各种色谱分离（共价、聚焦色层分离、凝胶过滤、亲和）的机理是什么？

题目

各种色谱分离（共价、聚焦色层分离、凝胶过滤、亲和）的机理是什么？

相似考题

1.根据分配系数不同来分离组分的色谱是()A.吸附色谱B.分配色谱C.离子交换色谱D.凝胶过滤色谱

2.根据分子大小不同来分离组分的色谱是：( )A.吸附色谱B.分配色谱C.离子交换色谱D.凝胶过滤色谱

3.以下分离方法是依据分子大小进行混合物分离的是A.纸色谱 B.凝胶过滤色谱 C.离子交换色谱 D.大孔树脂色谱 E.活性炭吸附色谱

4.利用羟丙基葡聚糖凝胶过滤柱色谱法分离苷类化合物时,①()先分离出来,②()随后分离出来,③()最后分离出来。

参考答案和解析
正确答案:（1）共价作用色层分离法：是利用溶质分子与层析剂凝胶之间的共价吸附作用将目的产物与其他溶质分子分离开来的一种层析方法。首先要制备层析剂，具有共价反应活性的二硫键层析剂可用葡聚糖凝胶或琼脂糖胶作材料制得，有谷胱甘型二硫键层析剂和巯基丙基型二硫键层析剂等。
（2）聚焦色层分离法：利用蛋白质分子或其他两性分子等电点的不同，在一个稳定的、连续的、线性的pH梯度中进行蛋白质的分离纯化。两性物质如蛋白质等混合物上好样后，用洗脱缓冲液淋洗，蛋白质随其下移至各自的等电点聚焦，移动速度明显减缓，最后按等电点顺序流出柱外。
（3）凝胶色谱：以凝胶为固定相，根据各物质分子大小不同而进行分离的色谱技术，因而又称为分子筛色谱、空间排阻色谱或尺寸排阻色谱。凝胶是一种不带电荷的具有三维空间的多孔网状结构的物质，凝胶每个颗粒的微细结构如一个筛子。
（4）亲和色谱作为色谱分离的一个分支，对生物大分子化合物的分离纯化具有特别重要的意义。众所周知，生物体中许多大分子化合物具有与其结构相对应的专一分子可逆结合的特性。把与目的产物有特异亲和力的生物分子固定化后作为固定相，当含有目的产物的混合物（流动相）流经此固定相时，即可把目的产物从混合物中分离出来。
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  • 第1题：

    A.吸附色谱
    B.凝胶过滤色谱
    C.离子交换色谱
    D.大孔树脂色谱
    E.分配色谱

    运用吸附能力的差异进行分离的色谱分离法是（ ）。

    答案：A
    解析：
    ⒈ 吸附色谱是利用吸附剂对被分离化合物分子的吸附能力的差异，而实现分离的色谱。　⒉ 离子交换色谱主要基于混合物中各成分解离度差异进行分离。　⒊ 分配色谱利用被分离成分在固定相和流动相之间的分配系数的不同而达到分离。

  • 第2题：

    色谱按分离原理分（）。

    • A、吸附色谱
    • B、凝胶色谱
    • C、分配色谱
    • D、离子交换色谱
    • E、生物亲和色谱

    正确答案:C,D

  • 第3题：

    根据色谱机理，色谱柱分为：反相色谱、正相色谱、（）、凝胶过滤色谱（或亲和色谱）。


    正确答案:离子交换色谱

  • 第4题：

    何谓亲和色层分离法？亲和力的本质是什么？亲和色层中常用的亲和关系有哪几种？


    正确答案: （1）利用生物分子间的这种特异性结合作用的原理进行生物物质分离纯化的技术称为亲和纯化技术（Affinitypurification）。亲和层析是利用偶联亲和配基的亲和吸附介质为固定相亲和吸附目标产物，使目标产物得到分离纯
    化的液相层析法。
    （2）亲和力的本质：
    1.静电作用：亲和作用分子对的结合部位上带有相反电荷时，产生静电引力。在中性pH下，蛋白质分子上酸性氨基酸残基可带负电荷，碱性氨基酸残基可带正电荷。此外N末端氨基酸的-氨基带正电，C末端氨基酸的羧基带负电。
    2.氢键：如果亲和作用分子对的一方分子中含有氧原子或氮原子，结合部位之间可以产生氢键作用，即形成O···H－O或O···H－N。氢键的产生与否受结合部位之间位置关系的严格制约。
    3.疏水性相互作用：如果亲和作用分子对的一方分子上含有芳香环或烃基链等疏水基，另一方的结合部位上也含有疏水区，则两者之间可发生疏水性相互作用。
    4.配位键：如果亲和作用分子对均与同一金属原子配位，则两者之间可通过金属配位键间接结合。
    5.弱共价键：弱共价键是指结合力较弱的可逆共价键。当亲和作用分子对之间满足形成弱共价键的条件时可能形成弱共价键。
    具有亲和作用的分子对之间具有“钥匙”和“锁孔”的空间结构关系。
    （3）亲和色层中常用的亲和体系：
    特异性
    亲和作用体系高特异性
    抗原----单克隆抗体
    荷尔蒙----受体蛋白
    核酸----互补碱基链段、核酸结合蛋白
    酶----底物、产物、抑制剂群特异性
    免疫球蛋白----A蛋白、G蛋白
    酶----辅酶
    凝集素----糖、糖蛋白、细胞、细胞表面受体
    酶、蛋白质----肝素
    酶、蛋白质----活性色素（染料）
    酶、蛋白质----过度金属离子
    酶、蛋白质----氨基酸（组氨酸等）

  • 第5题：

    各种色谱分离（吸附、分配、离子交换、凝胶、亲和）的机理是什么？


    正确答案: 吸附色谱是基于固定相对不同物质的吸附力不同而使混合物分离。
    分配色谱是基于混合物在两液相中分配系数不同而分离。
    离子交换色谱是基于离子交换树脂上可电离的离子与流动相中具有相同电荷的溶质离子进行可逆交换，由于混合物中不同溶质对交换剂具有不同的亲和力而将它们分离。
    凝胶色谱是基于各物质分子大小不同而进行分离的。
    亲和色谱是基于生物分子之间专一结合能力而分离。

  • 第6题：

    凝胶过滤色谱又称排阻色谱、（），其分离原理主要是（），根据凝胶的（）和被分离化合物分子的（）而达到分离目的。


    正确答案:分子筛色谱；分子筛作用；孔径大小；大小差别

  • 第7题：

    亲和色谱的分离机制是什么？有何特点？


    正确答案: 传统的观念认为亲和色谱是基于配基-配体亲和反应的原理，利用色谱的差速迁移理论，实现对目标分子的分离，仅仅是一种组分分离的选择性过滤法。然而，这一理论是建立在配基-配体亲和作用是均相反应和宏观平衡态热力学的基础上的。但是，实际上目标分子在两相间分配系数过大，且在固定相上的吸附等温线多不呈线性。所以，关于生物大分子在亲和色谱中的保留机制及色谱过程数学模型的研究一直是一个相对薄弱的环节，有待进一步的完善.亲和色谱具有较高的专属性，经其分离，纯化，浓集后的生物样品具有较高的纯度，大大降低了后续测定（如HPLC.时的背景噪音，进而使得后续测定具有极高的灵敏度。

  • 第8题：

    单选题
    用于蛋白质分离过程中的脱盐和更换缓冲液的色谱是（）
    A

    离子交换色谱

    B

    亲和色谱

    C

    凝胶过滤色谱

    D

    反相色谱


    正确答案： D
    解析： 暂无解析

  • 第9题：

    多选题
    色谱按分离原理分（）。
    A

    吸附色谱

    B

    凝胶色谱

    C

    分配色谱

    D

    离子交换色谱

    E

    生物亲和色谱


    正确答案： E,C
    解析： 暂无解析

  • 第10题：

    填空题
    色层分离法又叫（） ，可分为离子交换色谱分离、（）色谱分离、色谱分离。

    正确答案： 色谱分离法,吸附,分配
    解析： 暂无解析

  • 第11题：

    填空题
    凝胶过滤色谱又称排阻色谱、（），其原理主要是（），根据凝胶的（）和被分离化合物分子的（）而达到分离目的。

    正确答案： 分子筛色谱,分子筛作用,孔径,大小
    解析： 暂无解析

  • 第12题：

    问答题
    影响凝胶过滤色谱分离效果的因素。

    正确答案： 流速
    影响洗脱液流速的因素：洗脱液加在柱上的压力（为保持层析过程中恒定的压力，可使用恒压瓶）；
    凝胶交联度；凝胶颗粒大小。
    流速过低：样品横向扩散增大，峰变宽，分辨率降低，洗脱时间长流速过高：洗脱峰重叠，柱压增大，分离效果变差线性流速控制在2～10cm/h
    加样体积
    体积过大：平台洗脱峰或相邻峰重叠
    体积过小：目的蛋白收集量少、稀释倍数大、浓度低
    样品浓度
    进样前，样品应高度浓缩，浓度为10～20mg/ml分组分离&脱盐除杂：适当提高样品浓度分级分离&分析性实验：浓度低
    离子强度
    可防止蛋白质与蛋白质之间或与凝胶介质之间的相互作用常用盐溶液：20-100mmol/LNaCl浓度过高引起凝胶柱床体积变化
    解析： 暂无解析

  • 第13题：

    对于凝胶柱色谱法，下列说法正确的是（）

    • A、凡是多孔性物质都可用于凝胶柱色谱作固定相
    • B、凝胶柱色谱法的分离效果取决于凝胶孔径的大小和被分离组分分子的大小
    • C、被分离组分分子越小，越容易通过凝胶柱，柱内保留时间越短
    • D、凝胶色谱法按分离原理不同可分为凝胶渗透色谱法和凝胶过滤色谱法

    正确答案:B

  • 第14题：

    根据色谱分离过程的机理，色谱法可分为吸附色谱、气-液分配色谱、离子交换色谱、凝胶色谱等。


    正确答案:正确

  • 第15题：

    影响凝胶过滤色谱分离效果的因素。


    正确答案:流速
    影响洗脱液流速的因素：洗脱液加在柱上的压力（为保持层析过程中恒定的压力，可使用恒压瓶）；
    凝胶交联度；凝胶颗粒大小。
    流速过低：样品横向扩散增大，峰变宽，分辨率降低，洗脱时间长流速过高：洗脱峰重叠，柱压增大，分离效果变差线性流速控制在2～10cm/h
    加样体积
    体积过大：平台洗脱峰或相邻峰重叠
    体积过小：目的蛋白收集量少、稀释倍数大、浓度低
    样品浓度
    进样前，样品应高度浓缩，浓度为10～20mg/ml分组分离&脱盐除杂：适当提高样品浓度分级分离&分析性实验：浓度低
    离子强度
    可防止蛋白质与蛋白质之间或与凝胶介质之间的相互作用常用盐溶液：20-100mmol/LNaCl浓度过高引起凝胶柱床体积变化

  • 第16题：

    用于蛋白质分离过程中的脱盐和更换缓冲液的色谱是（）

    • A、离子交换色谱
    • B、亲和色谱
    • C、凝胶过滤色谱
    • D、反相色谱

    正确答案:C

  • 第17题：

    分离原理为分子筛的色谱为：（）

    • A、离子交换色谱
    • B、凝胶过滤色谱
    • C、聚酰胺色谱
    • D、硅胶色谱
    • E、氧化铝色谱

    正确答案:B

  • 第18题：

    凝胶过滤色谱又称排阻色谱、（），其原理主要是（），根据凝胶的（）和被分离化合物分子的（）而达到分离目的。


    正确答案:分子筛色谱；分子筛作用；孔径；大小

  • 第19题：

    问答题
    各种色谱分离（共价、聚焦色层分离、凝胶过滤、亲和）的机理是什么？

    正确答案： （1）共价作用色层分离法：是利用溶质分子与层析剂凝胶之间的共价吸附作用将目的产物与其他溶质分子分离开来的一种层析方法。首先要制备层析剂，具有共价反应活性的二硫键层析剂可用葡聚糖凝胶或琼脂糖胶作材料制得，有谷胱甘型二硫键层析剂和巯基丙基型二硫键层析剂等。
    （2）聚焦色层分离法：利用蛋白质分子或其他两性分子等电点的不同，在一个稳定的、连续的、线性的pH梯度中进行蛋白质的分离纯化。两性物质如蛋白质等混合物上好样后，用洗脱缓冲液淋洗，蛋白质随其下移至各自的等电点聚焦，移动速度明显减缓，最后按等电点顺序流出柱外。
    （3）凝胶色谱：以凝胶为固定相，根据各物质分子大小不同而进行分离的色谱技术，因而又称为分子筛色谱、空间排阻色谱或尺寸排阻色谱。凝胶是一种不带电荷的具有三维空间的多孔网状结构的物质，凝胶每个颗粒的微细结构如一个筛子。
    （4）亲和色谱作为色谱分离的一个分支，对生物大分子化合物的分离纯化具有特别重要的意义。众所周知，生物体中许多大分子化合物具有与其结构相对应的专一分子可逆结合的特性。把与目的产物有特异亲和力的生物分子固定化后作为固定相，当含有目的产物的混合物（流动相）流经此固定相时，即可把目的产物从混合物中分离出来。
    解析： 暂无解析

  • 第20题：

    单选题
    糖分离中不能用的色谱方法是（　　）。
    A

    纤维素色谱

    B

    聚酰胺色谱

    C

    纸色谱

    D

    凝胶过滤色谱

    E

    硅胶色谱


    正确答案： E
    解析：
    聚酰胺色谱系通过分子中的酰胺羰基与酚类、黄酮类化合物的酚羟基，或酰胺键上的游离胺基与醌类、脂肪羧酸上的羰基形成氢键缔合而产生吸附。多糖结构中不具有酚羟基或羰基，不能产生吸附作用。

  • 第21题：

    问答题
    各种色谱分离（吸附、分配、离子交换、凝胶、亲和）的机理是什么？

    正确答案： 吸附色谱是基于固定相对不同物质的吸附力不同而使混合物分离。
    分配色谱是基于混合物在两液相中分配系数不同而分离。
    离子交换色谱是基于离子交换树脂上可电离的离子与流动相中具有相同电荷的溶质离子进行可逆交换，由于混合物中不同溶质对交换剂具有不同的亲和力而将它们分离。
    凝胶色谱是基于各物质分子大小不同而进行分离的。
    亲和色谱是基于生物分子之间专一结合能力而分离。
    解析： 暂无解析

  • 第22题：

    问答题
    何谓亲和色层分离法？亲和力的本质是什么？亲和色层中常用的亲和关系有哪几种？

    正确答案： （1）利用生物分子间的这种特异性结合作用的原理进行生物物质分离纯化的技术称为亲和纯化技术（Affinitypurification）。亲和层析是利用偶联亲和配基的亲和吸附介质为固定相亲和吸附目标产物，使目标产物得到分离纯
    化的液相层析法。
    （2）亲和力的本质：
    1.静电作用：亲和作用分子对的结合部位上带有相反电荷时，产生静电引力。在中性pH下，蛋白质分子上酸性氨基酸残基可带负电荷，碱性氨基酸残基可带正电荷。此外N末端氨基酸的-氨基带正电，C末端氨基酸的羧基带负电。
    2.氢键：如果亲和作用分子对的一方分子中含有氧原子或氮原子，结合部位之间可以产生氢键作用，即形成O···H－O或O···H－N。氢键的产生与否受结合部位之间位置关系的严格制约。
    3.疏水性相互作用：如果亲和作用分子对的一方分子上含有芳香环或烃基链等疏水基，另一方的结合部位上也含有疏水区，则两者之间可发生疏水性相互作用。
    4.配位键：如果亲和作用分子对均与同一金属原子配位，则两者之间可通过金属配位键间接结合。
    5.弱共价键：弱共价键是指结合力较弱的可逆共价键。当亲和作用分子对之间满足形成弱共价键的条件时可能形成弱共价键。
    具有亲和作用的分子对之间具有“钥匙”和“锁孔”的空间结构关系。
    （3）亲和色层中常用的亲和体系：
    特异性
    亲和作用体系高特异性
    抗原----单克隆抗体
    荷尔蒙----受体蛋白
    核酸----互补碱基链段、核酸结合蛋白
    酶----底物、产物、抑制剂群特异性
    免疫球蛋白----A蛋白、G蛋白
    酶----辅酶
    凝集素----糖、糖蛋白、细胞、细胞表面受体
    酶、蛋白质----肝素
    酶、蛋白质----活性色素（染料）
    酶、蛋白质----过度金属离子
    酶、蛋白质----氨基酸（组氨酸等）
    解析： 暂无解析

  • 第23题：

    填空题
    凝胶过滤色谱又称排阻色谱、（），其分离原理主要是（），根据凝胶的（）和被分离化合物分子的（）而达到分离目的。

    正确答案： 分子筛色谱,分子筛作用,孔径大小,大小差别
    解析： 暂无解析

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