆载体上的选择标记主要有下列两类：免疫功能类标记，颜色反应类标记。
（4）λ-DNA载体的构建：构建琥珀密码子的突变体，琥珀型突变（sup）是指由CAG（Gln）向UAG（stop）的突变。大肠杆菌的某些菌株含有特异性的校正基因，其编码产物校正tRNA能专一性地纠正这一突变。将野生型λ-DNA上D和E两个头部包装蛋白的基因中的CAG密码子突变成UAG。当这种λ-DNA进入一般的大肠杆菌菌株后，不能合成有活性的头部蛋白，也就不能被包装和裂解细菌，这样就可以阻止有害重组体的生物污染及扩散，而基因工程实验中使用的受体菌则是具有琥珀型突变体校正功能的菌株。 -
第18题：
Ti质粒载体转化法的优点是什么？
正确答案: ①寄主范围广，可浸染多种双子叶及少数单子叶植物（约93科331属643种双子叶植物对Ti质粒敏感）；
②操作简单，不需特殊组织培养技术；
③转化频率和重复性高。
④目的基因能较完整地转入受体细胞，整合到染色体上，并以孟德尔方式遗传和表达。 -
第19题：
什么是质粒？其特点是什么？
正确答案: 质粒是存在于细菌染色体外或附加于染色体上的遗传物质。
其特点：
①绝大多数由共价闭合环状双螺旋 DNA 分子所构成，分子量较细菌染色体小。
②每个菌体内有一个或几个，也可能有很多个质粒。
③质粒可以从菌体内自行消失，也可通过物理化学手段，将其消除或抑制；没有质粒的细菌，可通过接合、转化或转导等方式，从具有质粒的细菌中获得，但不能自发产生。
④质粒存在与否，无损于细菌生存。但是，许多次生代谢产物如抗生素、色素等的产生、以至芽孢的形成，均受质粒的控制。
⑤质粒既能自我复制、稳定遗传，也可插入细菌染色体中或携带的外源 DNA 片段共同复制增殖；它可通过转化、转导或接合作用单独转移，也可携带着染色体片段一起转移。质粒已成为遗传工程中重要的运载工具之一。 -
第20题：
分泌型目的蛋白表达系统的构建策略是什么？
正确答案:包括大肠杆菌在内的绝大多数革兰氏阴性菌不能将蛋白质直接分泌到胞外，但有些革兰氏阴性菌能将细菌的抗菌蛋白（细菌素）分泌到培养基中，这一过程严格依赖于细菌素释放蛋白，它激活定位于内上的磷酸酯酶，导致细菌内外膜的通透性增大。因此，只要将细菌素释放蛋白编码基因克隆在一个合适的质粒上即可构建完全分泌型的受体细胞。此时，用另一种携带大肠杆菌信号肽编码序列和目的基因的表达质粒转化上述完全分泌型受体细胞，并使用相同性质的启动子介导目的基因的转录，则可实现目的蛋白从重组大肠杆菌中的完全分泌。 -
第21题：
单选题质粒载体是在天然质粒的基础上为适应实验室操作而进行构建的，构建方法（）A人工构建
B天然合成
C化学提取
D生物合成
E以上都是
正确答案： E解析： 暂无解析 -
第22题：
填空题将含有外源基因组一个酶切片段的质粒称之为含有一个（）；，各种此类质粒的集合体称之为构建了一个（）。正确答案： 基因组DNA克隆,基因组DNA文库解析： 暂无解析 -
第23题：
填空题黏性质粒是由（）与（）重新构建的载体，其克隆容量可达（）kb。正确答案： λDNA的cos区,质粒,40～50解析： 暂无解析