第8题:
问答题
杂交育种是工业微生物育种中常用的育种方式,请用细菌为例说明杂交育种的原理和步骤。
正确答案:
杂交育种(Hybridization)一般是指人为利用真核微生物的有性生殖或准性生殖,或原核微生物的接合、F因子转导、转导和转化等过程,促使两个具不同遗传性状的菌株发生基因重组,以获得性能优良的生产菌株。
细菌杂交育种,包括杂交亲本的选择,亲本菌株遗传标记的确定.不同性别菌株的制备,重组体形成和检出。
现以大肠杆菌为例介绍如下:
1.杂交亲本菌株选择、标记菌株和性别菌株的获得
(1)杂交亲本菌株,根据试验选择不同遗传特性的两亲本菌株,并且要带一定选择性标记和非选择性标记。这些携带有一定选择性标记和非选择性标记而用于杂交配对的菌株为直接亲本。
(2)标记菌株,常用的标记为营养缺陷。
(3)性别菌株的获得:F’菌株,当F’菌株和F-菌株接合并把F因子转移到F菌株中,从而使F菌株转变为F’菌株;F菌株.把F’菌株用不足以抑制其生长的低浓度(约30vg/m1)吖啶橙处理店,就可以转变为F—菌株;HJr菌株,Hfr菌株是通过F’菌株和F菌株杂交获得的。方法是将A平皿上的F’菌株菌落影印到铺有F—菌株的基本培养基B平板上,经培养后,在B平皿上因个别细胞杂交而以现重组体菌落,这样就可以在A平皿上的相应位置上获得Hfr菌株。
细菌杂交一般采用直接混合法:将两个直接亲本菌株,如Hfr菌株和F菌株分别培养至对数期,取适量移人新鲜肉汤培养液中,置于37℃下振荡培养,细胞浓度约达2x108个/m1.然后将Hfr菌株和F菌株细胞以1:10或1:20的比例混合,在37℃水浴中缓慢振荡,以利于菌株细胞间接触和接合,在注意保温和良好通气条件下培养一定时间,让亲本菌株间的染包体进行连接、交换和重组。杂交后的混合液用缓冲液稀释,分离到基本培养基上或其他选择性培养基上,培养后可得到各种原养型的重组体的菌落。基本培养基上带有营养缺陷型标记的两亲本都不能生长,从基本培养基上分离到的就是各种重组菌株或其他杂交后代。
解析:
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