简述PCR及其临床应用。
题目
简述PCR及其临床应用。
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第1题：
简述咽的层次及其临床应用。
正确答案:咽壁自内向外分为粘膜、纤维膜层、肌层和外膜4层：
（1）。粘膜。
（2）。纤维膜。
（3）肌层：咽肌由3对斜行的咽缩肌及3对纵行的咽提肌组成。
（4）外膜：为咽筋膜，系颊筋膜的延续。
在咽后壁与椎前筋膜间即为咽后间隙。咽后壁组织瓣手术即在椎前筋膜之前进行，咽后瓣组织包括粘膜、咽纤维膜和咽上缩肌在内。因咽的主要血管神经皆循咽侧壁走行，故咽后壁组织瓣手术时不易伤及。 -
第2题：
简述聚合酶链反应（PCR）方法的原理和应用。
正确答案:PCR是体外DNA扩增技术，是利用耐热DNA聚合酶及天然复制螺旋结构的原理，使极微量DNA片断在短时间内通过变性、退火、延伸等循环周期扩增到106-107倍，达到极易检测DNA的敏感方法。具有高度敏感、操作简便、快速等特点。目前，此法已在医学中广泛应用，如病原体DNA检测，细胞因子、T细胞受体、免疫球蛋白及补体研究，肿瘤基因、遗传基因检测，遗传性疾病的产前诊断及DNA克隆、重组，基因工程等；但要选择适当的阳性和阴性对照，以排除假阴性和假阳性。 -
第3题：
简述PCR原理及其基本反应步骤。
正确答案:PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：
①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；
②模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；
③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板互补的DNA链。 -
第4题：
简述青霉素G的作用、临床应用、不良反应及其防治措施？
正确答案:药理作用：青霉素G抗菌作用很强，在细菌繁殖期低浓度抑菌，较高浓度杀菌。
大多数球菌（G+：溶血链~、草绿色链~、肺炎~、葡萄~； G–： 脑膜炎~、淋球奈瑟菌）
G杆菌（白喉~、炭疽~、破伤风~、产气荚膜~、乳酸~）
螺旋体：梅毒，钩端
放线菌
对大多数G－杆菌作用较弱，对肠球菌不敏感，对真菌、原虫、立克次体、病毒等无作用
易耐药：金葡菌、淋病奈瑟菌、肺炎球菌等
临床作用：溶血性链球菌引起：蜂窝织炎、咽炎、丹毒、猩红热、扁
1.桃体炎、心内膜炎等
2.肺炎球菌引起：大叶性肺炎、脓胸等
3.脑膜炎球菌引起：流脑
4.草绿色链球菌引起：心内膜炎
5.放线菌病、梅毒、回归热、钩端螺旋体病及预防感染性心内膜炎以上均列为首选药。
6.白喉、破伤风。青霉素必须与抗毒素合用。
7.也可治疗淋球菌引起的淋病（次选）。
不良反应：
（1）变态反应
为青霉素类最常见的不良反应，在各种药物中居首位。
常见：皮疹、药热、荨麻疹等过敏反应
最严重：过敏性休克
（2）赫氏反应。
预防：环甲膜穿刺、海姆立克急救法。 -
第5题：
简述PCR及其临床应用。
正确答案:聚合酶链反应（PCR）：利用DNA聚合酶（如TagDNA聚合酶）等在体外条件下，催化一对引物间的特异DNA片段合成的基因体外扩增技术。引物：单链DNA片段。过程：变性DNA双链-单链（93～98℃），退火引物与模板结合（37～65℃），延伸双链合成（70～75℃）。常见PCR技术的类型：原位PCR、逆转录PCR（RT-PCR）及定量RT-PCR、反向PCR、PCR-SSCP、PCR-ELISA.固相锚定PCR、mRNA差异显示逆转录PCR。PCR的应用：（1）在感染性疾病中的应用：对传染性疾病进行病原学确证诊断；对病原体进行基因分型和同源性比较；克隆病原体各种蛋白质的基因，用于蛋白表达，制备诊断试剂或疫苗；发现新病原体；克隆病原体各种基因，建立基因表达载体，用于基因治疗。（2）遗传性疾病的基因诊断：发现的遗传病有4000多种；产前诊断PCR-RFLP；PCR-ASO。（3）肿瘤的研究及诊断：癌基因与抑癌基因。（4）在法医学中的应用：个人认识；亲子鉴定。（5）其他应用：DNA克隆；引入点突变、缺失或插入；重组PCR；DNA测序；示差PCR。 -
第6题：
问答题简述PCR相关技术及应用。正确答案： 聚合酶链反应，是一种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的的方法，因此也称为基因的体外扩增法。是20世纪80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点。其应用主要是以下几个方面：
（1）科学研究：
基因克隆；DNA测序；分析突变；基因重组与融合；检测基因的修饰；鉴定与调控蛋白质结构的DNA序列；转座子插入位点的绘图；合成基因的构建；构建克隆或表达载体；检测某基因的内切酶多态性等。
（2）临床诊断：
细菌、病毒、螺旋体、支原体、衣原体、立克次氏体、分枝杆菌等病原体的鉴定；人类遗传病的鉴定；诊断遗传疾患；临测临床标本中病原体的核酸序列；对法医学标本做遗传学鉴定；分析激活癌基因中的突变情况；生成克隆化双链DNA中的特异序列作为探针。解析： 暂无解析 -
第7题：
问答题简述PCR的原理及其应用。正确答案： PCR技术是模拟体内条件下，应用DNA聚合酶反应特异性扩增某一DNA片段的技术。它根据待扩增区域两端已知序列合成两个与模板DNA互补的核苷酸引物，这一单链引物的序列决定了待扩增片段的特异性和片段长度，当有模板DNA存在时，引物便可在一定的复性温度下特异地与热变性形成单链的DNA模板互补形成“退火”。当有DNA聚合酶和dNTP存在时，便可在一定条件下，按5（→3（方向从引物端合成DNA链，从而可以产生倍增的DNA片段，当经过30～35个周期后便可产生100万倍以上的所需DNA片段。由于PCR扩增技术的快速、简便、准确、可靠，因此，该技术已广泛应用于遗传病的基因诊断，病原体的检测，肿瘤的DNA诊断，法医学亲权鉴定，性别鉴定以及在DNA水平上研究生物进化等。解析： 暂无解析 -
第8题：
问答题简述PCR方法在食品检测中的应用。正确答案： 转基因食品的检测；病原菌、病毒的检测（RT-PCR）、过敏源的检测解析： 暂无解析 -
第9题：
问答题PCR检测技术有何临床应用。正确答案： （1）PCR在病原微生物的检测中的应用；（2）PCR在遗传病中的应用；（3）PCR在肿瘤中的应用；（4）其它方面的应用：PCR技术除用于临床诊断和治疗外，还可用于DNA指纹、个体识别、亲子关系识别、法医物证等。解析： 暂无解析 -
第10题：
简述关节松动术的四级手法及其临床应用。
正确答案: Ⅰ级：治疗者在关节活动的起始端，小范围、节律性的来回推动关节。
Ⅱ级：治疗者在关节活动允许范围内，大范围、节律性的来回推动关节，但不接触关节活动的起始端和终末端。
Ⅲ级：治疗者在关节活动允许范围内，大范围、节律性的来回推动关节，每次均接触关节活动的终末端，并能感觉到关节周围软组织的紧张。
Ⅳ级：治疗者在关节活动的终末端，小范围、节律性的来回推动关节，每次均接触关节活动的终末端，并能感觉到关节周围软组织的紧张。
临床应用：Ⅰ、Ⅱ级：用于治疗因疼痛引起的关节活动受限。Ⅲ级用于治疗关节疼痛伴有僵硬。Ⅳ级用于治疗关节周围组织粘连、挛缩而引起的活动受限。 -
第11题：
简述PCR技术在免疫学中的应用。
正确答案:1.HLA分型监测HLA系统的特定等位基因与某些疾病的发生方面，PCR技术极大地提高了HLA分型的特异性和敏感性。
2.用固定PCR（A-PCR）进行T细胞受体、免疫球蛋白及补体的研究。
3.病原体的检测病毒特别是逆转录病素均取得了较好的结果。
4.用于自身免疫性疾病基因谱的研究
5.淋巴因子定量。 -
第12题：
简述PCR基因扩增仪的实际应用。
正确答案:PCR基因扩增仪广泛应用于医学领域，主要包括：感染性疾病的分子诊断和研究;遗传性疾病的分子诊断和研究;恶性肿瘤的分子诊断和研究; PCR扩增仪在移植配型上的应用;PCR扩增仪在法医学上的应用;PCR扩增仪在分子生物学中其他领域的应用。 -
第13题：
简述PCR的原理及其应用。
正确答案:PCR技术是模拟体内条件下，应用DNA聚合酶反应特异性扩增某一DNA片段的技术。它根据待扩增区域两端已知序列合成两个与模板DNA互补的核苷酸引物，这一单链引物的序列决定了待扩增片段的特异性和片段长度，当有模板DNA存在时，引物便可在一定的复性温度下特异地与热变性形成单链的DNA模板互补形成“退火”。当有DNA聚合酶和dNTP存在时，便可在一定条件下，按5（→3（方向从引物端合成DNA链，从而可以产生倍增的DNA片段，当经过30～35个周期后便可产生100万倍以上的所需DNA片段。由于PCR扩增技术的快速、简便、准确、可靠，因此，该技术已广泛应用于遗传病的基因诊断，病原体的检测，肿瘤的DNA诊断，法医学亲权鉴定，性别鉴定以及在DNA水平上研究生物进化等。 -
第14题：
简述HLA分型方法的种类及其临床应用。
正确答案:分型方法：
①血清学分型法（方法名称，检测对象）；
②细胞学分型法（名称及检测对象）；
③分子生物学分型方法（名称、特点）。
临床应用：
①器官移植时组织配型；
②监测排斥反应；
③发现新的HLA型别或等位基因，研究HLA的多态性；
④研究HLA与某些疾病发生的关系等。 -
第15题：
问答题简述PCR引物设计的基本原则及其注意要点正确答案： 原则：首先引物与模板的序列要紧密互补，其次引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构，再次引物不能再模板的非等位点引发DNA聚合反应（即错配）。
注意要点：
1、引物的长度一般为15-30bp，常用的是18-27bp，但不应大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适合于TaqDNA聚合酶进行反应。
2、引物序列在模板内应当没有相似性较高，尤其是3’端相似性较高的序列，否则容易导致错配。引物3’端出现3个以上的连续碱基，如GGG或CCC，也会使错误引发几率增加。
3、引物3’端的末位碱基对Taq酶的DNA合成效率有较大的影响。不同的末位碱基在错配位置导致不同的扩增效率，末位碱基为A的错配效率明显高于其他3个碱基，因此应当避免在引物的3’端使用碱基。另外，引物二聚体或发夹结构也可能导致PCR反应失败。5’端序列对PCR影响不太大，因此常用来引进修饰位点或标记物。
4、引物序列的GC含量一般为40-60%，过高或过低都不利于引发反应。上下游引物的GC含量不能相差太大。
5、引物所对应模板位置序列的Tm值在72℃左右可使复性条件最佳。Tm值的计算有很多种方法，如按公式Tm=4（G+C）+2（A+T），在Oligo软件中使用的是最邻近法（thenearestneighbormethod）。
6、G值是指DNA双链形成所需的自由能，该值反映了双链结构内部碱基对的相对稳定性。应当选用3’端G值较低（绝对值不超过9），而在5’端和中间G值相对较高的引物。引物的3’端的G值过高，容易在错配位点形成双链结构并引发DNA聚合反应。
7、引物二聚体及发夹结构的能值过高（超过4.5kcal/mol）易导致产生引物二聚体带，并且降低引物有效浓度而使PCR反应不能正常进行。
8、对引物的修饰一般是在5’端增加酶切位点，应根据下一步实验中要插入PCR产物的载体的相应序列而确定。解析： 暂无解析 -
第16题：
问答题简述PCR基因扩增仪的实际应用。正确答案： PCR基因扩增仪广泛应用于医学领域，主要包括：感染性疾病的分子诊断和研究；遗传性疾病的分子诊断和研究；恶性肿瘤的分子诊断和研究；PCR扩增仪在移植配型上的应用；PCR扩增仪在法医学上的应用；PCR扩增仪在分子生物学中其他领域的应用。解析： 暂无解析 -
第17题：
问答题简述HLA分型方法的种类及其临床应用。正确答案： 分型方法：
①血清学分型法（方法名称，检测对象）；
②细胞学分型法（名称及检测对象）；
③分子生物学分型方法（名称、特点）。
临床应用：
①器官移植时组织配型；
②监测排斥反应；
③发现新的HLA型别或等位基因，研究HLA的多态性；
④研究HLA与某些疾病发生的关系等。解析： 暂无解析 -
第18题：
问答题简述PCR及其临床应用。正确答案： 聚合酶链反应（PCR）：利用DNA聚合酶（如TagDNA聚合酶）等在体外条件下，催化一对引物间的特异DNA片段合成的基因体外扩增技术。引物：单链DNA片段。过程：变性DNA双链-单链（93～98℃），退火引物与模板结合（37～65℃），延伸双链合成（70～75℃）。常见PCR技术的类型：原位PCR、逆转录PCR（RT-PCR）及定量RT-PCR、反向PCR、PCR-SSCP、PCR-ELISA.固相锚定PCR、mRNA差异显示逆转录PCR。PCR的应用：（1）在感染性疾病中的应用：对传染性疾病进行病原学确证诊断；对病原体进行基因分型和同源性比较；克隆病原体各种蛋白质的基因，用于蛋白表达，制备诊断试剂或疫苗；发现新病原体；克隆病原体各种基因，建立基因表达载体，用于基因治疗。（2）遗传性疾病的基因诊断：发现的遗传病有4000多种；产前诊断PCR-RFLP；PCR-ASO。（3）肿瘤的研究及诊断：癌基因与抑癌基因。（4）在法医学中的应用：个人认识；亲子鉴定。（5）其他应用：DNA克隆；引入点突变、缺失或插入；重组PCR；DNA测序；示差PCR。解析： 暂无解析