简述第一代DNA分析技术--DNA指纹图的基本步骤。
题目
简述第一代DNA分析技术--DNA指纹图的基本步骤。
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第1题：
第一代DNA分析技术——DNA指纹图（限制性片段长度多态性分析，RFLP）的原理是什么？
参考答案：一种限制性内切酶只能在DNA分子中特定的碱基序列（识别座位）处发生作用，将其酶解切开。
限制性内切酶的识别序列具有双轴对称的结构，序列转180°不变，即回文顺序。
对同一种酶、不同个体基因组DNA来说，其酶切点的数目、位置不同，因此，切出的片段长度和数目会有差异。
限制性内切酶的选择是根据实验的要求，使用探针的种类，观察多态性的程度，检测片段的大小而定的。
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第2题：
法医DNA三大基本技术包括:DNA指纹技术,PCR扩增片段长度多态性分析技术,线粒体DNA测序。()此题为判断题(对，错)。
参考答案：对
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第3题：
DNA指纹图谱技术是酵母分类和检测酵母是否发生变异的有效工具。
正确答案:正确 -
第4题：
目前中药指纹图谱研究的方法主要有（）
- A、 TLC指纹图谱
- B、 HPLC指纹图谱
- C、 GC指纹图谱
- D、 MS指纹图谱
- E、 DNA指纹图谱
正确答案:C,D -
第5题：
重组DNA技术常包括哪些基本步骤？
正确答案: ①获得目的基因；
②与克隆载体连接，形成新的重组DNA分子；
③用重组DNA分子转化受体细胞，并能在受体细胞中复制和遗传；
④对转化子筛选和鉴定。在具体工作中选择哪条技术路线；
⑤对获得外源基因的细胞或生物体通过培养，获得所需的遗传性状或表达出所需要的产物。主要取决于基因的来源、基因本身的性质和该项遗传工程的目的。 -
第6题：
什么是DNA重组（基因克隆）？简述DNA重组的步骤及其用途。
正确答案:基因克隆（gene cloning）是指含有单一DNA重组体的无性系或指将DNA重组体引进受体细胞中，建立无性系的过程。一个完整的基因克隆过程包括：
（1）选择合适的目的基因和栽体；
（2）用限制性内切酶处理目的基因和栽体；
（3）连接目的基因与栽体；
（4）将重组体导入受体细胞。
（5）筛选转化细胞并扩大培养。基因克隆技术可用于构建基因组文库和cDNA文库，也可以用于克隆某一特定的基因，对其进行序列分析和功能研究。 -
第7题：
简述基因克隆（DNA重组技术）的基本过程。
正确答案:包括以下几个步骤：
（1）提取外源目的基因（或称外源基因），酶解连接到另一DNA分子上（克隆载体），形成一个新的重组DNA分子；
（2）将这个重组DNA分子转入受体细胞并在受体细胞中复制保存，这个过程称为转化（transformation）；
（3）对那些吸收了重组DNA的受体细胞进行筛选和鉴定。 -
第8题：
名词解释题DNA 指纹图谱正确答案： 指不同基因组间的不同多形态限制性片段模式。解析： 暂无解析 -
第9题：
问答题何为DNA的半保留复制？简述半保留复制的基本步骤。正确答案： 复制开始时亲代DNA双股链间的氢键断裂，双链分开，然后以每一条链为模板，分别复制出与其互补的子代链，从而使一个DNA分子转变成与之完全相同的两个DNA分子。按照这种方式复制出来的每个子代双链DNA分子中，都含有一条来自亲代的旧链和新合成的DNA链，所以把这种复制方式称为半保留复制。解析： 暂无解析 -
第10题：
问答题DNA重组是酶在生物技术上的成功应用，请简述DNA重组的步骤？正确答案： 1.目的基因的获得
方法有：基因文库（cDNA文库、基因组文库）、PCR（放达效应）、人工合成
2.目的基因与载体连接
方法有：——粘性末端——全同源性、定向克隆（两种酶切）
定向克隆可防止高背景的产生，因为全同源性会造成载体自连、重组子、目的基因自连三种可能，重组子可能还会出现正反插入的情况，使筛选过程复杂。
——平末端
酶切后也有可能产生平末端，也会出现高背景。
——人工接头——连接子（连入带粘性酶切位点的片断，再酶切）、普适子（一条链连上片断，成为粘性末端）、T-A克隆（PCR中使用的Taq聚合酶会根据模板延伸至后在链末尾加上一个A，可在克隆载体上加上T，使之连接）、同聚物加尾（末端转移酶加尾）
由于平末端连接效率比较低，可在其两端人工修饰
反应体系：目的基因、载体、T4连接酶、缓冲液
3.重组DNA导入受体（宿主）细胞——转化、转染、转导、感染
主要运用的是原核转化（导入感受态细菌，感受态：处于易于吸收外缘DNA的状态，方法：氯化钙法：DNA与其形成羟基-磷酸钙复合物，抗DNase水解）、真核转染。
4.选与鉴定
方法：
——遗传学（表形）——插入失活、蓝-白筛选、抗性基因（四环素Tet、氨苄青霉素Amp）
——酶切，在电泳（分子量、构想）
——PCR（特异性引物）
——核酸杂交（southernblot）
——免疫学方法（westernblot）
——DNA测序（sanger、焦磷酸测序）解析： 暂无解析 -
第11题：
问答题简述DNA指纹图的特征。正确答案： 孟德尔遗传；组织同一性；高度的个体特异性；突变率。解析： 暂无解析 -
第12题：
问答题DNA指纹图谱的基本特征？正确答案： ①遗传方式：孟德尔规律、所有片段独立遗传
②个体的组织同一性：稳定一致
③群体遗传学特征
④突变率：配子细胞形成时重排、重组与交换解析： 暂无解析 -
第13题：
DNA指纹图谱的基本特征？
参考答案：①遗传方式：孟德尔规律、所有片段独立遗传
②个体的组织同一性：稳定一致
③群体遗传学特征
④突变率：配子细胞形成时重排、重组与交换
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第14题：
法医DNA技术中的三大基本技术指()①DNA 指纹技术②荧光显微技术③PCR 扩增片段长度多态性分析技术④线粒体DNA 测序A、①②③
B、②③④
C、①②④
D、①③④
参考答案：D
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第15题：
DNA指纹图的孟德尔遗传
正确答案: 大多数谱带以均等的机会由亲代传递给子代，子代指纹图谱的所有谱带都可在双亲的图谱中找到，大子代的谱带不是简单的各一般来自父亲、母亲。来自母亲的谱带数可能与来自父亲的谱带数不同。 -
第16题：
DNA 指纹图谱
正确答案: 指不同基因组间的不同多形态限制性片段模式。 -
第17题：
简述DNA指纹分析的基本流程。
正确答案:DNA指纹分析的基本流程为：DNA的提纯与纯化→限制性内切酶消化→电泳分离→分子杂交→指纹图的显示。 -
第18题：
DNA重组是酶在生物技术上的成功应用，请简述DNA重组的步骤？
正确答案:1.目的基因的获得
方法有：基因文库（cDNA文库、基因组文库）、PCR（放达效应）、人工合成
2.目的基因与载体连接
方法有：——粘性末端——全同源性、定向克隆（两种酶切）
定向克隆可防止高背景的产生，因为全同源性会造成载体自连、重组子、目的基因自连三种可能，重组子可能还会出现正反插入的情况，使筛选过程复杂。
——平末端
酶切后也有可能产生平末端，也会出现高背景。
——人工接头——连接子（连入带粘性酶切位点的片断，再酶切）、普适子（一条链连上片断，成为粘性末端）、T-A克隆（PCR中使用的Taq聚合酶会根据模板延伸至后在链末尾加上一个A，可在克隆载体上加上T，使之连接）、同聚物加尾（末端转移酶加尾）
由于平末端连接效率比较低，可在其两端人工修饰
反应体系：目的基因、载体、T4连接酶、缓冲液
3.重组DNA导入受体（宿主）细胞——转化、转染、转导、感染
主要运用的是原核转化（导入感受态细菌，感受态：处于易于吸收外缘DNA的状态，方法：氯化钙法：DNA与其形成羟基-磷酸钙复合物，抗DNase水解）、真核转染。
4.选与鉴定
方法：
——遗传学（表形）——插入失活、蓝-白筛选、抗性基因（四环素Tet、氨苄青霉素Amp）
——酶切，在电泳（分子量、构想）
——PCR（特异性引物）
——核酸杂交（southernblot）
——免疫学方法（westernblot）
——DNA测序（sanger、焦磷酸测序） -
第19题：
简述使用DNA重组技术生产人胰岛素的基本步骤和过程。
正确答案:（1）提取人类的胰岛素基因（或称外源基因），酶解连接到另一DNA分子上（克隆载体），形成一个新的重组DNA分子；
（2）将这个重组DNA分子转入受体细胞并在受体细胞中复制保存，这个过程称为转化（transformation）；
（3）对那些吸收了重组DNA的受体细胞进行筛选和鉴定；
（4）对含有重组DNA的细胞进行大量培养，检测外源基因是否表达；
（5）分离提存表达的人胰岛素。 -
第20题：
问答题简述第一代DNA分析技术--DNA指纹图的基本步骤。正确答案： DNA提取及DNA浓度测定；
限制性内切酶的消化，将DNA分子切成小片段；
凝胶电泳分离DNA片段；
萨森转移；
杂交及自显影；
读DNA图谱（结果分析）；
确定DNA图谱的统计学概率。解析： 暂无解析 -
第21题：
问答题简述DNA指纹分析的基本流程。正确答案： DNA指纹分析的基本流程为：DNA的提纯与纯化→限制性内切酶消化→电泳分离→分子杂交→指纹图的显示。解析： 暂无解析 -
第22题：
问答题简述DNA指纹图的局限性与潜在的问题。正确答案： 灵敏度低、检材用量：一次检测多基因座DNA指纹图至少需要0.5-1.0ugDNA，相当于50ul血液，5ul精液，0.5-1.0ug组织和15根毛发。
对基因组DNA的质量要求高：提取的检材分子至少在20kb以上，腐败或降解检材DNA无法进行多基因座的DNA指纹图的检验。
多基因座DNA探针没有种属特异性：当物证检材中污染有动物DNA时，导致错误的结论。
高突变率：陌生带的出现可能导致假排除。
检验操作烦琐，实验环节多，实验周期较长（5-7天）。
统计学计算方法的理论尚待完善。
谱带飘逸，不是同一块凝胶的分析结果不能比对。一旦原有检材已用完就不能再进行比对检验。
不能解决来自2个以上个体混合检材的个体识别问题。解析： 暂无解析 -
第23题：
问答题第一代DNA分析技术——DNA指纹图（限制性片段长度多态性分析，RFLP）的原理是什么？正确答案： 一种限制性内切酶只能在DNA分子中特定的碱基序列（识别座位）处发生作用，将其酶解切开。
限制性内切酶的识别序列具有双轴对称的结构，序列转180°不变，即回文顺序。
对同一种酶、不同个体基因组DNA来说，其酶切点的数目、位置不同，因此，切出的片段长度和数目会有差异。
限制性内切酶的选择是根据实验的要求，使用探针的种类，观察多态性的程度，检测片段的大小而定的。解析： 暂无解析