简述PCR循环测序的基本原理。

题目

简述PCR循环测序的基本原理。

相似考题

1.能做PCR的仪器A.蛋白测序仪B.DNA测序仪C.DNA扩增仪D.读胶仪E.质谱仪

2.目前自动化测序的基本原理是基于A、链末端终止法B、化学降解法C、生物质谱法D、杂交测序法E、全新的测序原理

3.蛋白测序仪测定氨基酸排列顺序，DNA测序仪是测核苷酸排列顺序，能做DNA测序的物质是( )。A、质粒B、噬菌体C、PCR产物D、DNAE、A+B+C

4.淋病奈瑟菌耐药检测技术包括()A.DNA测序B. PCR-SSCPC. PCR-RDBD.基因芯片技术

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  • 第1题：

    细胞粘附分子基因的多态性测定方法有 ( )

    A、PCR-SSCP

    B、PCR-RFLP

    C、实时荧光PCR方法

    D、PCR-直接测序法

    E、时间分辨荧光免疫测定法


    参考答案：ABCD

  • 第2题：

    简述PCR循环测序的基本原理。


    本题答案：PCR技术能够快速、特异性地扩增靶DNA，应用PCR技术测定DNA序列分为两个步骤：先利用PCR扩增靶序列片段，制备测序模板，然后再利用PCR直接测定序列。PCR测序采用了热循环高效合成DNA的特性并结合双脱氧核苷酸终止法，使引物链终止的延伸产物数量在热循环过程中得到增加，因此称为循环测序。
    每个测序循环包括：
    ①PCR扩增制备的模板DNA变性成单链形式;
    ②标记引物与其中的一条链上的互补序列退火;
    ③退火后的引物在耐热DNA聚合酶催化下发生链延伸终止反应。
    本次循环产生的模板链与延伸终止链形成的双链的产物，在下一轮测序循环中，再次被变性，释放出模板链，作为又一轮引发反应的模板，同时积累下一轮循环产生的链终止产物。
    上述循环步骤重复20~40次，使链终止产物以线性方式获得扩增。

  • 第3题：

    能做PCR的仪器是

    A、蛋白测序仪

    B、DNA扩增仪

    C、质谱仪

    D、DNA测序仪

    E、读胶仪


    参考答案：B

  • 第4题：

    细胞黏附分子基因的多态性检测的验证方法是

    A.PCR-SSCP
    B.PCR-RFLP
    C.实时荧光PCR测定技术
    D.PCR直接测序法E.DGGE法

    答案：D
    解析：
    PCR直接测序法直接测得目的基因的序列，是最为准确的验证方法。

  • 第5题：

    何谓基因？简述基因测序的基本原理及其在基因诊断中的应用价值？


    正确答案:（1）基因是指能够为生物大分子（主要是蛋白质，还有tRNA、rRNA等核酸）编码的DNA片段。基因不仅可以通过复制把遗传信息传递给下一代，还可以使遗传信息得到表达。不同人种之间头发、肤色、眼睛、鼻子等有所不同，是基因差异所致。从这个意义上讲，基因就是能够表达一定基因产物的DNA序列。
    （2）DNA的序列分析即核酸一级结构的测定，是现代分子生物学中一项重要技术，也是基因诊断的第一手资料。传统的测序方法多采用放射性核素标记，手工进行DNA复制或裂解反应、凝胶电泳分离DNA片段，放射自显影以及人工判断核苷酸序列等程序来测定DNA序列。这无疑是费时的、准确性较差的方法。近年来发展起来的自动测序使DNA序列分析工作标准化、规范化、工厂化，极大地促进了DNA结构的研究。新型DNA自动测序仪，采用荧光染料标记技术及毛细管电泳方法进行测定，配合同步激光扫描读序，测定反应、灌胶、进样、电泳、扫描检测、数据分析全部实现了计算机程序控制的自动化，加快了检测速度，大大提高了测定的精确性。

  • 第6题：

    什么是PCR技术？PCR的基本原理是什么？


    正确答案:PCR即聚合酶链式反应，是一种在体外快速扩增特定目的基因或DNA序列的技术，故又称基因的体外扩增技术。它可以在试管中建立反应，经过数小时之后，就能将极微量的目的基因或DNA片断扩增数十万乃至千百万倍，无需经过繁琐费时的基因克隆程序，便可获得足够数到两精确的DNA拷贝。
    PCR的基本工作原理：以拟扩增的DNA分子为模板，以一对分别与模板5’末端和3’末端相互补的寡核苷酸片段为引物，在DNA聚合酶的作用下，按照半保留复制的机制沿着模板链延伸直至完成新的DNA合成，重复这一过程，即可使目的DNA片段得到扩增。

  • 第7题：

    简述循环伏安法基本原理。


    正确答案:控制电极电势以不同的速率，以等腰三角形的脉冲电压加在工作电极上，电势范围是使电极上能交替发生不同的还原和氧化反应。如果起始电压U1开始按一定方向做线性扫描达到Us后，将扫描反向，以相同的速率回到原来的起始扫描电压U1。若开始扫描方向使工作电位不断变负，某物质在电极上产生被还原的阴极过程。而相反时则会发生氧化的阳极过程。一次三角波的扫描可以完成一个氧化-还原的循环。得到的曲线有还原波和氧化波，曲线的上下部基本对称。

  • 第8题：

    当点突变没引起任何限制性酶切位点的改变时，可采用的基因诊断技术是（）。

    • A、PCR-ASO
    • B、AS-PCR
    • C、PCR-SSCP
    • D、测序
    • E、PCR-RFLP

    正确答案:A,B,C,D

  • 第9题：

    细胞粘附分子基因的多态性测定的验证方法是（　）

    • A、PCR-SSCP
    • B、PCR-RFLP
    • C、实时荧光PCR方法
    • D、PCR-直接测序法
    • E、时间分辨荧光免疫测定法

    正确答案:D

  • 第10题：

    Sanger法测序的基本原理是什么？


    正确答案:Cambridge的Sanger在1977年发明用双脱氧链终止法测定单链DNA的序列，其基本原理如下：
    ①DNA聚合酶能够用单链DNA作为模板，合成准确的DNA互补链；
    ②该酶能够用2’，3’--双脱氧核苷三磷酸作底物并将其聚合到新生寡核苷酸链的3’-末端，从而终止其延伸反应。
    在DNA测序反应中，加入模板DNA，引物（特异性引物），DNA聚合酶，dA，dT，dG，dC和一种ddNTP。常用Klenow大片段，无5’→3’外切酶活性。
    进行聚合反应，DNA新生链延长，当掺入ddNTP时，聚合反应终止。

  • 第11题：

    问答题
    何谓基因？简述基因测序的基本原理及其在基因诊断中的应用价值？

    正确答案： （1）基因是指能够为生物大分子（主要是蛋白质，还有tRNA、rRNA等核酸）编码的DNA片段。基因不仅可以通过复制把遗传信息传递给下一代，还可以使遗传信息得到表达。不同人种之间头发、肤色、眼睛、鼻子等有所不同，是基因差异所致。从这个意义上讲，基因就是能够表达一定基因产物的DNA序列。
    （2）DNA的序列分析即核酸一级结构的测定，是现代分子生物学中一项重要技术，也是基因诊断的第一手资料。传统的测序方法多采用放射性核素标记，手工进行DNA复制或裂解反应、凝胶电泳分离DNA片段，放射自显影以及人工判断核苷酸序列等程序来测定DNA序列。这无疑是费时的、准确性较差的方法。近年来发展起来的自动测序使DNA序列分析工作标准化、规范化、工厂化，极大地促进了DNA结构的研究。新型DNA自动测序仪，采用荧光染料标记技术及毛细管电泳方法进行测定，配合同步激光扫描读序，测定反应、灌胶、进样、电泳、扫描检测、数据分析全部实现了计算机程序控制的自动化，加快了检测速度，大大提高了测定的精确性。
    解析： 暂无解析

  • 第12题：

    问答题
    简述PCR技术的基本原理。

    正确答案： P.CR技术的基本原理：类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：1）模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；
    2）模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；3）引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。（Plateau）。到达平台期所需循环次数取决于样品中模板的拷贝。
    解析： 暂无解析

  • 第13题：

    链末端终止法中的PCR循环测序法采用的DNA聚合酶是

    A、大肠埃希菌DNA聚合酶

    B、Klenow片段

    C、测序酶

    D、序列酶

    E、Taq DNA聚合酶


    参考答案：E

  • 第14题：

    简述PCR基本原理。


    本题答案：PCR技术是模拟生物体内DNA的半保留复制，在体外合成DNA链的方法，在模板、DNA、引物、dNTP、Taq酶存在的条件下经过：
    “高温变性→低温退火→中温延伸”三步循环，获得大量扩增片段。

  • 第15题：

    细胞黏附分子基因的多态性检测的验证方法是

    A.PCR-SSCP
    B.PCR-RFLP
    C.实时荧光PCR测定技术
    D.PCR-直接测序法
    E.以上都不是

    答案：D
    解析：
    PCR-直接测序法直接测得目的基因的序列，是最为准确的验证方法。

  • 第16题：

    目前最为常用的基因多态性检测方法是

    A.原位PCR
    B.PCR-RFLP
    C.PCR-测序
    D.PCR-SSCP
    E.荧光PCR

    答案：B
    解析：

  • 第17题：

    说明PCR的基本原理、PCR体系的基本组成及其作用。


    正确答案:该技术是在模板DNA、引物和四种脱氧核糖核苷酸存在下，依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应。DNA聚合酶以单链DNA为模板，借助一小段双链DNA来启动合成，通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链DNA模板中的一段互补序列结合，形成部分双链。在适宜的温度和环境下，DNA聚合酶将脱氧单核苷酸加到引物3´-OH末端，并以此为起始点，沿模板5´→3´方向延伸，合成一条新的DNA互补链。
    PCR反应的基本成分包括：模板DNA（待扩增DNA）、引物、4种脱氧核苷酸（dNTPs）、DNA聚合酶和适宜的缓冲液。类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的高温变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的低温退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；③引物的适温延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链重复循环变性-退火-延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。

  • 第18题：

    简述PCR技术的基本原理。


    正确答案: P.CR技术的基本原理：类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：1）模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；
    2）模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；3）引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。（Plateau）。到达平台期所需循环次数取决于样品中模板的拷贝。

  • 第19题：

    何谓PCR？试述PCR技术的基本原理和影响因素。


    正确答案: P.CR是一种体外酶促扩增特异DNA片段的技术，其原理类似DNA的体内扩增。它包括：PCR包括三个基本过程：①变性（denaturation），即在较高温度（93℃～98℃）使双链模板DNA变性解链成单链DNA，以提供复制的模板；
    ②退火（annealing），即在较低温度（37℃～65℃）使加入的引物与待扩增DNA区域特异性地结合，以提供DNA复制起始的3′―OH；
    ③延伸（extension），即在适当的温度（70℃～75℃）下，DNA聚合酶从特异性结合到DNA模板上的引物3′-OH端开始，根据碱基互补配对原则，按照待扩增区域的核苷酸序列，进行DNA链的延伸，即合成新的DNA分子。这三个过程组成一个循环周期；每个周期合成的产物又可作为下一个周期的模板，如此循环往复，经过n轮循环后，靶DNA的拷贝数理论上呈2n增长。
    影响PCR反应的因素主要有：引物、TaqDNA聚合酶、dNTP、模板和Mg2+离子，此外，pH、温度、循环次数也会影响PCR反应。

  • 第20题：

    对PCR扩增产物进行测序分析的HLA基因分型法是（）

    • A、PCR-RFLP
    • B、PCR-SSCP
    • C、PCR-SSOP
    • D、SBT
    • E、PCR-SSO

    正确答案:D

  • 第21题：

    链末端终止法中的PCR循环测序法采用的DNA聚合酶是（）

    • A、大肠埃希菌DNA聚合酶
    • B、Klenow片段
    • C、测序酶
    • D、序列酶
    • E、TaqDNA聚合酶

    正确答案:E

  • 第22题：

    问答题
    简述PCR基本原理。

    正确答案： PCR技术是模拟生物体内DNA的半保留复制，在体外合成DNA链的方法，在模板、DNA、引物、dNTP、Taq酶存在的条件下经过：
    “高温变性→低温退火→中温延伸”三步循环，获得大量扩增片段。
    解析： 暂无解析

  • 第23题：

    问答题
    简述PCR循环测序的基本原理。

    正确答案： PCR技术能够快速、特异性地扩增靶DNA，应用PCR技术测定DNA序列分为两个步骤：先利用PCR扩增靶序列片段，制备测序模板，然后再利用PCR直接测定序列。PCR测序采用了热循环高效合成DNA的特性并结合双脱氧核苷酸终止法，使引物链终止的延伸产物数量在热循环过程中得到增加，因此称为循环测序。
    每个测序循环包括：
    ①PCR扩增制备的模板DNA变性成单链形式；
    ②标记引物与其中的一条链上的互补序列退火；
    ③退火后的引物在耐热DNA聚合酶催化下发生链延伸终止反应。
    本次循环产生的模板链与延伸终止链形成的双链的产物，在下一轮测序循环中，再次被变性，释放出模板链，作为又一轮引发反应的模板，同时积累下一轮循环产生的链终止产物。
    上述循环步骤重复20~40次，使链终止产物以线性方式获得扩增。
    解析： 暂无解析

  • 第24题：

    问答题
    何谓PCR？试述PCR技术的基本原理和影响因素。

    正确答案： P.CR是一种体外酶促扩增特异DNA片段的技术，其原理类似DNA的体内扩增。它包括：PCR包括三个基本过程：①变性（denaturation），即在较高温度（93℃～98℃）使双链模板DNA变性解链成单链DNA，以提供复制的模板；
    ②退火（annealing），即在较低温度（37℃～65℃）使加入的引物与待扩增DNA区域特异性地结合，以提供DNA复制起始的3′―OH；
    ③延伸（extension），即在适当的温度（70℃～75℃）下，DNA聚合酶从特异性结合到DNA模板上的引物3′-OH端开始，根据碱基互补配对原则，按照待扩增区域的核苷酸序列，进行DNA链的延伸，即合成新的DNA分子。这三个过程组成一个循环周期；每个周期合成的产物又可作为下一个周期的模板，如此循环往复，经过n轮循环后，靶DNA的拷贝数理论上呈2n增长。
    影响PCR反应的因素主要有：引物、TaqDNA聚合酶、dNTP、模板和Mg2+离子，此外，pH、温度、循环次数也会影响PCR反应。
    解析： 暂无解析

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